In biological cell manipulation, manual thrust or penetration of an injection pipette into an egg is currently performed by a skilled operator, relying only on visual feedback information. Massive load of various micro injection of either genes, fluid or cells in the postgenomic era calls a more reliable and automatic micro injection system that can test hundreds of genes or cell types at a single experiment. We initiated to study cellular force sensing in zebrafish eggs as the first step for the development of a more controllable micro injection system by any inexperienced operator. Zebrafish eggs at different developmental stages were collected and an integrated biomanipulation system was employed to measure cellular force during penetrating the egg envelope, the chorion. First of all, the biomanipulation system integrated with cellular force sensing instrument is implemented to measure the penetration force of cell membranes and characterize mechanical properties of zebrafish embryo cells. Furthermore, implementation of cellular force sensing system and calibration are presented. Finally, the cellular force sensing of penetrating cell membranes at each developmental stages was experimentally performed. The results demonstrated that the biomanipulation system with force sensing capability can measure cellular force at real-time while the injection operation is undergoing. The magnitude of the measured force was in the range of several hundreds of uN. The precise real-time measurement should provide the first step forwards for the development of an automatic and reliable injection system of various materials into biological cells.
In biological cell manipulation, manual thrust or penetration of an injection pipette into an embryo cell is currently performed by a skilled operator, relying on visual feedback information only. Accurately measuring cellular forces is a requirement for minimally invasive cell injections. Moreover, the cellular force sensing is essential in investigating the biophysical properties for cell injury and membrane modeling studies. This paper presents cellular force measurements for the force feedback-based biomanipulation. Cellular force measurement system using piezoelectric polymer sensor is implemented to measure the penetration force of a zebrafish egg cell. First, measurement system setup and calibration are described. Second, the force feedback-based biomanipulation is experimentally carried out. Experimental results show that it successfully supplies real-time cellular force feedback to the operator at tens of uN and thus plays a main role in improving the reliability of biological cell injection tasks.
In biological cell manipulation, manual thrust or penetration of an injection pipette into an embryo cell is currently performed by a skilled operator, relying on visual feedback information only. Accurately measuring cellular forces is a requirement for minimally invasive cell injections. Moreover, the cellular farce sensing is essential in investigating the biophysical properties for cell injury and membrane modeling studies. This paper presents cellular force measurements for the force feedback-based biomanipulation. Cellular force measurement system using piezoelectric polymer sensor is implemented to measure the penetration force of a zebrafish egg cell. First, measurement system setup and calibration are described. Second, the force feedback-based biomanipulation is experimentally carried out. Experimental results show that it successfully supplies real-time cellular force feedback to the operator at several tens of uN and thus plays a main role in improving the reliability of biological cell injection tasks.
For mechanical force to induce changes in cellular behaviors, two main processes are inevitable; perception of the force and response to it. Perception of mechanical force by cells, or mechanosensing, requires mechanical force-induced conformational changes in mechanosensors. For this, at least one end of the mechanosensors should be anchored to relatively fixed structures, such as extracellular matrices or the cytoskeletons, while the other end should be pulled along the direction of the mechanical force. Alternatively, mechanosensors may be positioned in lipid bilayers, so that conformational changes in the embedded sensors can be induced by mechanical force-driven tension in the lipid bilayer. Responses to mechanical force by cells, or mechanotransduction, require translation of such mechanical force-induced conformational changes into biochemical signaling. For this, protein-protein interactions or enzymatic activities of mechanosensors should be modulated in response to force-induced structural changes. In the last decade, several molecules that met the required criteria of mechanosensors have been identified and proven to directly sense mechanical force. The present review introduces examples of such mechanosensors and summarizes their mechanisms of action.
Cells regulate their shapes and motility by sensing the cues from the internal and external microenvironment. Under different circumstances, microglia, the brain resident immune cells, undergo dynamic phenotypic changes, one of which is a remarkable periodic oscillatory migration in vitro. However, very little is known about the kinematic and dynamic perspectives of this oscillatory behavior. In this study, we tracked the changes in cell morphology and nuclear displacement, and visualized the forces using traction force microscopy (TFM). By correlation analyses, we confirmed that the lamellipodia formation preceded the nuclear translocation. Moreover, traction, developed following lamellipodia formation, was found to be localized and fluctuated at two ends of the oscillating cells. Taken together, our results imply that oscillatory microglial cells feature a viscoelastic migration, which will contribute to the field of cell mechanics.
Hemodynamic shear stress, the dragging force generated by blood flow, is known as an anti-atherogenic factor. We tested whether lysyl-tRNA synthetase (KRS) will be utilized as an agent controlling shear-sensing systems. KRS was previously known to be secreted as a pro-inflammatory agent. Here we found that KRS inhibited various shear-stimulated signaling pathways. We further found that KRS binds to detergent-resistant membrane (DRM), indicating that KRS binding molecules exist in DRM, specialized regions of the plasma membrane. DRM plays important roles in a variety of cellular processes and consists of gangliosides, signaling molecules and cytoskeletons. We then determined that KRS was colocalized with integrins ${\alpha}4$, ${\alpha}5$ and $av{\beta}3$. In addition, KRS was shown to be associated with sialic acid, existing at the end of gangliosides. Interestingly, the adherent effect of KRS was inhibited by pretreatment with sialic acid. Moreover, treatment of endothelial cells with neuraminidase appeared to inhibit both the KRS adhesion to endothelial cells and shear-stimulated signaling. In conclusion, KRS is likely to be utilized as a vascular regulator.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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