Park, Hee-myung;Oh, Tae-ho;Kim, Hyun-uk;Youn, Sin-keun;Lee, Sang-rok;Yoo, Jae-chun;Yoon, Hwa-young;Han, Hong-ryul
대한수의학회지
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제39권4호
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pp.819-824
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1999
Suspected infections of Campylobacter spp and Clostridium spp were observed in three dogs. The diagnosis was based on fecal cytology, Gram's stain, clinical signs and serum chemistry. The rectal swabs of diarrheic dogs were performed to confirm the enteropathogens. Suspected Campylobacter spp were a sea-gull shape and Clostridium spp had a large, clear endospore in rectal cytology. Treatment with appropriate antibiotics resulted in a complete resolution of all clinical abnormalities in three cases. The source of Campylobacter spp and Clostridium spp could not be found clearly in three cases, but gastrointestinal origin was most likely. When detecting the enteropathogens in feces, fecal smear with Wright's and Gram's stain should be made at first and also, if the patients have canine parvoviral enteritis, attention should be paid to confirm the Campylobacter spp and Clostridium spp. In addition, since Campylobacter spp and Clostridium spp as normal bacterial flora exists in canine intestines, it is thought that microbiological isolation should be performed to confirm the suspected Campylobacter spp and Clostridium spp as primary enteropathogens in subsequent study.
Fluorescence in-situ hybridization (FISH) is a common and popular method used to investigate microbial communities in natural and engineered environments. In this study, two specific 16S rRNA-targeted oligonucleotide probes, CLZ and KCLZ, were designed and verified to quantify the genus Clostridium and the species Clostridium kluyveri. The optimal concentration of hybridization buffer solution for both probes was 30% (w/v). The specificity of the designed probes was high due to the use of pellets from pure reference strains. Feasibility was tested using samples of Chinese liquor from the famed Luzhou manufacturing cellar. The effectiveness of detecting target cells appears to vary widely in different environments. In pit mud, the detection effectiveness of the target cell by probes CLZ and KCLZ was 49.11% and 32.14%, respectively. Quantitative analysis by FISH technique of microbes in pit mud and fermented grains showed consistency with the results detected by qPCR and PCR-DGGE techniques, which showed that the probes CLZ and KCLZ were suitable to analyze the biomass of Clostridium spp. and C. kluyveri during liquor fermentation. Therefore, this study provides a method for quantitative analysis of Clostridium spp. and C. kluyveri and monitoring their community dynamics in microecosystems.
개에서 설사를 일으키는 주요 원인이 되는 장내 병원균으로 Salmonella spp., Shigella spp., Campylobacter spp., Clostridium spp.가 있다. 이들 세균은 배양으로 검출이 어렵다. 본 실험에서는 Salmonella spp., C. coli, C. jejuni, 그리고 Cl. perfringens를 신속하고 민감하게 검출할 수 있는 방법을 고안하였다. 정상견 71마리와 설사증상이 있는 66마리에서 수집한 분변 시료에서 장내 병원균의 유병률을 알아보고자 하였다. 장내 병원균은 실시간 중합효소 연쇄 반응 분석을 이용하여 검출하였다. 설사변에서 Salmonella spp., C. coli, C. jejuni, Cl. Perfringens는 정상변보다 검출률이 높았다. 개발한 다중실시간 중합효소연쇄반응은 분변시료의 병원균 존재 및 양 또는 기타 고유 서열을 확인하는데 유용하였다.
한국인들이 섭취하고 있는 식품이 인체 장내에서 중요한 생리적 기능을 보이는 Bifidobacterium spp.와 Clostridium perfringens의 생육에 미치는 영향을 조사하였다. 수집된 162종의 식품소재 및 식품 추출물 중에서 B. bifidum과 C. perfringens의 생육에 영향을 주는 소재를 agar diffusion method로 31종을 선발하였다. 이들 중에서 알가지, 된장, 양파, 겨자, 감자 등의 추출물은 C. perfringens의 생육을 상하게 억제하였며 Bifidobacterium spp.를 포함하는 기타의 장내미생물의 생육에는 크게 영향을 주지 않았다. 사람 분변을 종균으로 하여 이들 추출물 1%를 첨가하여 배양한 결과 알가지, 양파, 겨자 배양액에서 Bifidobacterium spp.의 생균순는 대조구에 비하여 $10^{2{\sim}3}$개 증가하고 있는 반면 C. perfringens의 생균수는 현저히 감소하였다. 그리고 양파, 겨자의 경우 배양액 중의 ${\beta}-glucosidase$ 역가, indole 함량 등이 현저히 낮아졌고, 양파와 된장에서는 ${\beta}-glucosidase$ 역가가 검출되지 않았다.
