Han, Sang-Kuk;Jo, Jong Won;Kim, Chang Sun;Kwag, Young-Nam;Sung, Gi-Ho
한국균학회소식:학술대회논문집
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2014.05a
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pp.17-17
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2014
Over five thousand higher fungal specimens were collected from 32 forest areas of Chungcheong and Gyeongsang province from 2012 to 2013. We obtained 513 strains and 3,120 ITS sequences. Mushrooms were first identified with macro- and micro-scopic characters, and their identification was confirmed on the basis of ITS sequences. Voucher specimens were designated for each species found in Korea. Construction of DNA barcoding Database is currently underway with sequences of 409 species. During the development of the database, some new species were recognized, along with several Korean new records. When the system has been completed, it will provide essential molecular information for metagenomic and phylogenetic researches for higher fungi.
The establishment of a DNA barcode database at the regional scale and assessments of the utility of DNA barcodes are crucial for conservation biology and for the sustainable utilization of biological resources. Schisandraceae is a small family consisting of ca. 45 species. It contains many economically important species, such as Schisandra chinensis, which is widely used as a source in tonic beverages and in oriental medicine. In Korea, three species, S. chinensis, S. repanda, and Kadsura japonica, are distributed. We evaluated the level of variation of the DNA sequences of rbcL, matK, and the ITS regions from 13 accessions representing the distributional range of the three species. The three DNA barcode regions were easily amplified and sequenced. The minimum values of the interspecific genetic distances among S. chinensis, S. repanda, and K. japonica either separately or in combination are 4- to 23-fold higher than the maximum value of the intraspecific distance, showing that there is a clear DNA barcoding gap in the regions for Korean Schisandraceae. Phylogenetic analyses of the three DNA barcode regions, separately and simultaneously, indicate that all of the DNA barcode regions are useful for identifying a species of Schisandraceae in Korea. The distinctiveness of the three species of Schisandraceae was also supported at the species level when Chinese and Japanese populations were added. The results of this study indicate that three concatenated regions constitute the best option for DNA barcoding in Schisandraceae in Korea.
The applications of DNA barcoding have a wide range of uses, such as in taxonomic studies to help elucidate cryptic species and phylogenetic relationships and analyzing environmental samples for biodiversity monitoring and conservation assessments of species. After obtaining the DNA barcode sequences, sequence similarity-based homology analysis is commonly used. This means that the obtained barcode sequences are compared to the DNA barcode reference databases. This bioinformatic analysis necessarily implies that the overall quantity and quality of the reference databases must be stringently monitored to not have an adverse impact on the accuracy of species identification. With the development of next-generation sequencing techniques, a noticeably large number of DNA barcode sequences have been produced and are stored in online databases, but their degree of validity, accuracy, and reliability have not been extensively investigated. In this study, we investigated the extent to which the amount and types of erroneous barcode sequences were deposited in publicly accessible databases. Over 4.1 million sequences were investigated in three largescale DNA barcode databases (NCBI GenBank, Barcode of Life Data System [BOLD], and Protist Ribosomal Reference database [PR2]) for four major DNA barcodes (cytochrome c oxidase subunit 1 [COI], internal transcribed spacer [ITS], ribulose bisphosphate carboxylase large chain [rbcL], and 18S ribosomal RNA [18S rRNA]); approximately 2% of erroneous barcode sequences were found and their taxonomic distributions were uneven. Consequently, our present findings provide compelling evidence of data quality problems along with insufficient and unreliable annotation of taxonomic data in DNA barcode databases. Therefore, we suggest that if ambiguous taxa are presented during barcoding analysis, further validation with other DNA barcode loci or morphological characters should be mandated.
