• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제37권1호
• /
• pp.39-46
• /
• 1999

As a preliminary study for the explanation of pathobiology of Neodiplostomum seoulense infection. a 54 kDa protease was purified from the crude extract of adult worms by sequential chromatographic methods. The crude extract was subjected to DEAE-Sepharose Fast Flow column, and protein was eluted using 25 mM Tris-HC1 (pH 7.4) containing 0.05. 0.1, 0.2 and 0.4 M NaC1 in stepwise elution. The 0.2 M NaCl fraction was further purified by Q-Sepharose chromatography and protein was eluted using 20 mM sodium acetate (pH 6.4) containing 0.05, 0.1. 0.2 and 0.3 M NaCl, respectively. The 0.1M NaCl fraction showed a single protein band on SDS-PAGE carried out on a 7.5-15% gradient gel. The proteolytic activities of the purified enzyme were specifically inhibited by L-trans-epoxy-succinylleucylamide (4-guanidino) butane (E-64) and iodoacetic acid. The enzyme, cysteine protease. showed the maximum proteolytic activity at pH 6.0 in 0.1 M buffer, and degraded extracellular matrix proteins such as collagen and fibronectin with different activities. It is suggested that the cysteine protease may playa role in the nutrient uptake of N. seoulense from the host intestine.

• 한국식품조리과학회지
• /
• 제27권3호
• /
• pp.29-37
• /
• 2011

국내산 무화과(Ficus carica L.) 중의 조효소를 추출하고 단백분해 조효소의 활성도를 측정하였다. 무화과를 균질화하여 원심분리한 조효소액은 41.15 mM/g fig의 활성을 나타내었으며 단백질 침전 후 조효소액은 17.65 mM/g fig의 활성을 나타내었다. 무화과 조효소액의 기질 특이성은 casein > egg white > BSA > myofibrilar protein > collagen > elastin 등의 순이었다. 무화과 단백질 분해 조효소의 안정성을 보면 pH 6.5~9.0에서 안정하며 pH 2~3의 강산에서는 실활하였다. 또한 $60^{\circ}C$까지는 역가의 변화가 거의 없으며 그 이상의 온도에서는 급격히 활성의 감소를 보이고 있다. 염에 대해서는 0.7 M 정도의 소금 농도에서까지는 비교적 안정하나 그 이후로는 안정성이 떨어지는 것으로 나타났다. 조효소활성에 대한 pH의 영향을 보면 pH 7~8에서 높은 활성을 나타냈으며 근원섬유에 대한 단백 분해능이 pH에 매우 민감한 것으로 나타났다. 무화과 단백질 분해 조효소의 활성은 $40^{\circ}C$ 이후부터 조효소의 활성이 증가하기 시작하여 $60^{\circ}C$에서 최적 활성을 나타내었고 그 이상의 온도에서 점차적으로 다시 감소하였다. $80^{\circ}C$에서도 근원섬유에 대한 단백 분해활성은 최고치에 비해 50% 정도에 해당하는 것으로써 무화과 조효소가 비교적 온도에 민감하지 않았다. 또한 염 농도는 최적 활성에 큰 영향을 미치지 않았다. 무화과를 사용한 sauce 등을 제조할 때에 이러한 특성들을 이해한다면 우리나라 육류 요리용의 우수한 연육제품을 제조할 수 있을 것이다.

• 한국식품과학회지
• /
• 제42권5호
• /
• pp.554-558
• /
• 2010

본 연구는 국내산 키위에서 추출한 protease의 특성을 규명하고자 실시하였으며 지금까지 연구되어 오지 않은 근원섬유에 대한 단백분해 활성을 측정하였다. 국내산 키위 crude 효소액은 시료를 buffer에 넣고 균질화한 원심분리액과 포화황산암모늄 처리 후 투석한 두 단계의 시료로 나누었다. 각각은 21.23 mM/mL와 11.58 mM/mL의 활성을 나타내었고 이를 처음 사용하였던 키위의 양으로 환산하면 112.28 mM/g kiwifruit과 45.80 mM/g kiwifruit이었다. 국내산 키위 crude 효소액의 기질에 때한 특이성에서는 카제인과 근원섬유에 대해 높은 활성을 보였으며 그 다음으로 bovine serum albumin, egg white, collagen, elastin 순이었다. 국내산 키위의 단백분해 효소는 pH 2-3에서는 실활하였으며 $60^{\circ}C$ 이상의 온도 범위에서는 급격히 실활하였다. 국내산 키위 crude 효소액은 pH 3.0과 pH 7.5 두 곳에서 최적활성을 나타냈고, 최적온도는 카제인을 기질로 한 경우 $40^{\circ}C$에서, 근원섬유 $50^{\circ}C$에서 최적온도를 나타냈다. 키위 단백질 분해 효소의 카제인에 대한 활성은 염도가 0.5M일 때까지 매우 높다가 급격히 떨어졌으나 근원섬유에 대한 활성은 염의 농도가 높아짐에 따라 서서히 떨어졌다. 키위는 조리중에 연육작용을 위하여 주로 쓰여지고 있으며, 위의 결과로써 우리나라 육류조리와 같이 재워두는 육류조리방법에도 키위가 좋은 연육효과를 나타낼 수 있음을 보였다.

