• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제46권4호
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• pp.279-283
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• 2008

To examine humoral immune responses in the host, we measured serum antibody levels in different strains of mice (ICR, BALB/c, and C3H) experimentally infected with Neodiplostomum seoulense. Specific IgG antibody levels were increased remarkably with little difference among 3 strains of mice infected with N. seoulense from day 7 to 35 post-infection. More target proteins of adult parasites reacted with IgG at the time when the worm recovery decreased compared with other times. More than 20 protein bands, from 14 kDa to 94 kDa in size, were separated from the crude antigen of N. seoulense adults by SDS-PAGE, and among them 26, 30, 35, 43, 54, 67, and 94 kDa proteins were the major antigenic proteins. The results suggest that significant IgG antibody responses occur against N. seoulense in mice and this may be related with expulsion of worms.

• 한국축산식품학회지
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• 제31권2호
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• pp.158-165
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• 2011

A sensitive reverse transcriptase-PCR (RT-PCR) method to detect viable Escherichia coli O157:H7 in milk was established. The primer sets were designed based on the nucleotide sequences of the rfbE (per) and wbdN genes in the O157 antigen gene cluster of E. coli O157:H7. RT-PCR using five different primer sets yielded DNA with sizes of 655, 518, 450, and 149-bp, respectively. All five of the E. coli O157:H7 strains were detected by RT-PCR, but 11 other bacterial species were not. The sensitivity of RT-PCR was improved by adding yeast tRNA as a carrier to the crude RNA extract. The RT-PCR amplifying the 149-bp DNA fragment was the most sensitive for detecting E. coli O157:H7 and the most refractory to the bactericidal treatments. Heat treatment at $65^{\circ}C$ for 30 min was the least inhibitory of all bactericidal treatments. Treatment with RNase A strongly inhibited the RT-PCR of heated milk but not unheated milk. This study described RT-PCR methods that are specific and sensitive with a detection limit of 10 E. coli O157:H7 cells, and showed that pre-treating milk samples with RNase A improved the specificity to detect viable bacteria by RT-PCR.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제45권4호
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• pp.287-293
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• 2007

The identification and characterization of antigens that elicit human T cell responses is an important step toward understanding of Leishmania major infection and ultimately in the development of a vaccine. Micropreparative SDS-PAGE followed by electro transfer to a PVDF membrane and elution of proteins from the PVDF, was used to separate 2 novel proteins from L. major promastigotes, which can induce antibodies of the IgG2a isotype in mice and also are recognized by antisera of recovered human cutaneous leishmaniasis subjects. Fractionation of the crude extract of L. major revealed that all detectable proteins of interest were present within the soluble Leishmania antigens (SLA). Quantitation of these proteins showed that their expression in promastigotes is relatively very low. Considering the molecular weight, immunoreactivity, chromatographic and electrophoretic behavior in reducing and non-reducing conditions, these proteins are probably 2 isoforms of a single protein. A digest of these proteins was resolved on Tricine-SDS-PAGE and immunoreactive fragments were identified by human sera. Two immunoreactive fragments (36.4 and 34.8 kDa) were only generated by endoproteinase Glu-C treatment. These immunoreactive fragments or their parent molecules may be ideal candidates for incorporation in a cocktail vaccine against cutaneous leishmaniasis.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제59권3호
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• pp.257-263
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• 2021

Human gnathostomiasis is a parasitic disease caused by Gnathostoma nematode infection. A rapid, reliable, and practical immunoassay, named dot immuno-gold filtration assay (DIGFA), was developed to supporting clinical diagnosis of gnathostomiasis. The practical tool detected anti-Gnathostoma-specific IgG4 in human serum using crude extract of third-stage larvae as antigen. The result of the test was shown by anti-human IgG4 monoclonal antibody conjugated colloidal gold. The sensitivity and specificity of the test were both 100% for detection in human sera from patients with gnathostomiasis (13/13) and from healthy negative controls (50/50), respectively. Cross-reactivity with heterogonous serum samples from patients with other helminthiases ranged from 0 (trichinosis, paragonimiasis, clonorchiasis, schistosomiasis, and cysticercosis) to 25.0% (sparganosis), with an average of 6.3% (7/112). Moreover, specific IgG4 antibodies diminished at 6 months after treatment. This study showed that DIGFA for the detection of specific IgG4 in human sera could be a promising tool for the diagnosis of gnathostomiasis and useful for evaluating therapeutic effects.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제29권4호
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• pp.389-396
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• 1991

