• Journal of Plant Biology
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• 제35권2호
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• pp.165-171
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• 1992

rbcL 유전자 발현조절에 관한 연구의 일환으로 Cp DNA로부터 분리한 rbcL 유전자를 클로닝하였다. 옥수수의 엽록체로부터 DNA를 분리한 후 제한효소 BamHI으로 절단하여 rbcL 유전자가 포함된 BamHI 9 절편을 pUC19에 클로닝하여 재조합 플라스미드 pRLYS1을 만들었다. 쌀의 rbcL 유전자 일부를 probe로 사용하여 pRLYS1과 Southern hybridization한 결과와 제한효소 BamHI, HindIII, 그리고 PstI으로 절단된 pRLYS1 절편의 전기영동 결과로부터 재조합 플라스미드의 내부에 완전한 rbcL 유전자의 존재를 확인하였고 삽입방향을 결정하였다.

• 대한의생명과학회지
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• 제15권4호
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• pp.295-300
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• 2009

Tuberculosis caused by Mycobacterium tuberculosis (MTB) still remains to be the most dreadful infectious disease affecting almost every country. In the present study, we developed a simple and rapid but accurate and sensitive assay method for detecting MTB using microplate hybridization assay. For this, a selective region of the rpoB gene was used to design PCR primers, and MTB and Mycobacterium genus-specific probe molecules. The specificity of the assay was confirmed using fifteen different mycobacterial reference strains and twelve different non-mycobacterial reference strains, and the sensitivity was determined to be 100 fg using genomic DNA of MTB reference strain, H37Rv. Subsequently, a total of 62 sputum samples with diverse smear scores and culture positive results were used to evaluate the kit performance. In brief, the specificity and the sensitivity of the assay were 100% and 98.4%, respectively.

• Animal cells and systems
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• 제2권4호
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• pp.529-538
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• 1998

In order to analyze the intracellu1ar localization of specific RNA components of ribonucleoproteins (RNP) in Xenopus oocytes, a modified protocol of whole-mount in situ Hybridization is presented in this paper, Mitochondria specific 12S rRNA probe was used to detect the amplification and distribution of mitochondria in various stages of the oocyte life cycle, and the results were found to be consistent with previously known distribution of mitochondria. The results with other specific probes (U1 and U3 small nuclear RNAs, and 5S RNA) also indicate that this procedure is generally effective in localizing RNAs in RNP complexes even inside organelles. In addition, the RNA component of RNase MRP, the RNP with endoribo-nuclease activity, localize to the nucleus in various stages of the oocyte life cycle. Some of MRP RNA, however, were found to be localized to the special population of mitochondria near the nucleus, especially in the active stage of mitochondrial amplification. It suggests dual localization of RNase MRP in the nucleus and mitochondria, which is consistent with the proposed roles of RNase MRP in mitochondrial DNA replication and in rRNA processing in the nucleolus.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제31권2호
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• pp.117-123
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• 2003

공시균인 Saccha. erythraea IFO 13426으로부터 VB-C에 의한 erythromycin 생산 유도능이 시사된 바 있으므로, 공시균으로부터 VB-C와 특이적으로 결합하는 autoregulators 및 receptor gene을 탐색하여, EM의 생산 조절 기구를 규명하고자 하였다. 탐색의 일환으로 기존의 Streptomyce속 receptor gene의 공통배열을 primer로 이용하여 PCR을 수행하였고, 예상 크기인 120bp의 단편을 pUC19 vector에 ligation하여 E. coli DH5$\alpha$에 형질전환한 후, plasmid를 분리하여 BamHI을 처리하여 2% agarose gel에 전기영동한 결과, pUC19 (2.7kbp)외에 receptor gene PCR 산물이 120bp위치에 존재하는 것을 확인하였다. 형질전환된 plasmid로 PCR을 수행하여 염기배열을 결정한 후 해석한 결과 Streptomyces sp. 유래의 receptor gene과 유사함을 확인하였다. 따라서 Saccha. erythraea IFO 13426에는 항생물질인 erythromycin의 생산에 관여한다고 추정되는 autoregulator receptor protein을 코드하는 유전자가 존재할 것으로 예상되어 120 bp의 PCR product를 probe로 이용하여 Southern 및 colony hybridization을 통하여 3.2 kbp의 SacI 단편을 가지는 plasmid(pESG)를 제작하였고, 이를 sequencing한 결과, autoregulator receptor protein 유전자가 KpnI과 SalI을 포함하는 영역에 존재한다는 것을 알 수 있었으며 이를 EsgR이라 명명하였다. 유전자 해석 결과, EsgR은 205개의 아미노산으로 구성되어 있으며, 이는 기존의 autoregulator receptor proteins과 비교시 30%이상의 상동성을 나타내었으며, 기존의 autoregulator receptor prorein들이 하부의 항생물질 생합성 유전자들의 제어를 위해 보유하고 있는 helix-turn-helix DNA binding motif를 EsgR이 보유하고 있는 점에서, EsgR은 Saccha. erythraea가 보유하는 autoregulator receptor protein을 code하는 유전자로 추정되었다.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제46권4호
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• pp.547-554
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• 2004