Food poisoning accidents caused by poisonous plants occur every year. As certain poisonous plants are mistaken for edible plants causing food poisoning, accurate species identification of poisonous plants is required. DNA barcodes suitable for species identification of poisonous plants and database that can be used for accurate species identification are necessary for their use in forensic cases. In this study, species identification of 19 poisonous plants native to Jeju Island using seven DNA barcodes (trnH-psbA, trnL-trnF, trnL intron, rbcL, matK, ITS1-ITS4, 18S rRNA) was performed to construct a database containing sequence information and DNA barcode universality. trnL-trnF barcode and ITS1-ITS4 barcode were the easiest markers for PCR amplification and sequence retrieval, and the combination of the two barcodes enabled single species identification in 18 out of 19 plants. Therefore, when an investigation of unknown poisonous plants is requested, combination of trnL-trnF and ITS1-ITS4 barcodes is considered as a primary marker for species identification. The database of recommended DNA barcodes for each poisonous plant presented in this study will be helpful in plants poisoning cases.
The marine interstitial annelid Pharyngocirrus uchidai(Sasaki, 1981) has been only known from Japan. In this study, we report the occurrence of P. uchidai for the first time in four localities along the eastern coast of Korea: Bukmyeon, Gamchu, Gase, and Oeongchi. Species identification was confirmed by comparison of DNA barcoding sequences with morphological examination from the type locality, Oshoro, Japan. We generated a total of 25 sequences of a partial segment (580 bp) of the cytochrome c oxidase subunit I gene (COI), representing five specimens from each locality. Maximum intra-specific variation was 1.2% in terms of Kimura two-parameter (K2P) distance, observed between two individuals each from Gamchu (i.e., between two specimens from the single locality), Gamchu and Oeongchi, Gamchu and Oshoro, and Oeongchi and Oshoro. On the other hand, an identical haplotype was found in all the five localities, substantiating our species identification for the Korean populations. Inter-specific K2P distance between P. uchidai and an unidentified Saccocirrus sp. from Canada (based on public database entries) was 22.4-23.4%.
A major concern regarding the collection and storage of biodiversity information is the inefficiency of conventional taxonomic approaches in dealing with a large number of species. This inefficiency has increased the demand for automated, rapid, and reliable molecular identification systems and large-scale biological databases. DNA-based taxonomic approaches are now arguably a necessity in biodiversity studies. In particular, DNA barcoding using short DNA sequences provides an effective molecular tool for species identification. We constructed a large-scale database system that holds a collection of 5531 barcode sequences from 2429 Korean species. The Korea Barcode of Life database (KBOL, http://koreabarcode.org) is a web-based database system that is used for compiling a high volume of DNA barcode data and identifying unknown biological specimens. With the KBOL system, users can not only link DNA barcodes and biological information but can also undertake conservation activities, including environmental management, monitoring, and detecting significant organisms.
DNA barcoding without assessing reliability and validity causes taxonomic errors of species identification, which is responsible for disruptions of their conservation and aquaculture industry. Although DNA barcoding facilitates molecular identification and phylogenetic analysis of species, its availability in clariid catfish lineage remains uncertain. In this study, DNA barcoding was developed and validated for clariid catfish. 2,970 barcode sequences from mitochondrial cytochrome c oxidase I (COI) and cytochrome b (Cytb) genes and D-loop sequences were analyzed for 37 clariid catfish species. The highest intraspecific nearest neighbor distances were 85.47%, 98.03%, and 89.10% for COI, Cytb, and D-loop sequences, respectively. This suggests that the Cytb gene is the most appropriate for identifying clariid catfish and can serve as a standard region for DNA barcoding. A positive barcoding gap between interspecific and intraspecific sequence divergence was observed in the Cytb dataset but not in the COI and D-loop datasets. Intraspecific variation was typically less than 4.4%, whereas interspecific variation was generally more than 66.9%. However, a species complex was detected in walking catfish and significant intraspecific sequence divergence was observed in North African catfish. These findings suggest the need to focus on developing a DNA barcoding system for classifying clariid catfish properly and to validate its efficacy for a wider range of clariid catfish. With an enriched database of multiple sequences from a target species and its genus, species identification can be more accurate and biodiversity assessment of the species can be facilitated.
