Kwon S. Yoon;Bu Y. Min;Park, Hyoung T.;Lee, Jong K.;Kim, Kun W.
Journal of Microbiology
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제37권1호
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pp.27-34
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1999
Two fractions with unusual antifungal activity that suppress asexual sporulation of several fungi were obtained from culture filtrate of Pseudomonas aeruginosa and were partially purified through the repeated silicagel flash column chromatographies. The sporulation-suppressive actions of these fractions in Aspergillus nidulans, Rhizopus stolonifer, and Coprinus cinereus, were analyzed by light and electron microscopes. The germination ability of the spores produced in the presence of these fractions were also checked to determine the persistent effects of these antifungal substances on the next generation. Light microscopic observation of developing sporangia of R. stolonifer grown in the presence of both fractions revealed that the significant number of sporangia failed to reach maturity, and frequently, uncontrolled growths of hyphae and rhizoids from the sporangiophores were found. In A. nidulans addition of these fractions appeared to cause different classes of morphological abnormality in conidia development, which included aborted formation of conidiogenous cells from the apex of conidiophores and enhanced hyphal growths either at the tip or middle of the conidiophores. Germination abilities of spores obtained from the cultures grown in the presence of antifungal fractions were 40∼60% in Aspergillus, 50∼80% in Coprinus (thallic spores), and 30∼40% in Rhizopus compared to those of normal spores.
먹물버섯속(Coprinus spp.)의 분자 생물학적 분류 가능성을 모색하기 위해 rDNA의 cluster중 ITS II영역을 PCR 증폭하여 염기서열을 밝혔다. 이들의 ITS II 영역은 $253{\sim}275$ 염기쌍으로 이루어져 있었으며 균주간 ITS II염기서열의 유사도는 $50.3{\sim}100%$로 나타났다. 이들의 염기서열을 이용해 분류도를 작성한 결과, Singer의 형태적 분류체계와 거의 유사한 결과를 보였으나 이들 그룹의 기준종(type species)인 C. comatus는 기타 종들과의 유사도에서 50% 수준의 저조한 상동성을 보여 주었다. 이와 같은 결과로 볼 때 이 종은 기존의 다수 학자들이 보고한 단일 계통진화를 해온 속이란 점에서는 다소 의문점을 남기었고, ITS II 영역은 종내 변이는 없는 것으로 보여지며 종내의 균주간의 변이가 밝혀진 그룹에 대해서는 종에 대한 재검토가 필요하다고 본다.
먹물버섯속 및 눈물버섯속 균류의 계통학적 유연관계 분석을 위해 rDNA의 cluster 중 ITS 영역을 Polymerase Chain Reaction(PCR)로 증폭하여 염기서열을 밝혔다. 이들의 ITS I, II 영역은 각각 $258{\sim}301\;bp,\;253{\sim}275\;bp$의 염기쌍으로 이루어져 있었으며 균주간 ITS 염기서열의 상동성은 $43.9{\sim}96%$로 나타났다. 이들의 염기서열을 이용해 분류도(tree)를 작성한 결과, Singer의 형태적 분류체계와 거의 유사한 결과를 보였으나 눈물버섯속 균류들은 먹물버섯속 내 그룹 II의 종들과 함께 분지를 형성하였고 먹물버섯속의 의기준종(type species)인 C. comatus는 조사된 다른 동일 속의 종들과의 유사도에서 50%수준의 저조한 상동성을 보여주었다. 이와 같은 결과로 볼 때 먹물버섯류가 기존의 다수 학자들이 보고한 단일 계통진화(monophyletic evolution)를 해온 속이란 점에서 의문점을 남기었고 좀더 많은 조사가 필요하겠으나 눈물버섯속 균류도 먹물버섯속 균류와 분리시키는 것보다는 동일 속으로 분류하는 것이 바람직 할 것으로 사료되었다.
A neutral xylanase (CcXyn) was identified from Coprinus cinereus. It has a single GH10 catalytic domain with a basic amino acid-rich extension (PVRRK) at the C-terminus. In this study, the wild-type (CcXyn) and C-terminus-truncated xylanase ($CcXyn-{\Delta}5C$) were heterologously expressed in Pichia pastoris and their characteristics were comparatively analyzed with aims to examine the effect of this extension on the enzyme function. The circular dichorism analysis indicated that both enzymes in general had a similar structure, but $CcXyn-{\Delta}5C$ contained less ${\alpha}-helices$ (42.9%) and more random coil contents (35.5%) than CcXyn (47.0% and 32.8%, respectively). Both enzymes had the same pH (7.0) and temperature ($45^{\circ}C$) optima, and similar substrate specificity on different xylans. They all hydrolyzed beechwood xylan primarily to xylobiose and xylotriose. The amounts of xylobiose and xylotriose accounted for 91.5% and 92.2% (w/w) of total xylooligosaccharides (XOS) generated from beechwood by CcXyn and $CcXyn-{\Delta}5C$, respectively. However, truncation of the C-terminal 5-amino-acids extension significantly improved the thermostability, SDS resistance, and pH stability at pH 6.0-9.0. Furthermore, $CcXyn-{\Delta}5C$ exhibited a much lower $K_m$ value than CcXyn (0.27 mg/ml vs 0.83 mg/ml), and therefore, the catalytic efficiency of $CcXyn-{\Delta}5C$ was 2.4-times higher than that of CcXyn. These properties make $CcXyn-{\Delta}5C$ a good model for the structure-function study of $({\alpha}/{\beta})_8$-barrel-folded enzymes and a promising candidate for various applications, especially in the detergent industry and XOS production.