인체아니사키스증은 우리나라에서도 드물지 않게 발생하나 과거에는 수술에 의한 충체의 확인만이 진단이자 치료이어서 진단에 많은 어려움을 겪었다. 그러나 위내시경이 진단과 치료에 이용되면서 많은 중례의 발견을 가져오게 되었다. 그러나 증상이 심하지 않을 경우나 위내시경의 삽입이 어려운 장(장) 아니사키중 또는 만성 아니사키스중을 진단하기 위해서는 혈청학적 방법이 필요하다. 이 연구는 아니사키스중의 혈청학적 진단연구를 위해 붕장어에서 채집한 유충을 토끼에 10마리섹 감염시키고 IsM, IgG 항체의 출현시기와 변화양상을 ELISA와 SDS-PAGE/immunoblot으로 관찰하였다. 그 결과는 다음과 같다. 1. ELISA에 의하여 측정한 19M 항체는 감염 6일부터 증가하여 11일째 최고치에 도달한 후 35일 이후에는 감 염 전의 수준으로 저하하였고 IgG 항체가는 감염 6일부터 증가하여 26일째 최고치에 도달한 후 95일까지 감소하는 양상을 보였다. 2. 7.5∼15% SDS-PAGE에서 아니사키스추출액은 최소 41개 이상의 단백분회 을 나타냈으며 195, 145, 110, 104, 73, 69, 49, 42.5, 40, 34, 30, 24, 20, 16, 14 kDa가 주 분획이었다. 3. Immunoblot에 의해 IgM 항체에 반응하는 주 band는 168, 95, 74, 64, 51, 47, 34 kDa의 5개 band이었다. 4. IgG 항체와 반응하는 항원 분획은 11개 이상 관찰되었고 그 중 168, 92, 85, 64, 58, 52, 42, 40 kDa가 강한 반응을 보였다. 5. 아니사키스추출액 항원과 다른 기생충성 질환자 혈청과의 교차반응은 관찰할 수 없었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제24권1호
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• pp.25-41
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• 1986