본 연구에서는 비만과 관련된 요소 중 하나인 장내 균총을 개선하고자, 식이섬유소가 풍부하고 저칼로리인 담자균류 추출물을 이용하여 in vitro 상에서 비만 관련 장내 미생물에 대한 항균활성을 조사하였다. 항균성 담자 균류 소재 탐색결과 석이버섯 자실체와 운지버섯 균사체의 추출물을 선발하였고, 선발된 담자균류 소재 추출물의 특성을 분석한 결과 열에 대단히 안정하였고, pH에도 비교적 안정한 것으로 나타났다. 또한 rat을 이용한 동물실험에서 석이버섯 80% 에탄올 추출물 투여군이 고지방식이만 투여한 군에 비하여, 장내 균총에서 Bifidobacterium spp.가 증가되었고, Clostridium spp.와 Eubacterium spp.는 감소된 것으로 나타났다. 석이버섯과 운지버섯 추출물이 첨가된 기능성 음료를 제조하고자 관능평가를 실시한 결과, 운지버섯 균사체 배양액에 석이버섯 추출물을 3% 첨가한 실험구가 가장 좋은 평가를 받았다. 이러한 결과를 토대로 석이버섯과 운지버섯 추출물이 장내 균총 개선을 위한 기능성 식품소재로 활용될 수 있을 것으로 생각된다.
한국인의 장내세균중의 유해효소생성 균주를 분리하여 장내환경 개선연구에 활용하고자 ${\beta}-glucuronidase$와 $7{\alpha}-dehydroxylase$의 유해효소를 분비하는 장내세균으로 알려진 Clostridium속 균주를 분리하였다. 동일인의 장내세균을 2회에 걸쳐서 검색한 후 최다 우점종이외의 장내세균은 동일인이라도 식이등 외부환경에 의하여 변화될 수 있음을 알았다. 이어서 Neomycin-Nagler 선택배지를 사용하여 Clostridium spp.를 14종 분리하여 이들 균주가 유해효소를 생산하는지를 조사하였다. 일차 선발균주중 Clostridium sp. Isolate-11은 ${\beta}-glucuronidase$를 강력히 생성하여 0.021 unit/mg protein의 활성을 보여주었으나 이들 분리 균주중에서 $7{\alpha}-dehydroxylase$의 역가를 TLC상에서 검출할 수 있는 균주는 발견하지 못했다. Isolate-11를 배양생리학적으로 동정한 결과 이 균은 Clostridium scatologenes인 것으로 잠정동정하였다.
본 연구는 probiotics와 prebiotics로 구성된 synbiotics 섭취가 건강한 성인의 배변 활동 및 변내 균총의 개선 효과를 확인하고자 하였고, probiotics 섭취 중단 후에도 prebiotics인 XOS 섭취가 장내 유익균총의 유지에 미치는 영향을 파악함으로써 XOS의 건강기능성 확인을 위한 근거자료를 확보하고자 하였다. 본 연구결과 BL2XO6군과 BL2XO2군의 체위 자료는 두 군 간에 유의적인 차이를 보이지 않았다. 변내 pH는 시료 섭취 전 두 군 모두 7.0이하로 약 산성이었으나, 시료 섭취 1주차 BL2XO6군에서 pH 7.16으로 유의적으로 높았으나 2주차 이후는 pH 7.0 이하의 값을 보여 시료 섭취에 따른 차이는 나타나지 않았다. 변내 균총의 변화를 보면 BL2XO6군의 경우 Clostridium spp. 은 시료 섭취 후 변 내 균 수가 감소하는 양상을 보인 반면, Bifidobacterium spp.은 시료 섭취 후 서서히 증가하는 양상을 보여 4주차에 시료 섭취 전에 비해 유의적으로 높았으나, 이외 주차에서는 유의적인 차이를 보이지 않았다. B. longum은 모든 주차에서 통계적으로 유의하지 않았으나 서서히 증가하는 추이를 보였다. BL2XO2군의 경우 시료 섭취 후 Lactobacillus spp.과 B. longum은 synbiotics 섭취 1주에만 증가하는 추이를 보였다. 각 주차별로 변 내 균총의 변화율에서 군별로 유의적인 차이를 보인 균총은 Clostridium spp.와 Lactobacillus spp.이었다. 즉, Clostridium spp.은 2주차에서, Lactobacillus spp.는 4주차에서 BL2XO6군과 BL2XO2군 사이에서 유의적인 차이를 보였다. 시료 섭취 전·후 Bacteroidetes와 Firmicutes의 비율은 두 군 모두 변화가 없는 것으로 나타났다. 또한, 시료 섭취 전·후의 변의 양, 변의 상태 및 배변 횟수, 복통 및 CSS점수에 유의적인 차이를 보이지 않았을 뿐만 아니라 군에 따른 차이 역시 존재하지 않았다. 이상의 결과 synbiotics 섭취 후 prebiotics만을 섭취할지라도 장내 균총의 변화에 긍정적인 영향을 미치는 것으로 나타나고 있을 뿐만이 아니라 정상적인 배변 활동을 유지하고 있어 synbiotics 섭취 후 prebiotics로 XOS 섭취는 자일로올리고당을 선택적으로 이용할 수 있는 B. longum을 장내에서 지속적으로 증식할 수 있도록 도와 장내 균총을 개선하는 효과와 정상적인 배변활동을 통한 장 건강에 도움을 줄 수 있을 것으로 사료된다.
