Park, Chung Youl;Min, Hyun-Geun;Lee, Hong-Kyu;Maharjan, Rameswor;Yoon, Youngnam;Lee, Su-Heon
Research in Plant Disease
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v.24
no.4
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pp.348-352
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2018
A multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction (mRT-PCR) assay was developed for the detection of Clover yellow vein virus (ClYVV), Peanut mottle virus (PeMoV), and Tomato spotted wilt virus (TSWV), which were recently reported to infect soybean and azuki bean in Korea. Species-specific primer sets were designed for the detection of each virus, and their specificity and sensitivity were tested using mixed primer sets. From among the designed primer sets, two combinations were selected and further evaluated to estimate the detection limits of uniplex, duplex, and multiplex RT-PCR. The multiplex RT-PCR assay could be a useful tool for the field survey of plant viruses and the rapid detection of ClYVV, PeMoV, and TSWV in leguminous plants.
Gentian plants (Gentiana spp.) showing yellow ringspot, mosaic, necrotic fleck and malformation were collected from their growing areas in Taegu, Kyungpook province and Alpine Agricultural Experiment Station, Korea. Three viruses isolated from the naturally infected gentian were identified as broad bean wilt virus (BBWV), cucumber mosaic virus (CMV) and clover yellow vein virus identified as broad bean wilt virus (CIYVV) by their host range, immunosorbent electron microscopy (ISEM) and electron microscopy. Electron microscopic examination of negatively stained preparations showed that BBWV and CMV are spherical particles of 28 nm and 30 nm in diameter, and CIYVV is filamentous particles of ca. 780 nm in length. By ISEM, BBWV was detected mainly in gentian showing yellow ringspot and mottle, CIYVV in necrotic fleck leaf of gentian and CMV in narrow and distorted mosaic leaf of gentian. BBWV and CMV are the most prevalent in the cultivated gentian. In ultrathin sections of BBWV infected tissues, large aggregates of crystalline array of virus particles and vesicular body were found in the cytoplasm and vacuole of mesophyll cells. In case of CIYVV, pinwheel- and laminated aggregate-type inclusions as well as filamentous virus particles were observed in the cytoplasm of mesophyll cells.
Gladioli (Gladiolus hybridus) showing flower colour breaking, leaf mosaics, necrotic fleck, and dwarfing or lack of visible symptoms were collected from gladioli growing areas in Taegu and Kyungpook province, Korea. The two viruses isolated from the naturally infected gladioli were identified as ban yellow mosaic virus (BYMV) and clover yellow vein virus (CIYVV) by their host range, immunosorbent electron microscopy (ISEM), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), direct tissue blotting immunoassay (DTBIA) and intracellural symptoms. In ultrathin sections of BYMV and CIYVV infected tissues, laminated aggregate-type inclusions, cytopalsmic bodies and nuclear inclusions as well as filamentous virus particles were observed in the cytoplasm of parenchyma cells. By DTBIA and ISEM, BYMV was detected in all tested gladiolus plants showing severe or mild mosaic symptoms, whereas CIYVV were mainly detected from those of mild mosaic symptoms. BYMV is the most prevalent in commercial gladioli and present major production problems. Detection sensitivity of BYMV and CIYVV in crude sap of infected gladiolus leaves by ISEM was about twice compared with ELISA. In a comparison of ELISA, ISEM, DTBIA, BYMV was detected in same degree by DTBIA in samples where sap extracts were positive in both ELISA and ISEM. DTBIA provides a specific, rapid, and simple tool for large-scale diagnosis of BYMV.
The virus isolated from white clover, Trifolium repens showing mosaic symptom was identified as bean yellow mosaic virus (BYMV) based on the host range, physical properties, aphid transmission, serology and morphology of the virus particles. Chenopodium amaranticolor and C. quinoa produced local lesions on the inoculated leaves and chlorotic spot on the upper leaves. Broad bean and cowpea produced local lesions on the inoculated leaves and mosaic with vein necrotic symptoms on the upper leaves. French bean showed vein necrosis on the inoculated leaves, yellow mosaic on the upper leaves and bud blight. The average size of virus particles was 740nm in length. The virus was also transmitted by Myzus persicae. The thermal inactivation point of the virus isolate was $60\;to\;65^{\circ}C$, the dilution end point $10^{-3}\;-\;10^{-4}$ and the longevity in vitro was 3 days Serological tests with the virus purified from Trifolium repens were positive to BYMV antiserum.
