• Journal of Forest and Environmental Science
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• 제23권1호
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• pp.65-71
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• 2007

2000년대에 이르러 새로운 역병균들이 발생되어 산림에 피해를 주고 있는 가운데 최근 산림에 식재되어 있는 밤나무에서도 역병균에 의해 잉크병이 큰 문제가 되고 있다. 우리나라에서도 2005년 경상남도와 전라남도 일부지역에서 잉크병과 비슷한 증상이 나타나 2006년 11월 역병균 선택배지를 이용하여 분리하여 형태학적 분자생물학적 비교분석하였으며, 코흐의 법칙을 완성하기 위해 병원성 실내 외 검정을 실시하였다. 또한 P. katsurae와 계통분류학상 매우 비슷한 P. hevae와 유전적 관계를 살펴보기 위해 다른 나라에 분리된 균주들과 비교분석을 실시하였다. 그 결과, 한국에서는 아직까지 보고되어 있지 않은 Phytophthora katsurae로 동정되었으며 병원성 검정실험을 통해 코흐의 법칙을 만족시켰다. 밤나무 품종별 민감도에 약간의 차이를 확인하였으며 일본균주와 뉴질랜드균주와 유전자 염기서열상 100% 일치하는 것으로 나타났다.

• The Plant Pathology Journal
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• 제25권2호
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• pp.121-127
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• 2009

Since July 2005, survey of chestnut ink disease was carried out in chestnut stands located at southern parts of Korea. Dead chestnut trees showing inky ooze on necrotic trunks were found in two different locations. In order to isolate and identify the causal fungus, infected tissues and soil samples around dead or dying trees were collected and placed on Phytophthora-selective medium. Rhododendron and chestnut tree leaves were used as a bait to isolate the fungus from soil samples by attracting zoospores in soil suspensions. On V-8 culture medium, the isolates produced homothallic oogonia with protuberances ($34.0-46.2{\times}21.9-26.7{\mu}m$) abundantly, but did not produced sporangia. Mass production of sporangia was possible by immersing agar plugs with actively growing mycelium in the creek water at $18^{\circ}C$ for 3 days. Sporangia were papillate, and ovoid to obpyriform ($17.0-38.9{\times}14.6-29.2{\mu}m$) in shape. Comparison of the ITS sequences revealed that the isolates had 100% identity to the P. katsurae isolates from Japan and New Zealand and 99.6% identity to other P. katsurae isolates. All of the examined isolates from Korea were completely identical to each other in ITS sequence. Numerous sporangia were formed in filtered as well as unfiltered creek water, but no sporangia formed in sterilized distilled water. Light induced sporangia formation, but has no influence on oospore formation. Amendments of ${\beta}$-sitosterol in culture media have no significant effect on mycelial growth but significantly stimulate oospore and sporangia formation.

• Mycobiology
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• 제41권2호
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• pp.86-93
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• 2013

Sequence characterized amplified region (SCAR) markers are one of the most effective and accurate tools for microbial identification. In this study, we applied SCAR markers for the rapid and accurate detection of Phytophthora katsurae, the casual agent of chestnut ink disease in Korea. In this study, we developed seven SCAR markers specific to P. katsurae using random amplified polymorphic DNA (RAPD), and assessed the potential of the SCAR markers to serve as tools for identifying P. katsurae. Seven primer pairs (SOPC 1F/SOPC 1R, SOPC 1-1F/SOPC 1-1R, SOPC 3F/SOPC 3R, SOPC 4F/SOPC 4R, SOPC 4F/SOPC 4-1R, SOPD 9F/SOPD 9R, and SOPD 10F/SOPD 10R) from a sequence derived from RAPD fragments were designed for the analysis of the SCAR markers. To evaluate the specificity and sensitivity of the SCAR markers, the genomic DNA of P. katsurae was serially diluted 10-fold to final concentrations from 1 mg/mL to 1 pg/mL. The limit of detection using the SCAR markers ranged from $100{\mu}g/mL$ to 100 ng/mL. To identify the limit for detecting P. katsurae zoospores, each suspension of zoospores was serially diluted 10-fold to final concentrations from $10{\times}10^5$ to $10{\times}10^1$ zoospores/mL, and then extracted. The limit of detection by SCAR markers was approximately $10{\times}10^1$ zoospores/mL. PCR detection with SCAR markers was specific for P. katsurae, and did not produce any P. katsurae-specific PCR amplicons from 16 other Phytophthora species used as controls. This study shows that SCAR markers are a useful tool for the rapid and effective detection of P. katsurae.

