• 한국식품영양과학회지
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• 제28권1호
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• pp.87-93
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• 1999

This study was carried out to investigate the effects of nucleic acid related compounds and metal ions on activities of cytidine deaminase from Bacillus subtilis ED 213. The purified cytidine deaminase was weakly inhibited by 1mM GMP, IMP and ATP, but not affected by other nucleic acid related compounds such as CMP and UDP. The apparent Km values for cytidine, deoxycytidine, 5 methylcy tidine, fluorodeoxycytidine, and 5 bromocytidine were calculated to be 6.6$\times$10-4M, 6.0$\times$10-4M, 0.9$\times$10-4M, 0.8$\times$10-4M, and 2.0$\times$10-3M, respectively. The cytidine deaminase was completely inhibited by 1mM Hg2＋, and mildly inhibited over 40% by metal ions such as Na＋ and Fe2＋. However the enzyme activity was activated more than 40% by 1mM Mg2＋.

• 환경생물
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• 제21권1호
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• pp.60-65
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• 2003

The cytidine deaminase was partialy purified with sephadex G-200 and the characteristics of the enzyme were clarified. The molecular mass of the plasmid-encoded protein was identified as about 30 kDa in a minicell system. The native enzyme was estimated to have the molecular mass of 60 kDa by gel filtration. This indicates that the native enzyme may exist as a dimer composed of two identical subunits. The enzyme was reasonably stable in the pH range of 6 to 9, and was labile under high temperature above $50^{\circ}C$. Mercaptoethanol, pCMB, mercury and copper were found to inhibit the enzyme activity. The cytidine analogues of bromo- and iodo-(deoxy)-cytidine were also found to inhibit the activity, while fluorodeoxycytidine and azacytidine were found to activate it. Deoxycytidine, cytidine, ara-C and Methyldeoxycytidine have excellent substrates for the enzyme.

• 대한화학회지
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• 제35권1호
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• pp.38-45
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• 1991

Proteus mirabilis균과 organelle를 NH$_3$ 기체감응전극에 고정시켜 cytidine에 대한 바이오센서를 제조하였다. 박테리아 센서에 대한 pH, 온도, 완충용액, 균량 및 방해물질의 영향과 수명을 조사하였다. 그 결과 0.1M phosphate 완충용액에서 pH 7.8, 온도 30$^{\circ}C$, 균량 3mg이었을 때, 5.0 ${times}$ 10$^{-4}$M ∼ 1.0 ${times}$ 10$^{-2}$M cytidine 직선범위 내에서 56 mV/decade 의 감응기울기를 나타내었다. 이 박테리아 전극의 감응특성을 organelle 전극의 경우와 비교하였다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제21권3호
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• pp.279-285
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• 1992

황산암모늄 분획 (35-60%) 효소액을 사용하여 Aspergillus fumigatus IFO 5840의 cytidine deaminase에 대한 효소학적 성질을 조사하였다. 효소반응의 전처리시간은 25분이었으며 본 효소의 최적pH와 최적온도는 각각 6.8-7.2와 $37^{\circ}C$부근이었다. PH에 대한 안정성은 pH7.2에서 9.0의 범위에서 안정하였으며 온도의 안정성은 4$0^{\circ}C$에서 10분 열처리시 대체로 안정하였으나 6$0^{\circ}C$에서 20분간 처리시는 77%의 효소실활을 나타내었고 7$0^{\circ}C$에서 25분간 처리하였을때 완전히 실활되었다. 본 효소의 활성화 에너지 값(Ea)은 14.190kca1/mo1이었고 온도계수 ($Q_{10}$ )는 2.163이었다.

• 대한화학회지
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• 제36권2호
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• pp.218-222
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• 1992

시티딘은 장미조직이 가지고 있는 시티딘 디아미나제에 의해 우리딘과 암모니아 기체를 생성한다. 이 장미조직 50mg을 암모니아 기체감응센서에 고정시켜 장미조직센서를 제조하고, 수용액 중의 시티딘을 정량하는데 최적 실험조건을 조사하였다. pH8.4, 온도 37$^{\circ}C$, 0.2M 인산 완충용액을 사용하였을 때 시티딘의 농도가 $7.0 {\times}10^{-4}$에서 $1.0{\times}10^{-2}$M까지 직선이었고, 53mV/decade의 감응기울기를 나타내었다. 검출한계는 $3.0 {\times} 10^{-4}$ M 상대표준편차는 3.4%였다. 또한 이 조직센서는 선택성이 탁월하였다.