Jack bean (Canavalia ensiformis) is one of healthy products for fermented or functional food in Korea and is widely distributed and cultivated worldwide. During August 2022, Jack bean plants showing symptoms of yellow flecks, chlorosis, necrotic spots and mosaic were observed in Jangheung-gun, South Korea. By transmission electron microscopy, flexuous filamentous virus particles of approximately 750×13 nm in size were observed in the symptomatic leaf samples. The infection of a Korean isolate of clover yellow vein virus (ClYVV-Ce-JH) was confirmed using double antibody sandwich enzyme-linked sorbent assay, reverse transcription polymerase chain reaction and high-throughput sequencing. The complete genome sequence of ClYVV-Ce-JH consists of 9,549 nucleotides (nt) excluding the poly (A) tail and encodes 3,072 amino acids (aa), with an AUG start and UAG stop codon, containing one open reading frame that is typical of a potyvirus polyprotein. The polyprotein of ClYVV-Ce-JH was divided into ten proteins and each protein's cleavage sites were determined. The coat protein (CP) and polyprotein of ClYVV-Ce-JH were compared at the nt and aa levels with those of the previously reported 14 ClYVV isolates. ClYVV-Ce-JH shared 92.62% to 99.63% and 93.39% to 98.05% at the CP and polyprotein homology. To our knowledge, this is the first report of a Korean isolate of ClYVV from Jack bean plants and the complete genome sequence of a ClYVV Jack bean isolate in the world.
Park, Won-Mok;Lee, Sang-Seon;Park, Sun-Hee;Ju;Ryu, Ki-Hyun
The Plant Pathology Journal
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v.16
no.1
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pp.36-42
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2000
The coat protein gene of iris severe mosaic potyvirus, which was isolated in Korea, ISMV-K, from iris plant was cloned and its nucleotide sequence was determined. The coat protein of the virus contained 252 amino acid residues, including five potential N-glyxosylation site motifs. The coat protein of ISMV-K has 99.1% and 98.4% sequence identities with those of the Netherlands isolate of ISMV (ISMV-Ne) form crocus for the nucleotide and amino acids, respectively. The coat protein of ISMV-K has 50.4% to 60.3% nucleotide sequence identities and 47.3% to 55.7% amino acid identities with those of other 21 potyviruses, indicating ISMV to be a distinct species of the genus. The coat protein of ISMV-K was closely related with bean yellow mosaic virus and clover yellow vein virus in the phylogenetic tree analysis among the potyviruses analyzed. ISMV was easily and reliably detected from virus-infected iris leaves by RT-PCR with a set of the virus-specific primers.
Bean yellow mosaic virus (BYMV; genus Potyvirus, family Potyviridae) causes severe losses to various legume species and a number of non-legume species, particularly freesia plants. In a survey of virus diseases in Gyeonggi province, Korea, BYMV isolates were identified from many cultivated freesia species. Here, we determined the complete nucleotide sequences of a BYMV freesia isolate (BYMV-Fr; accession number FJ492961). BYMV-Fr genome consists of 9,545 nucleotides (nt) excluding the poly (A) tail and encodes 3,057 amino acid (aa), with an AUG start and UAG stop codon, containing one open reading frame typical of a potyvirus polyprotein. The polyprotein of BYMV-Fr was divided to ten proteins and the cleavage sites of each protein were determined. The coat protein (CP) and polyprotein of BYMV-Fr were compared at the aa level with those of the previously reported 4 BYMV isolates. BYMV-Fr shared 90.1 to 97.1 and 91.0 to 92.5% at the CP and polyprotein homology. Interestingly, BYMV-Fr showed identities of a lower level at the nt level of 5' noncoding region (61.4 to 67.6%) and at the aa level of P1 (71.4 to 72.8%), comparing with four BYMV isolates. Based on the aa sequence diversity of CP and polyprotein, phylogenetic analysis with the four BYMV isolates showed two distinct groups and BYMV-Fr and most BYMV isolates were most closely related to the clover yellow vein virus among 52 potyviruses. To our knowledge, this is the first report of the complete genome sequence of BYMV freesia strain.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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