• 식물병연구
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• 제18권2호
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• pp.73-79
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• 2012

Phytophthora katsurae는 밤나무 잉크병의 원인이 되는 병원성 균류이다. P. katsurae를 검출하기 위하여 2개의 duplex PCR primer set을 제작하였다(SOPC 1F/1R+KatI 3F/5R, SOPC 1-1F/1-1R+KatI 3F/5R). SOPC 1F/1R과 SOPC 1-1F/1-1R primer pair는 sequence characteristic amplification regions(SCAR)를 이용하여 제작하였고, KatI 3F/5R primer pair는 internal transcribed spacer(ITS) 부위로부터 제작하였다. 추출한 genomic DNA를 1 mg/ml에서 1 ng/ml까지 10배씩 순차적으로 희석하여 균사량에 따른 Duplex PCR의 민감도를 확인한 결과, 2개의 primer set은 각각 1 ${\mu}g/ml$와 100 ng/ml까지 검출이 가능하였다. 유주포자를 $1{\times}10^6$부터 $1{\times}10^2$ cells/ml까지 10배씩 순차적으로 희석하고 genomic DNA를 추출하여 P. katsurae의 유주포자량에 의한 검출 한계를 확인한 결과, 2개의 primer set 모두 $1{\times}10^5$ cells/ml까지 검출할 수 있었다. 각각의 primer set은 PCR 검출을 실시하였을 때 P. katsurae 균주에서만 PCR 산물이 증폭된 반면에, Phytophthora 16종에서는 P. katsurae에 특이적인 PCR 증폭산물이 생성되지 않았다. 따라서, 2개의 primer set을 이용한 Duplex PCR은 P. katsurae의 신속하고 효과적인 검출에 유용하게 활용될 수 있을 것이다.

• 식물병연구
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• 제17권2호
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• pp.169-176
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• 2011

우리나라에서 분리한 P. katsurae의 유전적 특성을 구명하기 위하여 국내에서 분리한 P. katsurae를 대상으로 nuclear DNA(nDNA)의 ${\beta}$-tubulin (BTU)과 Elongation facter 1 alpha (EF1A) 그리고 rDNA ITS 부위의 PCR-SSCP 분석을 실시하여, P. katsurae와 Phytophthora 속에 속하는 다양한 종들의 각 부위를 대상으로 유전적 유연관계를 비교분석 하고 동정에 이용하고자 하였다. 각각의 Phytophthora 속에서 변이가 가장 많이 발생하는 부위를 포함하여 증폭 시킬 수 있도록 각 부위의 공통 염기배열로부터 제작된 primer는 Phytophthora 종에 특이적인 반응을 나타냄으로서 동정 및 진단에도 유용하게 활용될 수 있을 것으로 판단되었다. SSCP 분석 결과는 국내 P. katsurae 균주와 공시한 다른 Phytophthora 속 균주들과의 구분이 가능하였으며, Phytophthora 종 간의 구분도 가능하였다. 그러나 한 가지 부위만을 이용한 PCR-SSCP 분석은 Phytophthora 종 간의 구분이 어려운 경우도 있었다. 따라서 보다 정확하고 명확한 Phytophthora 종의 유전적 다양성 분석 및 동정을 위하여서는 단일 부위에 의한 PCR-SSCP보다는 복수 부위에 의한 PCR-SSCP를 실시하는 것이 바람직한 것으로 확인되었다.