To investigate the quality of Koji produced by Cordyceps sp., a mixed culture of Aspergillus oryzae and the Cordyceps sp. were inoculated in Koji making. Viable cell counts and counts of fungi spore during Koji making for 120 hours were increased rapidly within 24-48 hours, after then their changes were not shown significantly during Koji making. The activities of amylase and protease in Koji inoculated with the mixed culture of A. oryzae and Cordyceps sp. were superior to one with A. oryzae only. The sensory evaluation on the Koji with 0.5% (w/w) A. oryzae and 0.5% (w/w) Cordyceps sp. were evaluated to be superior to ones. The best quality of Koji is prepared from the mixture of Cordyceps sp. and A. oryzae with the ratio of 0.5% and 0.5% (w/w).
The genetic relationships among six Cordyceps spp. were investigated based on internal transcribed spacer sequences of ribosomal DNA .A portion of the these genes was amplified by PCR. Approximately 590 base pairs were successfully amplified, cloned, sequenced, compared. The nucleotide sequence of the six amplified fragments were aligned by the clustal W program. As a result, Cordyceps militaris shared 87, 96, 98, 90 and 97% sequences homology with Paecilomyces japonica, Paecilomyces sp. J300, Paeciomyces farinosa. Paecilomyces sp. J500 and Cordyceps sinensis, respectively. Paecilomyces japonica also shared 87, 88, 92 and 87% sequence similarity with Paecilomyces sp. J300, Paecilomyces farinosa, Paecilomyces sp. J500 and Cordyceps sinensis, repectively.
Quality characteristics of kochujang made with Aspergillus oryzae-and/or Cordyceps sp.-inoculated koji were investigated. Protease activity of Cordyceps sp.-inoculated koji was higher than that of A. oryzae-inoculated one. Sensory evaluation showed that kochujang made with mixture of A. oryzae-and Cordyceps sp.-inoculated koji (70 : 30, w/w) was superior to others.
The phylogenetic relationships among thirty-two strains (P1~P32; including Cordyceps sp., Paecilomyces sp., Beauveria sp., Aranthomyces sp., Isaria sp. and Himenostilbe sp.) in Miryang region located in the southern part of Korea, were investigated based on internal transcribed spacer (ITS) sequences of ribosomal DNA. A fragment of ITS region was amplified by polymerase chain reaction (PCR) using the specific primer pairs ITS1 and ITS4. After obtained same size of PCR products from various strains, we cloned them into a pGEM-T easy vector to determine their sequences. BLAST analyses of the nucleotide sequence ITS1, 5.8S and ITS2 gene fragments revealed the identity and their phylogenetic relationship. Among 32 strains isolated from Miryang region, Cordyceps militaris was shared 100% sequences with Genbank (AY49191, EU825999, AY491992), while some species are not shared perfectly with reported sequences. For example, strain P17 (P. tenuipes in Ulju-gun Gaji Mountain) has some differences among the other strains of P. tenuipes (Miryang-si Jocheon-eup, Miryang-si Gaji Mountain) and those of gene bank. We conclude that ITS analyses with strains in the suburbs of Miryang in this study can be effectively used as a tool for classification, evaluation and collection of the natural eco-type genetic resources.
Anticomplementary activity of 61 strains of Korean higher fungi was screened for immunostimulation. Extracts from 11 of 61 strains including 5 of Ganoderma lucidum, 3 of Lentinus edodes, 2 of Cordyceps sp. and 1 of Agaricus campestris, showed higher anticomplementary activity than krestin which was immunopotent extract from Japanese Coriolus versicolor. The most potent anticomplementary activity was found with extract from Lentinus edodes IY105 whose complement consumption was 31.7%.
Hepatoprotective effects of polysaccharides extracted from liquid cultured mycelia were screened by measuring the glutamic pyruvate transaminase activity of the primary cultured rat hepatocytes intoxicated with carbon tetrachloride. Sixty among 75 isolates of higher fungi showed to be hepatoprotective effect, and these were 13 of Ganoderma lucidum, 5 of Lentinus edodes, 1 of Pleurotus ostereatus, 4 of Coriolus versicolor, 2 of Lyophyllum spp., 7 of Grifora frondosa, 3 of Agaricus spp., 14 of Schizophyllum commune and 11 of Cordyceps spp.. Especially, 10 isolates, Ganoderma lucidum IY003 and IY009, Lentinus edodes IY103, Lyophyllum sp. IY402, Agaricus sp. IY701 and IY703, Schizophyllum commune IY804, IY810 and IY818, Cordyceps sp. IY902, were indicated below 80% of glutamic pyruvate transaminase activity.
