Efficient plant regenerationsystem from cell suspension cultures was established in D. acicularis (2n = 90) by monitoring ploidy level and visual selection of the cultures. The highly regenerable cell lines selected maintained original ploidy level and consisted of compact cell clumps with yellowish color and relatively moderate growth, suggesting that it is possible to select visually the highly regenerable cell lines with the original ploidy level. All the regenerated plantlets from the highly regenerable cell cultures exhibited normal phenotypes and no variations in ploidy level were observed by flow cytometry (FCM) analysis.
Diterpenoid 생합성의 중요한 전구체인 geranylg geranyl pyrophosphate의 공급을 위해 외부에서 geraniol을 넣어 주었을 때 taxol을 포함한 일부 taxane의 생산이 증대 됨을 알 수 있었다. 또한 투여 시기와 투여량에 따라 결과가 크게 변화하였다. Camphor와 menthol은 taxol과 같은 terpenoid 계열의 물질이지만 외부에서 공급하였을 때에는 taxol 생산을 증대시키는 효과는 없었다. 외부에서 인위적으로 taxol과 cephalomannine, baccatin ill 를 공급했을 때 모든 경우에서 taxal 생산은 자극받지 않았으며 taxal을 공급했을 경우에는 bacca tin ill 의 생산이, cephalamannine을 공급했을 경우에는 7 -epl- 1 Q-deacetyltaxol의 생산이, 그리고 baccatin ill을 공급했을 경우에는 10-deacetyltaxol의 생산이 각각 가장 많이 중대하였다.
Taxus wallichiana Zucc. 현탁세포배양에서 항암제 paclitaxel 생합성 연구를 수행하였다. 현탁세포배양에서 exponential phase의 최고 생장 속도는 0.14 $day^{-1}$이었으며 배가시간이 4.96 day이었다. Paclitaxel은 배양초기에 생성되지 않고 exponential phase 말기부터 서서히 생성되어 stationary phase에서도 이어지며 declined phase에서 최고치를 나타내었다. Paclitaxel의 생산을 촉진하기 위하여 elicitor를 사용하였다. 여러 elicitor 중 jasmonic acid와 cellulase가 paclitaxel의 생성을 증가시켰다. Elicitor는 접종과 동시에 투여했을 때 가장 효과가 좋았으며, jasmonic acid와 cellulase의 combination으로 효과가 더욱 증진했는데 각각 투여할 때보다 1.8배 및 3.1배 paclitaxel 생성이 증가되었다.
Pentachlorophenol(PCP)가 대두(大豆) 및 벼 현탁배양(縣濁培養)과 과 수도체 중에서 수용성성분(水溶性成分)으로 전환(轉換)되는 것을 경시적으로 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 현탁배양에서 처리한 PCP의 50%가 수용성 대사물로의 전환되는 시간은 대두의 경우 4시간, 벼는 48시간 이내였다. 수용성 대사물의 생성속도와 양은 PCP의 cell 생육 저해 정도와 밀접한 관계가 있었다. 2. 식물 cell에서 PCP의 주(主) 대사과정(代謝過程)은 생육시기(生育時期) 및 약제(藥劑) 처리시간(處理時間)을 달리한 전환시험에서 얻은 수용성 대사물 및 glucose cunjugates 함량변화 조사와 conjugates가 가수분해 되는 성질로부터 glucose conjugates(${\beta}$-anomers)형성 반응(反應)임을 알 수 있었다. 3. Cell에서 glucose conjugates는 약제처리(藥劑處理) 초기 및 대수성장기 이전에 생성 속도가 매우 빨라 전체 수용성 대사물의 70% 이상이었으며, 점차 비가수분해성 극성성분(極性成分)으로 전환되었고, 일부는 배양액(培養液)으로 분필(分泌)되었다.