Coprinus cinereus에서 tryptophan 생합성에 관여하는 trp2 유전자의 이종 버섯에서의 발현여부를 조사하였다. 유전자 상동성을 확인하기 위하여, C. cinereus trp2 유전자를 함유하는 재조합 DNA인 pHIONA8을 probe로 사용하여 southern blot을 한 결과 S. commune 1-71의 tryptophan 생합성 유전자와 상당한 homology가 있는 것으로 나타났다. pHIONA8 DNA를 이용한 S. commune T1(tryptophan 영양요구주)의 상보성 검증에서는 pertri-dish당 약 50개의 형질전환체가 나타났으며, 이들 형질전환체는 다른 S. commune의 다른 화합성 균주와의 교배 실험에서 clamp cell의 유도와 동시에 약 $2{\sim}3$주만에 자실체를 관찰하였다.
Coprinus cinereus 2249 producing alkaline-active cellulase was screened from 29 species of Corpinaceae and constitutively produced alkaline carboxymethyl cellulase (CMCase) and filter paper cellulase (Fpase). When cultivated at pH 9.0, 25$^{\circ}C$ and 5 days, copnnus cinereus 2249 produced higher alkaline activity on 0.5% CMC, 2% wheat bran as carbon source and 0.5% peptone, 0.05% yeast extract as nitrongen source compared with other culture conditions. The level of cellulase production was higher in the presence of wheat bran than in the presence of CMC. The optimum temperature and pH for alkaline -active cellulase activity weas 50$^{\circ}C$ and 9, 0, respectively.
Among the bacteria isolated from compost piles of cattle excretion in a pasture located at the suburbs of Chunchon city, Pseudomonas aeruginosa KMCS-1 was selected for the test of antifungal substances produced. Six fractions were separated by silica gel column chromatography, and then the antifungal activity of each fraction was assayed against Escherichia coli, Bacillus subtilis, Candida albicans, Rhizopus sp., Aspergillus nidulans, Coprinus cinereus, and Pyricularia oryzae by paper disc method. Two fractions showed significant suppressive activities against A. nidulans, C. cinereus, and P. oryzae however, their mycelial growth was not affected by neither of these fractions. Inhibitory activities of these fractions to sporulation was assayed at the concentration of 50. 25, 12. 5, and 6.25 $\mu$g/ml and the average inhibition rates against sporulation of A. nidulans, C. cinereus, and P. oryzae were 94.0, 98.3, and 77.9%, respectively. Further purification and analysis of active substances are now being conducted.
먹물버섯류 및 주름버섯 유사 균류의 계통학적 유연 관계를 분석하기 위해 계통분류학적 정보를 지니고 있는 rDNA의 ITS(17S, 5.8S, 25S일부 포함)의 염기서열을 밝히고 이들 자료를 근거로 하여 형태적 분류 체계와 비교분석을 하였다. 이번 조사된 종은 총 14종으로서 먹물버섯속 균류 8종, 눈물버섯속 균류 1종, 소똥버섯과 2종, 주름버섯과 1종, 독청버섯과 1종, 복군류 1종이 포함되었다. 종간 염기서열 상동성은 $38.7{\sim}77.2%$였다. 조사된 균류는 크게 4개의 그룹을 형성하였다. 그룹 I에 C. micaceus, C. radians, C. disseminatus, Psathyrella candolleana 등이 포함되었고, 그룹 II에는 C. cinereus, C. echinosporus, C. rhizophorus, C. atramentarius이 조사되었다. 한편, 먹물버섯속 균류의 기준종인 C. comatus는 다른 먹물버섯 그룹들과 분지의 신뢰도가 전혀 없는 것으로 조사되었고 그룹 III에서 주름버섯 유사 복균류인 Podaxis pistillaris 및 신령버섯 Agaricus blazei와의 분지 신뢰도는 87과, 57을 각각 나타내었다. 한편, 눈물버섯속 균류는 그룹 II에 포함되는 결과를 나타내어 형태적 분류체계와 상이한 결과를 도출하였고, 주름버섯 유사복균류인 Podaxis pistillaris는 다른 기타 주름버섯목 균류보다도 C. comatus와 더 밀접한 유연 관계를 나타내어 이들 주름버섯 유사 복균류(secotioid taxa)는 주름버섯목 균류에서 파생된 것임을 확인할 수 있었다. 기준 종으로 알려진 C. comatus는 발생학적 측면에서 다른 절에 있는 먹물버섯 균류와 다른 점이 있음을 이번 조사에서 확인할 수 있었으며 먹물버섯속(屬)의 기준 종은 재 설정되어 할 것으로 사료되었다. 또한 기존의 분류학자들이 주장해온 단일 진화론은 조사된 여러 결과와 비교해 볼 때 적어도 paraphyletic이 거나 polyphyletic일 가능성은 높은 것으로 확인되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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