본 연구에서는 비교적 양질의 영양소를 가진 현미 및 율무 메탄올 추출물의 항돌연변이 및 인체 암세포 증식억제 효과에 대하여 알아보고자 하였다. Ames test를 이용한 돌연변이 억제 실험에서 $AFB_1$ (0.6 mg/plate)에 대해 현미 메탄올 추출물은 농도의 증가와 더불어 돌연변이 억제 효과가 증가하여 첨가농도 2.5 및 5 mg/plate일 때 각각 70% 및 76%의 억제 효과를 나타내었다. 율무 메탄올 추출물의 경우도 첨가농도 2.5 및 5 mg/plate일 때 각각 60% 및 76%의 항돌연변이 효과를 관찰 할 수가 있었다. 직접돌연변이원인 MNNG에 대해서도 현미 및 율무 메탄올 추출물들은 첨가농도 5 mg/plate에서 각각 79% 및 69%의 항돌연변이 효과를 나타내었다. 인체 위암세포(AGS)에 현미 메탄올 추출물을 5, 10, 20 mg/ml의 농도별로 처리했을 때 농도 의존적으로 암세포 증식 억제 효과가 증가하였다. 율무 메탄올 추출물의 경우도 현미 메탄올 추출물과 유사하게 농도 의존적으로 암세포의 증식을 억제시켰으며 첨가농도 20 mg/ml일 때 77%의 증식 억제효과를 살펴 볼 수가 있었다. 인체 결장암세포(HT-29)의 경우에서도 이들 현미 및 율무추출물은 낮은 농도에서부터 그 억제효과가 나타나 농도 의존적으로 암세포의 증식을 억제시켰다.
The purpose of this research was to investigate the effects of Coix Lachryma-Jobi L. var. Ma-yuen Stapf. on the proliferation of L1210 cells and immune cells. The hexane fraction of Coix Lachryma-Jobi decreased the proliferation of L1210 cells and induced DNA fragmentation of L1210 cells. Also, the fraction decreased the cell viability of murine thymocytes and splenocytes, but increased the phagocytic activity of murine peritoneal macrophages. In addition, fatty acids and fatty acid methyl esters decreased the proliferation of L1210 cells and induced DNA fragmentation of L1210 cells. The main components of the fraction are fatty acid and their derivatives. These results indicate that Coix Lachryma-Jobi has a cytotoxicity on tumor cells and immune cells.
본 연구는 HPLC를 이용하여 율무근 추출물을 기능성 화장품 원료로 개발하기 위하여 지표성분인 coixol의 분석법 설정과 분석법에 대한 검증을 실시하고자 하였다. 표준액과 율무근 추출물은 다른 물질의 간섭 없이 분리되었으며, 표준액과 추출물의 피크 유지시간이 일치한 spectrum을 나타내었다. 또한, blank에서 표준액과 겹치는 피크가 없는 것으로 특이성을 확인하였다. 검량선의 상관계수($R^2$)는 0.9995로 모두 양호한 직선성을 보였으며, 직선상의 검출한계는 0.07~0.08 mg/mL였고 정량한계는 0.23~0.25 mg/mL로 나타났다. 율무근 추출물 2.25, 4.5 및 6.75 mg/mL 세 농도의 회수율은 98.36~100.30%였으며 RSD는 0.26~0.29%로 나타나 RSD 2.0% 이하로서 정확성이 있음을 알 수 있었다. 정밀성은 0.05~0.29%의 정밀도(RSD)를, 실험실 내 정밀성에서는 0.03~0.29%의 정밀도(RSD)를 나타내었고, intra-day에서의 정밀도(RSD)는 0.37~1.64%, inter-day에서는 0.36~0.81%의 정밀도를 나타내어 율무근 추출물의 지표성분 coixol의 분석법은 적합한 시험법임이 검증되었다. 본 분석법은 율무근 추출물의 기능성화장품 원료 개발을 위한 기초자료로 활용될 것으로 생각된다.
