• 미생물학회지
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• 제16권1호
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• pp.30-40
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• 1978

Detergent soluble fractions were obtained from T. ferrooxidans ATCC 13598 and the T. thiooxidans ATCC 8085 which were treated with 3% of Tween 20. The detergent soluble antigen(crude antigen) fractions of the T.ferrooxidans and the T.thiooxidans were subjected to hydroxyapatite. In the case of T.thiooxidans, further purification was carried out on the DEAE-cellulose column chromatography. The antigen fractions, such as the hydroxyapatite peak-1(Tf, HA-1) and peak-2 from T.ferrooxidans(Tf. HA-2) and hydroxyapatite peak-1(Tt, HA-1), DEAE-cellulose peak-1(Tt, DP-1) and peak-2(Tt, DP-2) from T. thiooxidans wre compared each other with the homologous and the heterologous and the heterologous antisera against to the Thiobacillus species. The hydroxyapatite peak-2 fraction from the T.ferrooxidans(Tf, HA-2) and DEAE-cellulose peak-2 fraction from the T.thiooxidans(Tt, DP-2) were represented the type-specific immuno-reactivities between the T.ferrooxidans and the T.thiooxidans on the several sets of double gel diffusioin analysis. The type-specific antigen fractions from both of the baceteria were mainly composed of protein with entierly different electrophoretic mobility on the SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. However, the PAS positive banding patterns on the electrophorogram showed wide range of common antigenic properties in the T. ferrooxidans and the T.thiooxidans, respectively.

• 생명과학회지
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• 제18권4호
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• pp.494-502
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• 2008

본 연구에서는 H. pylori의 감염을 예방하고 치료보조제로 사용할 목적으로 포유동물을 통한 피동면역용 항체를 생산하고자 하였다. 따라서 anti-H. pylori 항체를 함유한 면역우유 생산용 백신개발에 기초자료를 얻고자 H. pylori의 면역성과 면역독성에 관한 실험을 수행하였다. 백신을 반복해서 투여했을 때 야기될 수 있는 알레르기 및 과민반응을 예측하고, 페니실린 쇼크와 같은 심각한 부작용 및 독성유발 가능성을 검색하기 위하여 백신의 면역독성을 평가하였다. 전신성 anaphylaxis 쇼크반응의 유무를 평가하기 위해 각 군당 5마리의 guinea pig에 감작투여한 후 최종감작 1주와 2주째에 귀정맥(ear vein)으로 야기항원을 투여하였다. anaphylaxis 쇼크 반응 시험에서 5마리 중 1마리가 양성반응을 나타낸 경우 의약품의 안전성 평가라는 관점에서는 양성으로 판정한다[11]. H. pylori의 WC항원에 대한 1차 및 2차 야기항원 투여 후 전신성 anaphylaxis 쇼크반응에 대한 관찰 결과는 다음과 같다. H. pylori의 WC에 대한 anaphylaxis 쇼크반응은 WC (H) $60\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 항원농도에서 1차, 2차 야기항원 투여 모두 경증의 증상을 나타내었고, WC (L) $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 항원농도에서는 아무런 anaphylaxis 쇼크 증상이 관찰되지 않았다. 그리고 crude urease에 대한 anaphylaxis 쇼크반응은 항원농도가 $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 urease (L)와 $60\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 urease (H) 모두에서 아무런 증상도 관찰되지 않았다. Guinea pig-rat를 이용한 PCA 시험에서는 WC (H), WC (L), urease (H), urease (L) 투여군 모두에서 양성반응이 나타나지 않았다. 피부감작성 시험에서는 항원농도에 따라 각각 $80\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $40\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$ 일 때 피부이상 증상 즉, 피부 트러블이 발생하지 않는 최고의 항원농도는 $40\;{\mu}g/100\;{\mu}l$인 것으로 관찰되었다. 결론적으로 항원성 시험에서 H. pylori로부터 분리된 urease 항원이 WC 항원보다 면역독성 측면에서 좀 더 안전할 것으로 조사되었다.

• 대한바이러스학회지
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• 제27권2호
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• pp.161-168
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• 1997