The genus Cordyceps known as an insect parasite forms a sclerotium in insect bodies and then produces perithecia on the single or multiple stromata produced from sclerotium. Collected Cordyceps were identified into 5 species: Cordyceps militaris, C. nutans, Cordyceps sphecocephala, Isaria japonica, and Torrubiella sp. The fruit bodies of Cordyceps in petri-dish cover were fixed by tape and put the lid on water agar plates to isolate these collected Cordyceps. The germinated spores were transferred from water agar to Potato dextrose agar(PDA) after six hours. Mycelial growth of C. nutans and C. militaris was the most successful on Hamada media and was also good on Complete media and PDA. Mannose as a carbon source was good for two species and Glutamic acid as a nitrogen source was satisfactory to C. militaris and Asparagine gave a good result to C. nutans. C. militaris and C. nutans showed similar mycelial growth rate on the media that contained thiamine-HCI, biotine or nicotinic acid as a vitamine. When conidia of C. nutans were inoculated to insects, mortality was high in Artogeia napi L, Hemiptera, Plutella xylostella and 50% in Orthoptera, 12% in Acantholyda posticalise M, but not Agelastica coerulea B. in Aphididae, C. nutans was collected from only Hemiptera in nature, but killing effect on other insects was proved. Mycelial growth and fruit-body formation were good on the media that consist of rice powder 5g, wheat flour 5g, water 100ml, but formed fruit-body was not complete stromata but a mass of conidia according to results of observing microscope.
Many Cordyceps rpp were collected for excellent strains selection at Mts. Moak, Younsuk and Daea-ree herbarium near Wanju-kun from mid May to October,1999. They were identified as the resulting 2 genera and 5 species, 10 strains were got through 5 species culture. Among them 4 species used for induction of artifitial fruiting body and 6 strains of them were selected to excellent strains: Cordyceps militaris (99-0007), Isaria japonica (99-0001, 99-0002, 99-0003), Cordyceps soborifera (99-0008), Cordyceps kanzashiana(99-0009).
The earliest pre-Linnaean fungal genera are briefly discussed here with special emphasis on the nomenclatural connection with the genus Cordyceps Fr. Since its valid publication under the basidiomycetous genus Clavaria Vaill. ex L. (Clavaria militaris L. Sp. Pl. 2:1182, 1753), the genus Cordyceps has undergone nomenclatural changes in the post-Linnaean era, but has stood firmly for approximately 200 years. Synonyms of Cordyceps were collected from different literature sources and analyzed based on the species they represent. True synonyms of Cordyceps Fr. were defined as genera that represented species of Cordyceps Fr. emend. G. H. Sung, J. M. Sung, Hywel-Jones & Spatafora. The most common synonyms of Cordyceps observed were Clavaria and Sphaeria Hall, reported in the 18th and in the first half of the 19th century, respectively. Cordyceps, the oldest genus in the Cordyceps s. s. clade of Cordycipitaceae, is the most preferred name under the "One Fungus = One Name" principle on priority bases.
Ten species of Cordyceps species were collected throughout Kangwon province including Chuncheon Dongsanmyun KNU forest experiment from June to September, 1993. Collected Cordyceps species were identified as Cordyceps militaris, C. roseostromata, C. kyushuensis, C. scarabaeicola, Phytocordyceps ninchukiospora, C. nutans, Paecilomyces tenuipes, C. sphecocephala, Hymenostilbe odonatae, Torrubiella sp.. C. militaris, type species of Cordyceps species, was mainly formed on pupae of Lepidoptera and found after the rainy season around July. Fruiting body of C. roseostromata was morphologically similar to those of C. militaris, but relatively small in size and they were also found on lawn or pupa of Lepidoptera. Fruiting body of C. scarabaeicola was found on adult Scarabaeidae specifically and collect fruiting bodies of C. kyushuensis were on larva of moth. C. nutans and C. sphecocephala had host specificity on Hemiptera and Hymenoptera, respectively. Each species formed elliptical fertile part attach to the slim and carneous stalk and they were collected the most in specimen number through whole season of the summer. Ascospore of Phytocordyceps ninchukiospora on seed was characterized by two viable, multiseptate, fusiform units linked end-to-end by a long, filiform connective. Paecilomyces tenuipes, imperfect stage of the genus Cordyceps is multi-infective fungi that attack all stages of all groups of insects. Hymenostilbe odonatae attacks only adult Odonata and Torrubiella sp. formed on spider was difficult to collect because it was found the back side of leaf. As results of cultural test PDA medium showed the best mycelial growth. In the experiment of effect of the acidity inside of the media, C. militaris was good on pH 5, C. nutans and Phytocordyceps ninchukiospora were good on pH 6 and Paecilomyces tenuipes was on pH 7 and C. scarabaeicola was on pH 9. All isolates tested showed the best mycelial growth at $20^{\circ}C$. Morphologically similar isolates were used to analyze protein banding pattern among and within species. As a result, C. militaris, C. roseostromata and C. kyushuensis were clustered into close species and C. scarabaeicola and Phytocordyceps ninchukiospora were relatively distant from those species.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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