본 연구는 천연 미백소재 탐색을 위하여 율무(C. lachryma-jobi var. ma-yuen) 부산물 추출물의 tyrosinase 저해활성을 검증하였으며, 그 중에서 뿌리 추출물은 $159.3g/{\mu}mL$의 $IC_{50}$ 값을 나타내었다. 율무 뿌리 추출물의 순차적 용매 분획에 대한 활성 검증 후 가장 활성이 우수한 EtOAc 분획물에 대하여 Diaion HP-20 column chromatography, MPLC및 preparative HPLC를 수행해 율무근으로부터 여섯 개의 화합물을 정제하였고, 이 물질들의 구조 분석은 LC-MS와 NMR 데이터 해석을 바탕으로 진행하여 각각 (+)-icariol $A_2$ (1), zhepiresionol (2), 4-hydroxybenzaldehyde (3), trans-${\rho}$-coumaric acid (4), N-(2-hydroxy-4-methoxyphenyl)-2-hydroxyacetamide (5), coixol (6)로 구조를 규명하였다. 화합물 1은 이 식물에서 처음으로 분리되었으며, 화합물 5는 자연계로부터 처음으로 분리된 화합물로 확인하였다. 이들 화합물 중 4-hydroxybenzaldehyde (3), trans-${\rho}$-coumaric acid (4)와 coixol (6)은 순서대로 707.4, 6.5, $62.4{\mu}M$의 $IC_{50}$ 값을 나타내어 대조군으로 사용한 arbutin ($IC_{50}=618.7{\mu}M$)과 비교시 유사하거나 우수한 활성을 확인하였다. 이로 미루어 보아, 율무근 추출물과 활성물질의 tyrosinase 저해활성을 확인할 수 있었으며, 율무근 추출물의 미백소재로서의 적용 가능성을 확인할 수 있었다.
율무와 염주 단백질의 식품 이화학적 특성을 알아보고자 율무쌀, 현염주 및 비교시료로서 쌀의 3가지 시료를 가지고 실험 한 결과는 아래와 같다. 1. 분리단백질의 분포는 율무쌀의 경우 알부민, 글로불린, 글리아딘 및 글루텔린의 비율이 각각 17.4:19.6:55.2:77%였으며, 현염주는 12.6:62.2:4.2:21.0% 였고, 백미는 14.2:57.4:0.77:27.8% 였다. 그러나 단백질의 분획과정에 변성으로 인하여 글로불린, 글루텔린의 손실이 있었고, 추출율이 상당히 낮아서 3.4∼13.0% 정도였으므로 단백질의 추출방법은 더 연구되어야 할 것으로 사료된다. 2. 산성 및 염기성 조건에서 실시한 Polyacrylamide gel electrophoresis의 결과, 율무쌀과 현염주의 단백질 분획들은 유사한 전기영동 패턴을 나타냈으며, 백미의 경우는 이들과 다른 전기영동 패턴을 나타냈다. Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis의 전기 영동상은 율무쌀과 현염주 간에 band의 분포가 매우 유사하였으나, 그 조성비율에 있어서는 다소 차이가 있었다. 쌀의 경우는 이들과 뚜렷이 다르게 나타났는데, 특히 g1iadin의 경우 율무쌀과 현염주에서는 분자량 10,000∼30,000사이에 여러 개의 띠가 확인되었으나 백미에서는 분자량 12,000 정도에 해당하는 하나의 띠만이 확인되었다. 따라서 율무와 염주는 식물학적으로 밀접한 관계에 있음이 확인되었으며, 이들과 백미단백질의 전기영동상의 차이는 유전적인 인자의 차이에 의한 것으로 보여진다.
율무와 현율무의 total methanol 추출물과 분획 한 후의 각 획분에서의 DPPH 라디칼 소거작용 및 tyrosinase 저해작용을 검색 비교하여 그 함량-작용간의 dose-dependent한 결과를 얻었다. 라디칼 소거작용은 율무의 n-butanol 분획이 가장 활성이 높아 standard로 사용한 BHT의 6.7배 정도의 농도에서 같은 $IC_{50}$값을 나타내었으며 $600\;{\mu}g/ml$ 이상의 고농도에서는 BHT와 거의 동등한 저해율을 보였다. 그러나 현율무에서는 total methanol 추출물을 분획한 후의 모든 획분이 total methanole 추출물의 활성보다 작아 분획에 따른 작용의 편재화를 이루지 못했다. Tyrosinase 저해작용도 모든 분획이 거의 유사한 저해율을 보여 역시 분획에 따른 activity의 편재화가 이루어지지 않았음을 알 수 있었으나 현율무의 chloroform 분획이 비교적 높은 활성을 보여 $IC_{50}$값이 $321.5\;{\mu}g/ml$이었다. 이는 활성이 확인된 trans-p-coumaric acid의 $IC_{50}$값이 $25\;{\mu}g/ml$, Kazinol E의 $IC_{50}$값이 $111.3\;{\mu}g/ml$임을 참조 할 때 분획으로서는 좋은 활성을 보였음을 알 수 있었다.