• 대한본초학회지
• /
• 제26권4호
• /
• pp.89-94
• /
• 2011

Objective : Kyenegum has been frequently used for characterizing digestive symptoms in the traditional and oriental medicines. This study was conducted to investigate the characteristics of extracts from velvet antlers using the 4 different kinds of extracting methods. Methods : The extracts of velvet antlers were extracted using a $65^{\circ}C$ DW (9hrs), a Kyenegum crude enzyme, a $121^{\circ}C$ DW (2hrs), and a Kyenegum protease. To evaluate the characteristic of velvet antler extracts, we examined the brix, soluble solid, amino acid, mineral composition, and collagen protein. Results : As a result of the comparisons of velvet antlers extracted by the traditional extraction and the crude enzyme of kyenegum, the brix and soluble solid showed the higher contents for kyenegum enzymes. Also, mineral contents of the extracted velvet antlers were higher, particularly in Ca and P for those. The contents of collagen protein, hydroxyproline and hydroxylysine, were found to be more than twice in kyenegum protease compared with other extracting methods. Conclusion : These results indicated that the Kyenegum crude enzyme and protease are very effective to extract of velvet antlers.

• 미생물학회지
• /
• 제51권1호
• /
• pp.75-80
• /
• 2015

동해에서 분리된 Pseudoalteromonas donghaensis HJ51는 체외분비 단백질 분해효소를 생산하는 신종 미생물로 보고되었다. 체외 단백질 분해효소의 특성과 최적 생산 조건을 결정하기 위해 crude supernatant을 사용하여 단백질 분해효소의 최적 활성 온도와 pH를 조사한 결과 $40^{\circ}C$와 pH 7.5-10.5이었으며, pH 11에서도 88%의 높은 상대적인 효소 활성을 나타내었다. 효소의 금속 요구성을 조사한 결과, $Fe^{3+}$를 10 mM로 첨가하였을 때 최대 효소활성 증가를 보였다. 최대의 효소생산 조건을 탐색한 결과, 기본배지인 PY-ASW (peptone 0.5%, yeast extract 1.0%, artificial seawater)에 탄소원을 첨가하지 않는 것이 가장 높았으며, 질소원으로는 peptone 보다 beef extract, tryptone, casmino acids을 각각 첨가했을 때 활성이 21, 7, 4% 증가하였다. 이러한 결과를 종합해 볼 때 P. donghaensis HJ51이 생산하는 효소는 알칼리성 pH 환경 및 저온환경에서 활성이 필요한 분야에 응용이 가능할 것으로 사료된다.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제30권3호
• /
• pp.227-230
• /
• 1992

스파르가눔증의 항체검사에서 항원으로 사용하는 스파르가눔 충체추출액의 구성 단백질 중, 환자혈청과 반응 시켜 관찰한 바, 분자량 36 및 31 kDa인 단백질이 항원성이 높았다. 또한 이 두가지 단백질은 스파르가눔 충체의 표피와 표피세포에 분포하여 충체 외부로 분비되는 항원일 것으로 추정하였다. 이 연구단보에서는 이들 두가지 단백질이 분비배설항원에 나타남을 증명하고자 스파르가눔을 $4^{\circ}C{\;}및{\;}37^{\circ}C$ 생리식염수에 30분~100시간 동안 배양하여 분비배설항원을 만들고, 분비배설항원내 단백질 분비량, 단백질의 조성 미치 단백질분해효소의 활성을 각각 관찰하였다. 충체 g당 분비배설항원의 단백질량은 관찰 범위안에서 배양온도에 관계없이 평균 7.7 mg이었다. SDS-폴리아크릴아미드 젤 전기영동상 분비배설항원의 단백질 구성은 분자량 66 kDa 이상인 단백질에서 차이가 있을 뿐 충체추출액의 것과 거의 유사하였다. 물론 분자량 36 및 31 kDa인 단백질도 분비배설항원의 주 구성성분이었다. 분비배설항원의 단백질분해효소 비활성도(比活性度)는 2.9~5.3 units/mg으로 충체추출액의 것과 차이가 없었다. 이미 보고된 스파르가눔의 cysteine protease가 체외로 분비되는 효소라는 것이 사실이라고 추정하게 하는 결과로 생각하였다.