• 한국미생물생명공학회:학술대회논문집
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• 한국미생물생명공학회 1986년도 추계학술대회
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• pp.512.2-512
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• 1986

A mutant of bacillus subtilis with a defective cdd gene encoding deoxycytidine-cytidine deaminase(EC 3.5.4.5.) has been characterized genetically. The genetic lesion causing the altered deoxycytidine-cytidine deaminase, cdd, was mapped at 225 min on the linkage map of B.subtilis by AR9 transduction Transductional analysis of the cdd region established the gene order as trp-lys-dnaE-cdd-aroD. The cdd gene was linked 72% with the aroD and 20% with the lys.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권6호
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• pp.536-539
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• 1988

A mutant of Bacillus subtilis with a defective cdd gene encoding deoxycytidine-cytidine deaminase (EC 3.5.4.5) has been characterized genetically. The genetic lesion, cdd, causing the altered deoxycytidine-cytidine deaminase was mapped at 225 min on the linkage map of B. subtilis by AR9 transduction, Transductional analysis of the cdd region established the gene order in clockwise as trp-lys-cdd-aroD. The cdd gene was linked 72% with the aroD and 20% with the lys.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권6호
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• pp.640-646
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• 1990

E.coli의 cytidine deaminase(cytidine/2'-deoxy-cytidine aminohydrolas` EC 3.5.4.5)를 코딩하는 cdd 유전자를 E.coli cdd- pyr- 결손 변이주를 cloning host로 하여 southern blotting과 colony hybridization을 통하여 클로닝하였다. cdd 유전자가 단편인, cdd 유전자의 transcription initiation 부위의 23개 nucleotide를 합성한 후 probe로 사용하여 Southern hybridization에 의해 회수된 cdd 유전자를 함유한 단편을 얻었으며, 이를 pBR322에 삽입한 후 형질전환하여 colony hybridization한 결과 cdd+ cell을 얻었다. 삽입된 DNA 단편의 size는 27kb이었으며 이를 결실 및 subcloning을 연속 수행한 결과 2.1kb의 SalI/ DraI fragment(pTK605)에 cdd 유전자가 location 되어 있음을 알게 되었다. Mini cell 실험결과 합성된 cytidine deaminase의 활성이 pBR322에서 증폭시킴으로서 37배 정도 배가되었으며, pBR322에 비해 pUC vector계에서 다시 활성이 7배 정도 증가됨을 알 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제1권2호
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• pp.116-120
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• 1991

The transformant Bacillus subtilis ED213 carrying the pSO100 which cloned the cdd gene encoding cytidine deaminase (cytidine /2'-deoxycytidine aminohydrolase, EC 3.5.4.5, CDase) originated from wild type B. subtilis was cultivated in Spizizen minimal medium (SMM). To overcome poor expression of the cdd gene in SMM medium, the medium compositions and growth conditions were optimized. The optimized medium compositions and growth conditions were cytidine concentration of 80 mg/l, glycerol of 25 g/l, and $(NH_4)_2SO_4$ of 10 g/l, along with $37^{\circ}C$ and pH 7.0. The intracellular CDase production was increased 3 times from 1,000 unit/ml to 3,200 unit/ml, and extracellular CDase also increased from nearly undetectable amounts to 1,500 unit/ml. The cytidine concentration was signified as the most critical compositional factor for overproduction of CDase by increasing the cell density mainly in culture broth. The plasmids were more stable in cells that were grown in original SMM medium with stability of 90% compared to those grown in optimized SMM medium with stability of 80% after 48 hours cultivation. The most active amplification of plasmid was occurred in the logarithmic phase, which showed a value around four times higher than the initial copy number. In the exponential phase, the CDase production was closely related to the plasmid copy number along with the cell density. However, it was not accorded with cell density at the stationary phase.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권4호
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• pp.334-342
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• 1989

Bacillus stearothermophilus의 cytidine deaminase (cytidine/2'-deoxycytidine aminohydrolase：EC 3.5.4.5)를 코딩하는 cdd 유전자를 E. coli cdd$^-$ 결손변이주를 cloning host로 하여 3-10Kbp의 B. stearothermophilus DNA 단편으로부터 shot gun 법으로 클로닝하였다. 고 복제수 플라스미드 pBR322 의 PstI 부위에 3.0Kb의 B. stearothermophilus DNA 단편을 함유한 pJSC101이 cdd$^+$와 tetracy-line 내성으로서 cloning되었으며, 이어서, 결실 및 subcloning을 연속 수행한 결과 약 1.35kbp의 Eco RI$_1$/PstI$_2$단편이 동일 부위의 pBR322에 삽입된 cdd 양성의 pJSC201을 얻었다. Mini 세포 실험결과, 이 단편에서 합성되는 polypeptide는 약 33 KDa이었기에 이 polypeptide가 cytidine deaminase 로 추정되었다. 또한 이 단편에 함유한 550bp의 EcoRI/AvaI 부분을 lacZ 프로모터 영역에 삽입한 경우 프로모터 활성을 나타내었기에 이 단편의 Eco RI 부위에서 PstI부위로 cdd 유전자가 전사됨을 알 수 있었다. B. subilis와 E. coli에서 발현이 가능한 shuttle vector에 cdd가 함유된 단편을 삽입한 후 이를 양세포에서 동시 발현시켰을 때 B. subtilis에서 발현시킨 경우가 E. coli에서 보다높은 cytidine deaminase 활성을 나타내었으며 이 유전자는 B. subtilis 에서도 E. coli에서와 같이 안정하게 유지됨을 알 수 있었다.