식이섬유와 무기질의 장내 흡수의 관계를 알아보기 위해 율무겨에서 추출한 식이섬유의 Ca 및 Fe 결합력을 장의 pH 조건과 유사한 범위에서 측정하였다. 율무겨에서 추출한 식이섬유의 내인성 Ca및 Fe함량을 원소 흡광 분석기로 측정한 결과, 총 식이섬유에는 산성세제 저항섬유보다 자체내 Ca함량을 300배 이상이나, Fe함량은 4배 이상 함유되어 있었다. 식이섬유와 칼슘과의 결합 정도를 pH 5.0-7.0 범위에서 측정한 결과 TDF는 pH가 증가함에 따라 50.77%에서 86.64%로 증가했고, ADF는 40-50% 정도를 나타내어, TDF가 pH의 변화에 민감하게 반응하여 칼슘과 결합한다는 것을 알 수 있었다. 또한 식이섬유와 철분과의 결합 정도는 pH 5.0∼7.0 사이에서 TDF는 95∼97%, ADF는 85∼95%를 나타내, 철분은 pH변화에 영향을 받음이 없이 섬유소에 높은 비율로 결합하고 있음을 알 수 있었다.
Even though coix (Coix lachryma-jobi L. var. ma-yuen) has many physiological effects, since it has been known to cause sterility, farmers avoid using coix bran as a forage for their livestock. Therefore, as the consumption of coix increases, coix bran, which is a by product of pounding process, becomes a serious issue of environmental problem. Present study examined the physiological effects of coix bran in normal and diabetic rats for its possible use as a functional material. The effects of coix bran supplementation on plasma and hepatic lipid profile were evaluated in rats fed one of the following diet for 12 weeks : chow diet ; chow-bran diet (chow diet+25% coix bran), high fat diet and high fat-bran diet (high fat diet+25% coix bran). Additionally, glucose challenge and lipid metabolism in streptozotocin-diabetic rats were also examined. In normal rats, consumption of coix bran remarkably reduced body weight gain in chow or high fat diet fed rats. Additionally, consumption of coix branreduced blood TG, TC and atherogenic index (26%, 24% and 72%, respectively) in chow diet fed rats. Liver TG and cholesterol concentrations were reduced (43% and 49%, respectively) in high fat fed rats by coix bran supplementation. In diabetic rats, fasting blood glucose level was reduced about 25% by coix bran consumption. Also, glucose challenge pattern was improved and resembled normal pattern : it reaches to peak 15~30 minutes after glucose administration and get back to fasting blood glucose level after 90 minutes. Plasma concentrations of TG were elevated in diabetic rats and were reduced to normal level by coix bran supplementation. Liver TG and cholesterol concentrations were also elevated in diabetic rats and reduced to normal level by consumption of coix bran. These results suggest that coix bran may have beneficial effects on blood lipid and glucose level in normal and diabetic rats.
율무종자에 0, 1, 4, 8, 16, 32 및 64 Gy 선량의 감마선을 조사한 후 메탄을 추출하였으며 조사 종자 추출물이 인체의 유방암세포주(MCF-7), 폐암세포주(Calu-6), 위암세포주(SNU-601), 그리고 인체 급성골수성백혈암세포주(AML-2/WT)에 대한 세포독성 및 다제내성세포주(AML-2/D100)에 대한 다제내성 극복활성에 미치는 영향을 알아보고자 MTT 방법을 이용하여 분석하였다. 감마선 조사한 율무종자의 추출물은 대조구보다 비교적 낮은 농도에서 암세포 증식 저해 활성을 나타내는 경향을 보였으며 그 활성은 암세포 주와 조사선량별 추출물에 따라 다르게 나타났다. Calu-6의 경우 4, 8 및 16 Gy 추출물에서 암세포 증식 억제 효과를 나타냄을 알 수 있었으며 MCF-7에서 는 유일하게 8 Gy 추출물에서 $IC_{50}$값을 측정할 수 있었다. 그리고 SNU-601의 경우는 Calu-6에서와 같이 4, 8 및 16 Gy 추출물에서 증식저해 활성을 관찰할 수 있었으나 그 활성은 대조구인 0 Gy 추출물 보다 약간 높은 농도에서 관찰되었다. 한편, 선량이 높을수록 즉, 32 Gy 이상 감마선 조사는 암세포 증식억제 활성을 거의 나타내지 않았다. 유의할 만한 결과로는 8 Gy추출물이 3가지 암세포$(Calu-6:\;633\;{\mu}g/mL,\;MCF-7:\;653\;{\mu}g/mL,\;SNU-601:\;683\;{\mu}g/mL)$ 모두에서 증식 억제 활성을 나타냈다. 다제내성 세포에 대한 감수성 세포의 세포독성도를 측정하여 선택독성을 관찰한 결과 4,8 및 16 Gy추출물들은 오히려 감수성 세포에 대한 세포독성이 높게 나타나 교차내성을 나타내지 않았다. 그러나 다제내성 세포에 대하여 항암제인 vincristine과 함께 추출물을 처리한 결과 내성극복도(RF)가 4, 8 및 16 Gy 추출물에서 각각 1.7, 1.8 및 1.6으로서 다제내성 조절 활성을 관찰할 수 있었다. 따라서 감마선 조사기술은 약용식물 종자의 생리활성 증진에 활용 가능성이 매우 높을 것으로 기대된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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