텔로미어란 진핵세포에 존재하는 DNA-protein 복합체로서 염색체의 말단부에 tandem repeated DNA 서열(TTAGGG)n과 특정 단백질로 구성되어 있으며 세포 분열이 진행함에 따라 이의 길이가 짧아지게 되고 일정 길이 이하가 되면 세포의 사망이 유기된다. 텔로미어의 역할은 게놈의 보호자로서 염색체의 안정성에 본질적으로 작용할고 감수분열시 상동염색체간의 접합에 주된 작용을 하는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 소와 돼지의 성축에 대한 텔로미디어의 핵형과 각 염색체상 텔로미어의 양적 분포 양상을 제시하고자 Holstein과 Landrace를 공시하고 이들로부터 섬유아세포 배양으로 중기상을 획득한 다음 human telomeric DNA probe를 이용하여 형광접합보인법(FISH)으로 분석하였다. 실험 결과 소와 돼지의 모든 염색체의 양 말단부에 뚜렷한 텔로미어 프로브의 접합 양상을 발견할 수 있었다. 소의 경우 염색체들 간 텔로미디어의 양적 변이가 나타났으며 돼지의 경우는 모든 분석된 세포에서 특이적으로 6q1의 위치에 interstitial telomere가 존재하였다. 양적형광접합보인법(Q-FISH) 분석 결과 일부 염색체에서 한쪽 말단의 텔로미어 함량이 유의적으로 높은 것으로 분석되었고, 전체적으로 거의 모든 염색체에서 소, 돼지 공히 q-arm 말단주의 함유율이 p-arm 말단부에 비해 높은 것으로 나타났다. 또한, 염색체상 텔로미어의 상대적 함유율은 소가 돼지에 비해 높게 나타났으며, 전체 염색체 중 텔로미어의 상대적 함유율은 소, 돼지 모두 Y 염색체에서 가장 높았다.

• 한국수산과학회지
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• 제30권1호
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• pp.46-54
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• 1997

분열효모 S. pombe의 포자형성은 배지상의 질소원의 고갈에 의하여 유도되어진다. 감수분열로부터 포자형성에 도달하는 과정에는 다수의 특이적인 유전자가 기능을 하고 있다. 본 연구에서는, 전포자막 구축에 필수적인 유전자 spo 5의 발현조절과 유전자의 메커니즘에 관하여 조사하였다. spo 5 유전자를 보유하는 약 5kb의 Hind III DNA 단편을 cloning 하였다. 이 단편으로부터 제한효소지도를 작성하여 얻어진 DNA 단편을 probe로 하여, RNA blot-hybridization를 이행하였다. 이 결과, 최소배지의 hetro matting-type 균주 (CD16-1)로 부터 조제한 mRNA가 검출되었다. 그리고 이 전사산물을 전사레밸에서 해석하기 위하여, homo matting-type (CD16-3) 균주를 질소원이 함유되지 않은 포자형성배지에서 배양한 후, 동일한 방법으로 mRNA를 조제하여 Northern hybridization으로 조사하였다. 그 결과, 이들 세포에서는 3.2kb에서만 전사산물이 검출되었으며, 2.5kb의 mRNA는 검출되지 않았다. 이상의 결과로 부터 spo 5 유전자를 coding하는 전사산물인 2.5kb의 mRNA는 질소원의 고갈된 상태하에서, 접합형 유전자좌의 hetro 접합성을 요구하는 것으로 입증하였다. spo 5 유전자의 전사발현은 질소원이 결핍과 접합형 유전자좌의 구성에 따른 환경요인과 유전적 요인에 의해서 제어되어지고 있다는 것을 입증하였다.

