Three isolates of Cucumber mosaic virus isolated from Commelina communis plants showing chlorosis and mosaic were collected in Chungju and Chuncheon, Korea. To confirm genetic variation of these three isolates (CMV-Co, CMV-Co2, and CMV-Co3), we performed PCR-RFLP and sequence analysis. Sequences of coat protein genes of CMV-C0, -Co2 and -Co3 were compared with CMV-Fny and showed 96.3%, 96.3%, and 95.9% similarities, respectively. In host reactions, three CMV-Co isolates induced systemic necrosis in Cucurbita pepo unlike CMV-Fny and CMV-Co, CMV-Co2 and CMV-Co3 observed differential symptoms responses in Physalis angulata and Nicotiana rustica. These results indicated that three isolates of CMV isolated from C. communis have genetic and biological variation.
Based upon the nucleotide sequence of As strain of cucumber mosaic virus (CMV-As0 RNA4, coat protein (CP) gene was selected for the design of oligonucleotide primers of polymerase chain reaction (PCR) for detection and identification of the virus. Reverse transcription and polymerase chain reaction (RT-PCR) was performed with a set of 18-mer CMV CP-specific primers to amplify a 671 bp fragment from crude nucleic acid extracts of virus-infected leaf tissues as well as purified viral RNAs. The minimum concentrations of template viral RNA and crude nucleic acids from infected tobacco tissue required to detect the virus were 1.0 fg and 1:65,536 (w/v), respectively. No PCR product was obtained when potato virus Y-VN RNA or extracts of healthy plants were used as templates in RT-PCR using the same primers. The RT-PCR detected CMV-Y strain as well as CMV-As strain. Restriction analysis of the two individual PCR amplified DNA fragments from CMV-As and CMV-Y strains showed distinct polymorphic patterns. PCR product from CMV-As has a single recognition site for EcoRI and EcoRV, respectively, and the product from CMV-Y has no site for EcoRI or EcoRV but only one site for HindIII. The RT-PCR was able to detect the virus in the tissues of infected pepper, tomato and Chinese cabbage plants.
Gladioli (Gladiolus hybridus) showing flower colour breaking leaf mosaics, notched leaf, and dwarfing or lack of visible symptoms were collected from gladioli growing areas in Taegu and Kyungpook province, Korea. The three viruses isolated from the naturally infected gladioli were identified as broad bean wilt virus (BBWV), cucumber mosaic virus (CMV), and tobacco rattle virus (TRV) by their host range, immunosorbent electron microscopy (ISEM), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), direct tissue blotting immunoassay (DTBIA), and intracellural symptoms. By DTBIA and ISEM, TRV was detected in gladiolus showing notched leaf, while CMV was frequently detected in gladioli with dwarfing, color breaking and malformation of flowers. BBWV was also often detected in many symptomless gladiolus plants, but TRV was detected in notched-leaf of gladiolus. Electron microcopic examination of negatively stained preparations showed that BBWV and CMV are spherical particles of 28 nm and 30 nm in diameter, and TRV is rigid rod-shaped particles of 40∼200 nm in length. The rigid rodshaped virus particles reacted positively with TRV antiserum in ISEM and DTBIA, respectively.
A mosaic disease of gladiolus has been commonly observed with an infection rate of $43.3\%$ in the field. Bean Yellow Mosaic Virus(BYMV) produced veinal spreading lesions on Cheonopodium amaranticolor, veinal necrosis and severe leaf distortion on Phaseolus vulgaris 'Scotia' and mosaic on Vi cia faba. Cucumber Mosaic Virus(CMV) produced local lesions on C. amaranticolor, mosaic symptoms on Nicotiana glutinosa and Cucumis sativus. BYMV and CMV were transmitted by the green peach aphid. Purified BYMV and CMV had a typical maximum absorption at 260nm. In agar gel diffusion test, BYMV and CMV gave positive reaction with their homologous antiserum. The size of BYMV was 750nm in length, and CMV was 30nm in diameter.
Proceedings of the Korean Society of Plant Pathology Conference
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2003.10a
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pp.4-8
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2003
Cucumber mosaic virus (CMV) belongs to genus Cucumovirus. The Cucumovirus group contains three distinct members: CMV, Tomato aspermy virus (TAV), and Peanut stunt virus (PSV). The type member, CMV is the most widespread and most studied. CMV is isometric particles about 30 nm in diameter. The genome of CMV is divided into three RNAs. In addition, RNA extracted from virus particles contains a fourth RNA that is a subgenomic RNA generated from RNA3. RNA1 and RNA2 are each encapsidated in separate particles, whereas RNAs3 and 4 are coencapsidated in a third particle. Hence, inoculation by three particles, transmitted either mechanically or by the aphid vector, is required to infect plants.(중략)
In 1995, we collected stock (Matthiola incana) plants causing mosaic symptoms on leaves and color breakings on flowers in Daekwallyong, Korea. Two viruses were isolated from the infected plants, and identified as cucumber mosaic virus (CMV) and turnip mosaic virus (TuMV) by experiments of host range, serology and electron microscopy. Each of the virus did not produce the same symptoms on the stock seedlings as naturally infected plants caused. When the viruses were coinoculated to the stock seedlings, however, severe mosaic symptoms were observed on leaves, and then the color breakings were expressed on flowers.