본 연구에서는 산발효 공정에 관여하는 세균들을 조사 분리하고 분리된 세균들을 이용한 VFAs의 생산효율 증가 효과를 검토하였다. 연구 결과는 다음과 같다. 음식물쓰레기 산발효 공정에서 혐기성배지를 이용하여 분리된 주요 세균은 Escherichia coli, Clostridium formicoaceticum, Clostridium butyricum, Clostridium acetobutyricum 등 12 종이며 Escherichia coli와 Clostridium spp.가 우점종을 차지하고 있는 것으로 나타났으며 VFAs 생산에 주도적 역할을 하는 것으로 판단되었다. 아세트산의 생성 효율 향상에 관한 실험에서 E. coli를 $6{\times}10^8\;cells/gTS$의 농도로 접종하였을 때 287 mg/gTS(8,176 mg/L)이 생산되었고 Clostridium formicoaceticum을 $5{\times}10^4\;cells/gTS$의 농도로 접종하였을 때 551 mg/gTS(15,715 mg/L)이 생산되어 대조군과 비교하여 3배의 높은 생산성을 보였다. 부틸산의 생산에 대한 실험에서 Clostridium butyricum을 $2.5{\times}10^5\;cells/gTS$의 농도로 접종하였을 때 214 mg/gTS(6,106 mg/L)이 생성되었고 Clostridium acetobutyricum을 $1.5{\times}10^5\;cells/gTS$의 농도로 접종하였을 때 254 mg/gTS(7,261 mg/L)이 생성되어 대조군과 비교하여 2배의 생산성을 나타내었다.
본 연구는 단기 숙성형 생햄의 식중독균 오염 상태와 냉장 및 실온 저장 조건 중 미생물수의 변화를 살펴보기 위하여 실시되었다. 생햄의 등심 원료육에서의 미생물 오염도를 조사한 결과 총균수는 $3.11\;log\;CFU/cm^2$이었고 유산균, Pseudomonas spp., Clostridium perfringens 및 효모와 곰팡이는 모두 2 log 미만이었으나 Enterobacteriaceae가 3.11 log로서 주종균이었다. 생햄 원료 및 10과 $25^{\circ}C$에서 저장 된 제품에서 Salmonella spp., Staphylococcus aureus, Vibrio parahaemolyticus, Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes와 Escherichia coli O157:H7 등 6가지 식중독균은 발견되지 않았다. 생햄의 초기 총균수는 3.06 log CFU/g이었으며 90일 후에도 균수 증가는 미미하여 $10^{\circ}C$와 $25^{\circ}C$에서 각각 4.6과 4.69 log CFU/g이었다. 생햄의 저장 중 주 종균은 유산균과 Staphylococcus균이었다.
Cook-chill 제품의 원료로 사용하는 시금치와 수세한 시금치에 대해 Aeromonas hydrophila, Escherichia coli O157:H7, Plesiomonas shigelloides, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia enterocolitica, Bacillus cereus, Campylococcus spp., Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus 등 12종류의 병원성세균의 존재 여부를 확인하였다. 이들 시금치로부터 4종의 병원성세균을 분리하여 API kit와 ATB 자동 동정기를 포함한 형태학적 및 생화학적 방법에 의해 동정하였다. MacConkey agar에서 분리된 균은 그람 음성 간균으로 glucose를 이용하여 gas를 생성하며, lactose 음성, sucrose 양성, lysine 양성으로 ATP system에서 A. hydrophila 종에 대해 99.9%의 상동성을 보였다. Cereus Selective agar에서 분리된 균은 그람 양성 간균, 포자 형성균으로 catalase 양성, mannitol 음성, lecithinase 양성, Simmon's citrate 음성, $NO_2$ 생성 양성, arginine 양성균으로 ATB system에서 B. cereus 종에 대해 99.8%의 상동성을 보였다. Clostridium Perfringens agar에서 분리된 균은 그람 양성 간균, 혐기성균으로 포자를 형성하며, mannitol 양성, lecithinase 양성으로 ATB system에서 C. perfringens 종에 대해 99.9%의 상동성을 보였다. Baird-Parker agar에서 분리된 균주는 그람 양성 구균으로 mannitol, lecithinase, lactose, clumping factor, coagulase 및 hemolysin 양성, xylose 음성으로 ATB system에서 S. aureus 종에 대해 97.8%의 상동성을 보였다. Salmonella spp., E. coli O157:H7, Y. enterocolitica를 포함한 다른 병원성세균은 분리되지 않았다. 시금치에서 분리한 S. aureus 5균주 중 2균주는 SET-RPLA kit에서 enterotoxin type A를 생성하였고 3균주는 enterotoxin을 생성하지 않았다. B. cereus 5균주는 CRET-RPLA kit에서 모두 enterotoxin을 생성하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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