• 대한두경부종양학회지
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• 제16권1호
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• pp.14-19
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• 2000

Objectives: Epstein-Barr virus(EBV) is a B-lymphotrophic virus with a tumorigenic potential. EBV infection has been recognized as the main cause of nasopharyngeal carcinoma and Burkitt's lymphoma. Bcl-2 protein expression is known to be up-regulated by the EBV-latency associated antigen latent membrane protein(LMP). The aim of this study was to determine the incidence of EBV in squamous cell carcinomas of the larynx and the relationship between the presence of EBV and bcl-2 expression. Patients and Methods: From January 1994 to December 1977, 35 patients with primary squamous cell carcinoma of the larynx were studied. EBV genome DNA was surveyed by polymerase chain reaction(PCR) assay and then compared the results of in situ hybridization(ISH) for EBER1 using digoxigenin-tailed oligonucleotide probe. The expression of bcl-2 protein was studied by immunohistochemistry(IHC) using bcl-2 monoclonal antibody. Results: By PCR, EBV genome was detected in 22 of 35(62.9%) squamous cell carcinomas of the larynx. Nineteen of 35 cases(54.3%) showed a positive nuclear staining for EBER1 in tumor cells by ISH. Three cases showed positivity in inflammatory cells by ISH and one of them showed a positive staining of both tumor cells and inflammatory cells. Eighteen of 32 specimens(62.5%) were positive for bcl-2 protein. There was no significant correlations between the presence of EBV DNA and bcl-2 expression. Conclusions: It could be concluded that high incidence of EBV in the laryngeal cancer tissue may indicate a probable role of EBV in the development of laryngeal carcinoma.

• BMB Reports
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• 제38권4호
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• pp.386-390
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• 2005

Based on the reported cDNA sequences of $BmK{\alpha}Txs$, the genes encoding toxin $BmK{\alpha}Tx11$ and $BmK{\alpha}Tx15$ were amplified by PCR from the Chinese scorpion Buthus martensii Karsch genomic DNA employing synthetic oligonucleotides. Sequences analysis of nucleotide showed that an intron about 500 bp length interrupts signal peptide coding regions of $BmK{\alpha}Tx11$ and $BmK{\alpha}Tx15$. Using cDNA sequence of $BmK{\alpha}Tx11$ as probe, southern hybridization of BmK genome total DNA was performed. The result indicates that $BmK{\alpha}Tx11$ is multicopy genes or belongs to multiple gene family with high homology genes. The similarity of $BmK{\alpha}$-toxin gene sequences and southern hybridization revealed the evolution trace of $BmK{\alpha}$-toxins: $BmK{\alpha}$-toxin genes evolve from a common progenitor, and the genes diversity is associated with a process of locus duplication and gene divergence.

• 원예과학기술지
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• 제33권1호
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• pp.83-92
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• 2015

xBrassicoraphanus line BB#5, a new synthetic intergeneric hybrid between Brassica rapa L. ssp. pekinensis and Raphanus sativus L. var. rafiphera induced by N-methyl-N-nitroso-urethane mutagenesis in microspore culture, shows high seed fertility and morphological uniformity. Dual-color fluorescence in situ hybridization (FISH) using 5S and 45S rDNA probes and genomic in situ hybridization (GISH) using B. rapa genomic DNA probe were carried out to analyze the chromosome composition and the meiosis pairing pattern compared to its parental lines. The somatic chromosome complement is 2n = 38, which consists of 17 metacentric and two submetacentric chromosomes with lengths of 2.18 to $5.01{\mu}m$. FISH karyotype analysis showed five and eight pairs of 5S and 45S rDNA loci. GISH meiosis pairing analysis showed that 19 complete bivalents were most frequent and accounted for 42% of the 100 pollen mother cells examined. Based on chromosome number, size, morphology, rDNA distribution, and meiosis pairing pattern, both parental genomes of B. rapa and R. sativus appear to exist in xBrassicoraphanus line BB#5, demonstrating its genome integrity. Such stable chromosome constitutions and meiotic pairing patterns in somatic and meiotic cells are very rare in natural and synthetic intergeneric hybrids. Chromosomal studies and genetic and phenotypic changes in allopolyploids a re discussed. The results p resented h erein will b e usef ul f or f urther g enomic s tudy o f xBrassicoraphanus lines and their improvement as promising new breeding varieties.

• 미생물학회지
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• 제35권3호
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• pp.192-196
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• 1999

Fusarium 균 중에서 section Liseola 에 속하는 8균주에 대하여 CHEF-PFGE를 이용하여 핵형을 분석비교하였다. 0.75 Mb에서 6.45Mb 크기의 DNA band가 9~13개로 분리되었고 전체 genome 크기는 38.19 Mb에서 43.22Mb 였으며 종간, 종내에서 염색체 길이 다형성을 볼 수 있었다. F. moniliforme 로부터 얻은 IGS sequence(2.6Kb), Neurospora crassa 의 chs-2 gene(2.8Kb) 과 trp-3gene(3.8 Kb)을 probe로 하여 hybridization을 통하여 이들 gene 의 위치를 확인하고자 하였다.