Samples showing yellow mosaic symptom of Lilium spp. with necrotic fleck, stunting, malformation, and colour breaking were collected from lily-growing areas in the southern part of Korea. Two viruses were distinguished under a electron microscope and their host range, serological reaction, stability in sap, type of aphid transmission, and relations with cells and tissues were examined. Broad bean wilt virus (BBWV) was transmitted by sap-inoculation to 23 plant species in 8 families and by the aphid, Myzus persicae. This virus was inactivated after 10 min at 70C, at dilution of $10^{-3}$, and after 6 days at about 20C. Electron microscopic examination of purified preparation showed that the virus is spherical particle of 28nm in diameter. The virus reacted positively with BBWV-antiserum in agar gel diffusion test. In ultrathin sections of BBWV infected tissues, large aggregates or crystalline array of virus particles and vesicular body were found in the cytoplasm, vacuole, and nucleus of mesophyll cells. Cucumber mosaic virus (CMV) was transmitted by sap-inoculation. Electron microscopic examination of its purified preparation showed spherical particles of 30nm in diameter. The virus reacted positively with CMV-Y strain-antiserum in agar gel diffusion test. In ultrathin sections of CMV infected tissues, crystalline array of virus particles were found in the vacuole and a large number 0f virus particles were found in the cytoplasm and the plasmodesmata of mesophyll cells. When each of these viruses was retransmitted to Lilium tigrinum. L. concolor, and L. auratum, BBWV induced slight symtoms and colour breaking, but CMV induced yellowing mosaic or necrotic fleck.
Petunia hybrida is commonly used in landscapes and interiors for its attractive flower. Virus-like foliar symptoms, including a mosaic with dark green islands surrounding the veins and chlorosis on the leaf margins, were observed on a petunia plant from Icheon, Gyeonggido, Korea. Cucumber mosaic virus (CMV) was identified in the symptomatic petunia by serological testing for the presence of CMV coat protein (CP) with a direct antibody-sandwich-enzyme-linked immunosorbent assay. An agent was mechanically transmitted to indicator plant species including Chenopodium quinoa. Examination of the inoculated plant leaves by RT-PCR analysis and electron microscopy revealed the presence of specifically amplified CP products and spherical virions of approximately 28 nm in diameter, respectively, providing confirmation of a CMV infection. Analysis of CP sequences showed that CMV petunia isolate (CMVYJC) shared 82.5-100% amino acid sequence identity with CPs of representative CMV strains. Phylogenetic analysis of CPs supports that CMV-YJC is a member of CMV subgroup IA (CMV-IA) and has biological properties of CMV-IA on host species. To our knowledge, this is the first report of CMV from P. hybrida in Korea.
Reverse transcription and polymerase chain reaction (RT-PCR) techiniques were used to identification and differentiation of cucumber mosaic virus isolated from Forsythia koreana (CMV-Fk). RT-PCT used by two set of 20-mer primers one was CMV-common primers and another was CMV subgroup I-specific primers designed in a conserved region of the 3' end of CMV RNA3, amplified about 490 bp and 200 bp DNA fragments from CMV-Fk, respectively. CMV could be detected by RT-PCR at a dilution as low as 10-4 in forsythia crude sap extracts. Restriction enzyme analysis of RT-PCR products using EcoRI and MspI showed that CMV-Fk belonged to CMV subgroup I. But, analysis of RNA fingerprinting by arbitrarily primed polymerase chain reaction (RAP-PCR) showed heterogeneity of RNA3 between CMV-Fk and CMV-Y as a member of subgroup I.
Aster yomena로부터 분리한 오이 모자이크 바이러스(cucumber mosaic virus) (CMV-As)의 RNA4로부터 완전한 길이의 cDNA를 합성하고 그 전체적인 염기서열(1,043 nt`s)을 결정하였다. CMV-As RNA4는 73개의 염기로 구성된 5`말단의 leader 부위, 657개의 염기로 구성된 외피단백질(coat protein) 유전자 부위 및 312개의 염기로 구성된 3` 말단의 비번역 부위로 구성되어 있음을 확인하였다. 외피단백질 유전자 부위의 염기서열을 다른 계통의 CMV와 비교해 볼 때 그 염기서열이 보전적으로 존재하고 있으나 그 외의 부분은 다양함을 확인하였다. 특히 3` 말단부위의 61개의 염기로 구성된 부위(959-1019)는 다른 계통의 CMV에서는 상당히 유사하지만 CMV-As도 다른 CMV처럼 tRNA와 유사한 구조를 역시 형성함을 확인하였다. CMV-As의 RNA4 염기서열을 다른 계통의 CMV와 비교할 때 CMV-I17F와 가장 유사하였으며(91.9%) S형의 CMV-M과는 가장 낮은 동일성을 보였다(71.1%). 외와 같은 염기성열의 비교 결과와 EcoRI 제한효소 인식부위의 존재로 미루어 CMV-As는 WT형으로 분류된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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