The present study was designed to estimate the seroprevalence of NLVs among diarrheagenic children and in healthy adults in Seoul and its vicinity with the use of an EIA and an Western blot (WB) based on recombinant Norwalk virus capsid protein (rNV) and crude virus preparations as antigen. Seroconversion was observed in 34 (83%) of 41 tested using the EIA and in 21 (54%) of 39 using the WB, suggesting that the NLVs with epitopes common to rNV are prevalent in Seoul area. Diarrheal children who were known to have been infected with several other strains of the NLVs showed no significant antibody response to the rNV. Infection with rNV occurred earlier in life: primary infections with rNV were common before the age of 6 months and over 91 % of children had evidence of infection by that age by the EIA. Since the amount of the NLV antigens available for seroepidemiologic surveys is limited, we tried to detect NLV antibody by using crude virus preparations as antigen. One crude virus preparation of a child whose stool yielded genetically distinct NLV revealed the presence of the plural number of bands upon SDS-PAGE, but precipitated only one band (62 kDa) after the WB with a serum (collected 10 days after the onset of symptoms) of another diarrheal child. The WB assay we present in this report revealed that the NLVs are prevalent among Korean population and that the sera contained antibody to a single major structural protein, with molecular sizes of 58 to 62 kDa, compatible with the sizes reported for the Norwalk virus and Snow Mountain agent proteins, respectively. When the results of the WB were compared with those obtained by the EIA, the EIA antibody assay was sensitive enough to detect an antibody rise of as much as 4096-fold but not as specific as the WB. The WB assay presented in this paper will provide a powerful tool to elucidate not only antigenic structures of the NL Vs but also seroepidemiology of the NLV infection. The availability of an unlimited source of antigen will enable a large scale serologic studies that will greatly increase our understanding of the role of NLVs in human enteric illness.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제44권1호
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• pp.43-48
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• 2006

Experimental murine models with high, intermediate and low levels of genetically based susceptibility to Leishmania major infection reproduce almost entire spectrum of clinical manifestations of the human disease. There are increasing non-comparative studies on immune responses against isolated antigens of L. major in different murine strains. The aim of the present study was to find out whether there is an antigen that can induce protective immune response in resistant and susceptible murine strains. To do that, crude antigenic extract of procyclic and metacyclic promastigotes of L. major was prepared and subjected to SDS-PAGE electrophoresis. Western-blotting was used to search for antigen(s) capable of raising high antibody level of IgG2a versus IgG1 in the sera of both infected resistant and susceptible strains. Two novel antigens from metacyclic promastigotes of L. major (140 and 152 kDa) were potentially able to induce specific dominant IgG2a responses in BALB/c and C57BU6 mice. The 2 antigens also reacted with IgG antibody of cutaneous leishmaniasis patients. We confirm that 140 and 152 kDa proteins of L. major promastigotes are inducing IgG production in mice and humans.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제27권1호
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• pp.9-14
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• 1989

폐흡충중의 진단은 일반적으로 객담에서 충란을 검출하는 것이 가장 확실한 진단법으로 간주되고 있지만 이소기생의 경우는 물론, 본 기생충의 감염자 및 감염 강도의 감소로 인해 실제 폐에 기생한 경우에 있어서도 객담 검사의 민감도가 매우 낮아져 혈청학적 검사의 필요성이 점차 대두되고 있다. 따라서 식염수 추출액을 항원으로 하여 효소면역 측정법을 실시하는 방법으로 면역 진단을 실시하고 있으나 조항원의 단백 구성이 복잡하여 간흡충을 비롯한 몇몇 흡충류 감염자 혈청에서 교차 반응이 야기되고 있다. 그동안 정제 항원을 만들고자 하는 시도가 많았음에도 불구하고 특이 항원의 분리는 실제로 불가능하였다. 이와 같은 문제점을 보완하기 위하여 폐흡충 조항원을 SDS-PAGE로 전기영동한 다음 EITB를 이용하여 항원대별 항원성 및 특이성을 관찰하여 폐흡충 조항원의 폐흡충증 혈청에 대한 특이 반응대를 확인해 보고자 하였다. 실험에 사용된 항원은 실험적으로 개에 감염시켜 24주만에 얻은 폐흡충 성충의 식염수 추출액이며 3∼20%의 linear gradient gel에서 SDS-PAGE하였다. Silver 염색한 결과 229 kDa∼10kDa 사이에서 26개의 항원대를 구성하고 있었으며 주요 항원대에 대하여 EITB를 실시한 결과 폐흡충 감염자 혈청은 229, 91, 60, 50, 35∼31, 27, 25, 21, 17, 11 및 10kDa의 분자량을 갖는 항원대와 반응하였다. 간흡충 감염자 혈청은 35∼31, 19, 11및 17 kDa의 항원대와 반응하였고 낭미충 감염자 혈청은 229, 31∼31, 27, 25 및 17kDa의 항원대와 반응하였다. 광절열두조충 1예도 17 kDa의 항원대와 반응하였다. 따라서 91, 60, 21 및 10kDa의 항원대 중 일부가 폐흡충 조항원에 있어서 체홉충에 대한 종특이 항원대로 생각되었으며 향후 immunoblot을 이용한 폐흡충중의 면역진단에 이용될 수 있는 항원대로 간주할 수 있었다.