뇌낭미충증환자 혈청 및 뇌척수액의 특이 IgG 항체가를 면역효소측정 법으로 측정하였을 때에 이 혈청학적 진단법이 환자진단에 얼마나 유용한지를 평가하였다. 1984년 1월부터 1986년 1월까지 주로 신경학적 중상을 나타낸 환자 355명에서 혈청 및 뇌척수액을 검사하였다. 면역효소측정법에 사용한 항원은 돼지에 자연감염된 유구낭미충의 낭액이며 단백질 농도 $2.5{\mu}g/ml$로 희석하여 사용하였고, 혈청은 1 : 100으로 희석하여, 뇌척수액은 희석하지 않고 반응시켰고 Perozidase-Conjugated Antihuman IgG goat serum(Cappel 회사제품)을 1 : 5,000으로 사용하여 혈청 및 뇌척수액내 유구낭미충 특이 IgG 항체가를 흡광도로 표시하였다. 흡광도 0.18 또는 그 이상을 양성으로 판정하였다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 대상자 355명중 신경외과 수술 및 병리학적 소견으로 확진된 뇌낭미충증 환자 26명, 피하결절 생검에서 낭미충증을 진단하였고 뇌전산화 단충촬영으로 확진한 환자 24명, 뇌전산화 단층환영으로 확진한 21명등 71명에서 면역효소측정법에 의한 특이 IgG항체가 양성자는 64명으로 민감도는 90.1%이었다. 그 중 혈청의 검사에 의한 민감도는 77.5%, 뇌척수액 검사에 의한 민감도는 83.1%로서 뇌척수액 검사가 더 민감한 소견이었다. 뇌낭미충증으로 확진된 환자중 위음성자는 특이 IgG 항체가가 대단히 낮은 예가 대부분이었다. 2. 대상자 355명중 뇌낭미충중 이외의 질환으로 확진된 환자는 52명으로서 그중 7례는 신경외과 수술 및 병리학적 소견에 근거하여 기타 질환으로 확진된 예이며 45례는 세균학적, 방사선학적 소견등을 근거로 기타 질환으로 확진된 예이었다. 이들 중 뇌낭미충 특이항체 검사에서 음성을 보인 예는 46례로서 이 검사의 특이도는 88.5%이었다. 혈청 및 뇌척수액검사에 의한 특이도는 카각 94.2%이었다. 위 양성반응을 보인 예 중에서 혈청 및 뇌척수액에서 모두 양성인 예는 없었다. 3. 혈청내 특이 IgG 항체 검사에 의한 기타 기생충감염자에서의 교차반응의 정도는 다음과 같았다. 무구조충증 18례중 2례, 스파르가눔증 20례중 2례, 폐흡충증 56례중 1례, 간흡충증 15례중 1례, 간질(간질)증 1례중 1례등이 교차반응을 나타내었다. 뇌척수액내 특이 IgG 함체 검사에 의한 교차반응을 뇌폐흡충증 환자 9례 중에는 없었으나 뇌스파르가눔중 환자 10례중 2례는 교차반응을 보였다. 뇌낭미충증으로 확진된 71례중 폐흡충항원에 대해 교차반응을 보인 예는 없었으나 스파르가눔 항원에 대해서는 혈청으로 검사했을 경우 6례, 뇌척수액의 경우 11례에서 교차반응을 나타내었다. 4. 뇌압상승이 있는 뇌낭미충증환자 예에서 뇌실조영술이나 뇌실복막강 단락술 도중 얻은 측뇌실 뇌척수액으로 낭미충 특이 IgG 항체가를 측정하면 측뇌실에 병변이 있지 않는 한 음성 또는 낮은 양성림위의 홉광도를 보이고 있었다. 5. 포도낭미충증 환자 4례중 혈청검사로는 4례중 3례가, 뇌척수액검사로는 검사한 3례 모두가 양성반응을 보였다. 이상의 결과는 혈청 및 뇌척수액내 특이 IgG 항체를 면역효소 측정 법으로 측정하는 혈청학적 진단법이 뇌낭미충증 환자의 감별진단에 매우 유용함을 보이고 있다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제55권3호
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• pp.247-254
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• 2017

ELISA has been used for the diagnosis of toxoplasmosis, but it is being gradually replaced by a rapid diagnostic test (RDT). We compared and analyzed ELISA and RDT results using the sera collected during 4 consecutive years from residents of Gyodong-do (Island), Incheon-city, Korea. Sera from 921, 993, 940, and 838 adult residents were collected on a yearly basis (2010-2013). ELISA was performed by using a crude extract of T. gondii RH strain antigen and IgG/IgM RDT mounted with recombinant fragment of major surface antigen (SAG1), GST-linker-SAG1A, were applied to the sera. Comparison between groups was analyzed by the Student's t-test. The positive seroprevalence surged from 14.7% (135/921, 2010), 23.1% (231/993, 2011), 23.6% (222/940, 2012), and 32.1% (269/838, 2013) by ELISA. In contrast, RDT showed a more moderate increasing trend from 21.7% (200/921, 2010), 25.5% (253/993, 2011), 28.9% (272/940, 2012) and 33.1% (277/838, 2013). Discrepancies between ELISA and RDT were noted near the cut-off value. At the OD 0.15-0.24 range, RDT could detect 16.1% (169/1051) more positives, which suggests an early or acute toxoplasmosis, but at the OD 0.25-0.34 range, ELISA could detect 35.9% (92/256) more positives of possible chronic infections. Over the OD > 0.35 ELISA and RDT agreed in the majority of the cases. This surge in seroprevalence may be caused by the organic agriculture in addition to eating behavior or increase in pets among Koreans. These facts may be applied on a full-scale national survey using RDT to supplement ELISA to define the characteristics of the infection.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제22권2호
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• pp.223-228
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• 1984