Abraham Okki, Mwamula;Oh-Gyeong Kwon;Chanki Kwon;Yi Seul Kim;Young Ho Kim;Dong Woon Lee
The Plant Pathology Journal
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v.40
no.2
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pp.171-191
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2024
Identification of Helicotylenchus species is very challenging due to phenotypic plasticity and existence of cryptic species complexes. Recently, the use of rDNA barcodes has proven to be useful for identification of Helicotylenchus. Molecular markers are a quick diagnostic tool and are crucial for discriminating related species and resolving cryptic species complexes within this speciose genus. However, DNA barcoding is not an error-free approach. The public databases appear to be marred by incorrect sequences, arising from sequencing errors, mislabeling, and misidentifications. Herein, we provide a comprehensive analysis of the newly obtained, and published DNA sequences of Helicotylenchus, revealing the potential faults in the available DNA barcodes. A total of 97 sequences (25 nearly full-length 18S-rRNA, 12 partial 28S-rRNA, 16 partial internal transcribed spacer [ITS]-rRNA, and 44 partial cytochrome c oxidase subunit I [COI] gene sequences) were newly obtained in the present study. Phylogenetic relationships between species are given as inferred from the analyses of 103 sequences of 18S-rRNA, 469 sequences of 28S-rRNA, 183 sequences of ITS-rRNA, and 63 sequences of COI. Remarks on suggested corrections of published accessions in GenBank database are given. Additionally, COI gene sequences of H. dihystera, H. asiaticus and the contentious H. microlobus are provided herein for the first time. Similar to rDNA gene analyses, the COI sequences support the genetic distinctness and validity of H. microlobus. DNA barcodes from type material are needed for resolving the taxonomic status of the unresolved taxonomic groups within the genus.
A universal DNA barcoding for agricultural noxious weeds is a powerful technique for species identification without morphological knowledge, by using short sections of DNA from a specific region of the genome. Two standard barcode markers, chloroplast rbcL and matK, and a supplementary nuclear ribosomal Internal Transcribed Spacer (ITS) region were used to examine the effectiveness of the markers for Pooideae barcoding using 163 individuals of 29 taxa across 16 genera of Korean Pooideae. The rbcL and ITS revealed a good level of amplification and sequencing success while matK did not. Barcode gaps were 78.6% for rbcL, 96.2% for matK, and 91.7% for ITS, respectively. Resolving powers were 89.3% for rbcL, 92.3% for matK, and 79.1% for ITS. The matK obtained the best both barcode gap and resolving power. However, it should be considered not to employ matK for Pooideae barcode because of low rate of PCR amplification and sequencing success. As a single DNA marker, rbcL and ITS were reasonable for Pooideae barcode. Barcode gap and resolving power were increased when ITS was incorporated into the rbcL. The barcode sequences were deposited to the National Center for Biotechnology Information (NCBI) database for public use.
Parrots have been threatened by global trade to meet their high demand as pets. Controlling parrot trade is essential because parrots play a vital role in the ecosystem. Accurate species identification is crucial for controlling parrot trade. Parrots have been traded as eggs due to their advantages of lower mortality rates and more accessible transport than live parrots. A molecular method is required to identify parrot eggs because it is difficult to perform identification using morphological features. In this study, DNAs were obtained from 43 unidentified parrot eggs using a non-destructive sampling method. Partial cytochrome b (CYTB) gene was then successfully amplified using polymerase chain reaction (PCR) and sequenced. Sequences newly obtained in the present study were compared to those available in the GenBank by database searching. In addition, phylogenetic analysis was conducted to identify species using available sequences in GenBank along with sequences reported in previous studies. Finally, the 43 parrot eggs were successfully identified as seven species belonging to two families and seven genera. This non-destructive sampling method for obtaining DNA and molecular identification might help control the trade of parrot eggs and prevent their illegal trade.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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