• 농촌의학ㆍ지역보건
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• 제16권1호
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• pp.61-69
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• 1991

Serodiagnosis of Clonorchis sinensis infections will probably be a first choice tool for screening of clonorchiasis in a future because of increasing difficulties in collection and examination of stools. The sensitive test such as ELISA can he used effectively. However there are some limitations in serological diagnosis for the detection of serum antibody. One of the major problems is the non-specificity of the antigens which produce cross reaction with other helminthic infection sera. To solve this problem. many investigators have tried to purify the antigens used. In this study, we determined the antigenic profile of the crude saline extract antigen of C. sinensis at early developmental stage based on SDS-PAGE and immunoblotting techniques for the purpose of understanding the nature of C. sinensis worm antigen The following results were obtained : 1) The SDS-PAGE showed many protein hands ranging from 10Kd to 91Kd relative molecular weight. Among them, 66, 46, 40, 33, 27, 24, 16, 14 and 10Kd bands were observed as a principle bands. The protein components of C. sinensis changed chronologically during their early developmental period. 44Kd band was stained unclearly in antigen of 2 weeks worm, but changed to concentrated state in antigen of 5 weeks worm. 35Kd band was found in antigen of 2 weeks worm, however this band was disappeared in antigen of 5 weeks worm. 22Kd band also lost its staining property gradually. 2) In spite of differences in antigenic profile, there was no differences in the data obtained by microplate ELISA using each antigen preparation. Absorbance value began to rise in between 2 to 3 weeks after infection. 3) By EITB. serum antibody recognized major protein bands with molecular weight of 91, 85, 63, 46, 40, 33, 24, 14 and 10Kd hand respectively. Among them 66, 33, 17 and 14Kd bands were observed as non-specific band because they reacted even in normal control sera. Generally, gradual increase of positive reactions were observed as the infection period of C. sinensis was prolonged. In other hand, the reaction of 10Kd hand did not occurred when 26th week sera was tested. 4) The positive reactions using antigens of 2 weeks worm, especially on 40 and 24Kd bands, were most strong and sharply demarcated compared to those of 3~5 weeks worm antigen.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제21권2호
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• pp.270-280
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• 1983

임상적으로 폐흡충증이 의심되나 충란검출이 안되었던 155예(3예는 충란발견)의 피내반응 양성례에 대하여 Agar-gel Diffusion (AGD)반응, Counterimmunoelectro-phoresis(CIEP)반응 및 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)를 실시하여 이들사이의 상관관계를 검토하였다. AGD 반응과 CIEP 반응은 폐흡충친항원원액(단백농도 7.56mg1m1)과 혈청원연을 사용하였고 ELISA반응에서는 상기 조항원의 40,000배 희석항원을, 그리고 혈청은 100배 및 200배 희석혈청을 사용하였다. 1. AGD 반응과 CIEP 사이의 양성반응의 일치률은 98%이었고 융성반응의 일치률은 100%이었다. 침강대는 AGD 반응에서 1∼3개가 흔히 관찰되었고 CIEP 반응에서는 1∼7개가 관찰되었으며 염색강도도 후자에서 일부의 피검혈청에서 강하게 나타났다. 2. AGD 반응과 ELISA 반응은 사성반응에서는 100배 희석혈청에서 96%, 그리고 200배 희석혈청에서 94%의 일치률을 나타내었고, 음성반응에서는 100석 희석혈청 및 200배 회석혈청에서 각각 97%와 99%의 일치율을 나타내었다. 3. CIEP와 ELISA 반응은 양성반응에서 100배 희석혈청에서는 98%, 200배 희석혈청에서는 96%의 일치률을 나타내었고 융성반응에서는 100배 희석혈청에서 97%, 200배 희석혈청에서 99%의 일치률을 나타내었다. 4. 대조혈청인 간흡충감염 혈청, 아메바감염 혈청 및 Toxoplaima형광항체반응 양성혈청에 대한 AGD 반응, CIEP 및 ELISA 반응은 전례에서 음성이었다. 이상의 결과로 볼 때 반응에 사용된 항원-항혈청의 농도로 보아서는 ELISA 반응의 감수성이 월등히 높았다. 같은 농도의 항원과 혈청을 사용한 AGD와 CIEP 반응에서는 CIEP에서 침강반응의 염색강도가 보다 강하게 나타난 것으로 보아 세가지 반응의 감수성의 높은 순위는 ELISA, CIEP, AGD라고 보여진다. 그러나 본 실험에서 AGD와 CIEP반응에서 ELISA보다 높은 농도의 항원과 항혈청을 사용하였을 때 감수성의 차이는 거의 볼 수 없는 유사한 상관관계의 반응을 나타내었다. 즉 반응방법에 따라 적절한 농도의 항원과 항혈청을 사용한다면 감수성의 차이는 없다고 본다. 세가지 반응의 유효성 으로 볼 때 가장 수기가 간편한 AGD 반응은 조항원을 사용할 때 용이하게 사용할 수 있는 방법이라 생각되며 CIEP는 AGD보다 전기영동장치가 필요한 번거로움이 있으나 보다 조기에 반응 결과를 알 수 있다. 가장 감수성이 예민한 ELISA반응은 항원을 정제하여 소동의 항원으로 다수의 집권집사를 할 수 있는 가장 바람직한 방법이라 생각된다. (본 실험을 수행함에 있어 ELISA 반응을 검사해 주신 연세의대 기생충학교실의 장재경 선생님께 감사드립니다)