외과적으로 충체를 적출하여 진단한 스파르가눔증 환자 7명으로부터 혈청을 수집하고 혈청내 스파르가눔 특이 IgG 항체가를 호소면역 측정 법으로 측정하였다. 스파르가눔 항원은 유혈목이에 자쳔 감염된 충체를 갈아 생리 식염수로 추출한 것으로 단백질 함량은 Smgyxnl이었다. 효소면역측정법은 McLaren 등(1978)의 방법에 따라 실시하였다. 스파르가눔중 환자 혈청이 폐흡충 항원 또는 유구낭미충 항원에 교차반응이 있는지 여부도 측정하였다. 또한 스파르가눔 항원에 대해서 정상인, 케흡충중 환자, 간홉충 감염자, 유구낭미충증 환자와 무구조충 감염자 등 모두 71명에 대해서도 교차반응을 나타내는지 를 관찰하고자 효소면역 측정 법을 실시하였다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 스파르가늠증 환자 7명중 석회화한 스파르가눔에 감염되어 있었고 수술후 1개월에 혈청을 수집한 1례를 제외하면 모두 홉광도 0.3 이상을 나타내었다. 양성판정기준을 흠광도 0.25로 하였을 때 효소면역 측정 법의 민감도(sensitivity)는 85.7이 었다. 2. 기타 기생충 감염자와 정상인 71명중에서 스파르가눔 항원에 대한 특이항체 양성자는 무구조충감염자 3명으로 특이도(specificity)는 97.5%이었다. 3. 스파르가눔중 환자 혈청은 폐흡충 항원 및 유구낭미충 항원에 대해서 항체가는 낮은 값을 보이고 있어 교차 반응은 발견할 수 없었다. 4. 중추신경계를 침범한 스파르가눔중 환자 2례에서 뇌척수액을 희석하지 않은 상태로 효소면역 측정 법을 실시하였던 바 1례는 폐흡충 및 유구낭미충 항원에 대해 교차반응 없이 스파르가눔항원에 대해 높은 항체가를 보인데 비해 다른 1례에서는 스파르가눔 항원 및 유구낭미충 항원에 대해 비슷한 항체가를 나타내고 있었다. 이상의 결과에서 효소면역 측정 법을 이용하여 스파르가눔중을 혈청학적으로 진단하는 경우 매우 특이하고 민감한 결과를 얻을 수 있을 것으로 생각하였다. 스파르가눔중의 수술전 진단이 실제로 어려운 것이 현실이므로 혈청학적 잖단은 역학적 유해조사나 형태학적으로 감별이 어려운 병리소견을 보인 경우 등에서 보조적인 진단법으로 이용할 수 있을 것으로 생각한다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제36권2호
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• pp.127-132
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• 1998