• 한국식품조리과학회지
• /
• 제26권3호
• /
• pp.323-329
• /
• 2010

국내산 무화과, 키위, 배, 파인애플은 단백분해효과가 알려져 조리 중에 쓰여지고 있으나 체계적인 연구가 부족한 상태이다. 이에 이들 과실로부터 조효소액을 추출하여 그 특성을 연구하고 과실을 직접 소고기에 처리하여 연육효과를 살펴보고자 하였다. 과실에서 조효소액을 추출한 후 카제인과 근원섬유에 대한 단백분해 능력을 측정한 결과 파인애플 > 키위 > 무화과 > 배의 순서로 나타났다. 이 조효소액을 근원섬유 단백질에 처리하여 전기영동을 실시한 결과 배를 제외하고 조효소액의 농도를 증가시켜 처리할수록 myosin heavy chain이 170,000D 이하로 붕괴됨을 볼 수 있었다. 연육작용 측정에 가장 적합하다고 알려진 소편화율을 관찰한 결과, 파인애플 > 키위 > 무화과 > 배로서 근원섬유단백질 분해 활성의 순서와 같았다. 소고기에 갈은 과육을 5% 및 10%로 처리하였을 때 침지액의 가용성 질소량을 측정한 결과, 과실 처리구 모두에서 대조구보다 높은 가용성 질소량을 나타내었다. 과실을 갈아 소고기에 처리한 후 가열하여 전단력을 측정한 결과, 파인애플이 연육에 가장 효과적인 것으로 나타났으며, 배는 효과가 적은 것으로 나타났다. 소고기에 갈은 과실을 넣고 숙성하여 가열한 후 텍스쳐를 측정한 결과, springiness와 gumminess의 경우 파인애플이 가장 효과적인 것으로 나타났으며 키위도 상당히 효과적인 것으로 나타났다. 과육의 연육효과를 평가한 결과, 5% 첨가시 연도의 경우는 파인애플과 키위가 가장 연한 것으로 나타났고 기호도의 경우 모든 과실에서 10% 첨가보다 5%가 더 높은 기호도를 나타내었다.

• KSBB Journal
• /
• 제16권2호
• /
• pp.158-162
• /
• 2001

A halotolerant and extracellular protease-producing yeast was isolated from traditional Meju and identified as a strain of Hansenular polymorpha by investigating its microbiological characteristics. The optimum pH, temperature and NaCl concentration reauired for the growth of Hansenular polymorpha S-9 were found to be pH 6.0, 30$^{\circ}C$ and 0.5 M, respectively. Extracellular protease was produced maximally at 10 U ml(sup)-1 when Hansenular polymorpha S-9 was grown on the medium containing 1.0% beef extract and 0.1 M NaCl for 12 hr at 30$^{\circ}C$. About 13% of the angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitory activity was shown in the hydrolysates which were obtained from the digestion of soybean protein (6 mg) for 6 hr at 30$^{\circ}C$ by the crude enzyme (1 U).

• 미생물학회지
• /
• 제40권3호
• /
• pp.230-231
• /
• 2004

꽃송이버섯(Sparassis crispa DSMZ 5201)의 균사를 사용하여 균사외 효소활성을 측정하였다. Yeast-malt extract-glucose 배지를 사용하여 $24^{\circ}C$에서 15일간 배양 후 배양여액을 조효소원으로 사용하였을 때, $\alpha$-amylase효소의 활성은 44.27 unit/$mg{\cdot}protein$이었다. 배양여액 중의 Protease, CMCase, $\beta$-glucosidase, chitinase 및 exo-$\beta$-1,4-glucanase의 세포외 효소활성은 상대적으로 높았으나, xylanase 효소활성은 낮게 나타났다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
• /
• 한국응용약물학회 1998년도 Proceedings of UNESCO-internetwork Cooperative Regional Seminar and Workshop on Bioassay Guided Isolation of Bioactive Substances from Natural Products and Microbial Products
• /
• pp.161-161
• /
• 1998

To achieve the aim of this investigation, the extracellular protease was isolated from bacteria BAC-4, a strain was cultivated in the medium for the production of penicillin acilase in a period of 32 hours. The enzyme was first purified by aceton precipitation method, followed by ion exchange chromatography on DEAE-sephacel column. The highest specific activity of the aceton fraction was found to be 2.19 unit per mg, with degree of purification of 13 times. Further purification of the enzyme on DEAE -sephacel had a specific activity of 58.6 unit per mg and degree of purification of 344 times compared to its crude extract. The optimum pH of the enzyme was 8.4, and the potimum temparature was 37$^{\circ}C$. The K$\_$M/ and $V_{max}$ calculated at experiment conditions were found to be 0.66%(W/V) and 3.61 unit per mL respectively.