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제42권4호
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• pp.169-174
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• 2004

This study was carried out to find out specific proteins from different organs of Clonorchis sinensis. Crude extract, organ-specific and excretory-secretory (ES) proteins were analyzed by immunoblot with infected human sera. The bands of 7- and 17 -kDa were main component of intestinal fluid and ES protein and commonly found in all organ-specific proteins. The 17-kDa protein was observed from ES antigen, intestinal fluid, eggs and sperms, 26- and 28-kDa proteins were from the uterus, vitellaria, and ovary, and 34-, 37-, 43- and 50-kDa proteins were mainly from the testis and sperms. Serum of mice immunized with sperms reacted to the 50-kDa protein by immunoblotting and immunohistochemical staining showed a positive reaction at the seminal receptacle and seminiferous tubule. The present results show that the 7-kDa protein is a common antigen of every part or organ of C. sinensis, but different organs express their specific antigenic protein bands.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제51권6호
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• pp.637-644
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• 2013

This study aimed to investigate the antibody responses in mice immunized with Gnathostoma spinigerum crude antigen (GsAg) incorporated with the combined adjuvant, a synthetic oligonucleotide containing unmethylated CpG motif (CpG ODN 1826) and a stable water in oil emulsion (Montanide ISA720). Mice immunized with GsAg and combined adjuvant produced all antibody classes and subclasses to GsAg except IgA. IgG2a/2b/3 but not IgG1 subclasses were enhanced by immunization with CpG ODN 1826 when compared with the control groups immunized with non-CpG ODN and Montanide ISA or only with Montanide ISA, suggesting a biased induction of a Th1-type response by CpG ODN. After challenge infection with live G. spinigerum larvae, the levels of IgG2a/2b/3 antibody subclasses decreased immediately and continuously, while the IgG1 subclass remained at high levels. This also corresponded to a continuous decrease of the IgG2a/IgG1 ratio after infection. Only IgM and IgG1 antibodies, but not IgG2a/2b/3, were significantly produced in adjuvant control groups after infection. These findings suggest that G. spinigerum infection potently induces a Th2-type biased response.

• Journal of Ginseng Research
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• 제30권3호
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• pp.117-127
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• 2006

본 연구에서는 정관장 홍삼의 물(water) extract, 식용발효 주정 extract 및 홍삼 추출물로부터 분리 제조한 crude saponin을 이용하여 면역반응을 매개하는 수지상세포의 활성 효과에 대하여 알아보았다. 그 결과 홍삼시료 중, crude saponin $100\;{\mu}g/ml$을 처리하였을 때 수지상세포의 세포표면 분자인 MHC class II, CD40, CD80, CD86의 발현이 증가하였으며, phagocytosis는 감소하였다. 또한 홍삼시료를 처리한 수지상세포와 allogeneic T세포를 함께 배양하였을 때, 홍삼시료의 물 extract, 식용발효주정 extract, crude saponin 모두 allogeneic T세포의 증식반응을 유도하였고, IL-2와 $IFN-{\gamma}$의 생산량을 증가시키는 것을 확인하였다. 또한 $CD4^+$ syngeneic T세포와 $CD8^+$ syngeneic T세포의 반응에서도 T세포의 증식반응을 높게 유도하였으며, $CD4^+$ syngeneic T세포에서 IL-2와 $IFN-{\gamma}$의 생산량을 증가시키고, $CD8^+$ syngeneic T세포에서는 $IFN-{\gamma}$ 생산량을 증가시키는 것을 확인하였다. 이상의 결과로 crude saponin의 경우 수지상세포 의 세포표면 공동자극분자의 발현을 유도하고 성숙을 유도함으로써 T세포의 활성을 증진시키는 것으로 생각되며, 물 extract와 식용발효주정 extract는 crude saponin과는 다른 기작으로 T세포 활성화를 유도하는 것을 알 수 있었다. 따라서 실험에 사용한 홍삼시료, 즉 물 extract, 식용발효주정 extract, crude saponin 모두 수지상세포의 활성을 유도하는 물질로써 암항원 특이적 T세포 활성화를 이용한 항암치료에 이용할 수 있는 가능성이 있다고 사료된다.