폐포자충증에 대한 이종항혈청의 예방 및 치료효과를 검증하고자 이 연구를 수행하였다. 횐쥐 (위스타)를 15마리씩 나누어 9개 실험군을 설정하고, 스테로이드 주사로 면역억제시켜 폐포자충의 감염을 유발하였다. 흰쥐 유래의 폐포자충 조항원을 토끼에 투여하여 얻은 면역혈청 중에서 IgG 항체만을 분리하여 실험에 사용하였다. 각 실헙군에 따라 면역억제 시작 2주전부터 억제 후 6주후 사이에 면역항체 주입을 시작하였고, 주 2회씩 7곤주 동안 주입하였다 대부분의 실험군에서는 면역항체를 일회에 0.4 ml (단백질량 0.976 mg)씩 주입하였고, 용량에 따른 예방 및 치료효과를 비교하기 위하여 0.2 ml (단백질량 0.488 mg)와 0.6 ml (단백질량 1.464 mg) 주입 실험군을 설정하였다. 그 결과 실험군별로 실험기간인 7틱주간 살아남고 폐에 세균감염이 없는 흰쥐 2-12마리에서 결과를 얻었다. 폐도말검사 결과 모든 개체에서 폐포자충이 확인되었고, 실험군에 따라 포낭형 수의 평균이 최저 13.5 (3군)에서 최고 52.5 (1군) 사이에 있었다. 통계학적인 검증 결과 기준이 되는 1군에 비하여 유의한 병원체의 감소가 확인된 실험군은 0.4 nU의 항체를 주 2회씩 7주간 주입한 3군, 5주간 주입한 4군, 3주간 주입한 5군과, 0.2 U를 7주간 주입한 8군이었다. 면역항체를 0.4 ml씩 9주간 주입한 2군과 항체를 0.6 ml씩 7주간 주입한 9군은 차이가 유의하지 않았다. 이 항체는 폐포자충의 표면에 있는 주항원 당단백질인 MSG (m3iorsurfaceycoprotein) 중에서 40-55, 92, 116, 200 kDa 분획과 주로 반응하였다. 이들 항원 분획이 숙주의 방어기전과 관련된 항체를 유발하는 항훤이며, 이 항원자극에 의하여 형성된 이종항체가 흰쥐의 폐포자충 감 염초기에 수동면역의 효과가 있어 예방이나 치료에 활용될 수도 있음을 확인하였다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제31권1호
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• pp.43-48
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• 1993

요꼬가와흡충증은 주로 은어회를 먹어 감염되는 흡충증으로서 소장염(소장염)을 일으켜 피로 감, 복통, 설사 등 중상이 나타나며 말초혈액 호산구증가를 동반한다. 이 흡충중은 대변에서 충란을 검출하여 진단하나 급성 장염으로 발현하는 환자의 일부에서는 대변검사로 충란을 발견 할 수 없어 보조적인 진단으로 특이항체검사가 필요한 경우가 있다. 이 실험은 요꼬가와흡충증 의 특이항체검사의 가치를 검토하고 검사에서 항원으로 사용하는 피낭유충 생리식염수 추출액 내 특이항원 단백질을 찾기 위하여 실시하였다. 항원으로는 요꼬가와흡충 피낭유충의 추출액을 사용하였고 감염 및 대조혈청은 인상적으로 급성 요로가와흡충증으로 진단한 환자 11명, 간질 (간질) 환자 5명, 간흡충 환자 5명, 폐흡충 환자 5명과 대조군 11명의 것을 사용하였다. 항체 검사로 효소면역측정 법으로 특이 IgG항체를 검사한 결과 임상적으로 진단한 요꼬가와흡충증 환자 11명중 10명이 양성반응을 나타내었다. 요꼬가와흡충 항원에 대하여 다른 흡충 감염자 혈청도 교차반응을 보였으나 동종항원에 대하여 가장 높은 흡광도를 나타내었다. 따라서 특이항체검사에서는 여러가지 흡충항원에 대한 항체검사를 동시에 검사할 필요가 있다고 판단하였다. 항원 구성 단백질을 관찰하기 위하여 7.5-15% gel에서 SDS-PAGE한 결과 항원에서 주(주)단백질대 14개 이상을 구별할 수 있었다. SDS-PAGE/immunoblot을 실시하여 요꼬가와흡충증에서만 반응하는 특이항원대를 검색한 바, 항원 단백질대 대부분이 다른 흡충증 환자 혈청과 교차반응을 나타내었으나 66 및 22 kDa 단백질대는 교차반응이 제일 적어 특이항원 단백질이라고 판단하였다.