Oh, Myung-Jin;Na, Hye-Ryun;Choi, Hong-Keun;Liu, Jang Ryol;Kim, Suk-Weon
Plant Biotechnology Reports
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제4권2호
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pp.125-128
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2010
Culture conditions were established for high frequency plant regeneration via somatic embryogenesis from cell suspension cultures of Nymphoides coreana. Zygotic embryos formed pale-yellow globular structures and calluses at a frequency of 85.6% when cultured on half-strength Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 0.3 $mg\;l^{-1}$ of 2,4-D. However, the frequency of pale-yellow globular structures and white callus formation decreased slightly with an increasing concentration of 2,4-D up to 10 $mg\;l^{-1}$ with the frequency rate falling to 16.7%. Cell suspension cultures were established from zygotic embryo-derived calluses using half-strength MS medium supplemented with 0.3 $mg\;l^{-1}$ of 2,4-D. Upon plating onto half-strength MS basal medium, over 92.3% of cell aggregates gave rise to numerous somatic embryos and developed into plantlets. Regenerated plantlets were successfully transplanted into potting soil and achieved full growth to an adult plant in a growth chamber. The high frequency plant regeneration system for Nymphoides coreana established in this study will be useful for genetic manipulation and cryopreservation of this species.
Kim, Min-Soo;Lee, Won-Kyu;Kim, Hwa-Young;Kim, Chul;Ryu, Yeon-Woo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제8권3호
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pp.237-244
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1998
A study was carried out to elucidate the relation between the production of flavonol glycosides and the change of phenylalanine ammonia-lyase activity in cell suspension cultures of Ginkgo biloba by the unassisted and synergistic effects of various factors. The quercetin production showed a mixed-growth-associated pattern in cell suspension cultures. Fluorescent light and UV radiation increased phenylalanine ammonia-lyase (PAL) activity, and resulted in the increase of the production of quercetin and kaempferol ten- and four-fold, respectively, as compared to that obtained in the normal culture condition. The cell growth of Ginkgo biloba was enhanced .at higher temperatures whereas the quercetin production was at its maximum at low temperatures. Moreover, the quercetin production was increased by temperature change during the culture period. In particular, the quercetin production was at the highest level when the culture temperature was elevated from $10^{\circ}C\;to\;30^{\circ}C$. The addition of phenylalanine as a precursor in the culture medium stimulated an 8-fold increase in the production of quercetin; the addition of naringenin caused a l0-fold increase. The quercetin production was also greatly increased by feeding enzyme cofactors such as 2-ketoglutarate and ascorbic acid in the culture medium, but specific PAL activity was not increased except with phenylalanine feeding. The synergistic effect of UV radiation and naringenin feeding was observed, resulting in the increase of flavonol glycoside production at a rate higher than in any other case investigated.
We researched effects of growth on initial inoculum size, liquid volume, and medium feeding rate etc. Cell suspension inoculated at low cell concentrations showed a typical growth reduction, whereas root cultures showed an improvement in growth. In this paper, Hairy roots showed high growth rate at 0.4 % inoculum size and 100 mL liquid volume in 250 mL flask cultures.
고구마 현탁배양세포로부터 POD 고생산세포주로 선발한 SP-47세포주를 사용하여 POD생산성을 향상시키기 위하여 식물생장조절제 및 탄소원의 종류와 농도, 세포접종량 등의 배양조건을 적정화하였다. 30 g/L Surcrose, 1 mg/L 2,4-D가 첨가된 LS배지 50mL을 함유한 30 mL Erlenmeyer flask에 세포생중량 1 g을 접종하여 $25^{\circ}C$ 암소에서 100 rpm으로 진탕배양하였을 때 세포생장은 배양 후 15일에 절정에 달하였으나 단위세포당 POD 활성(unit/g dry cell wt)은 배양 25일에 약 6,800으로 이는 실생 서양겨자무뿌리의 것보다 약 30배 높았다. 배양시기별 단위세포당 단백질 함량은 계대배양후 약간 높았다가 감소한 후, 배양 25일까지는 거의 일정한 값을 유지하다가 계속 배양함에 따라 감소하였으나 POD 비활성(unit/mg protein)은 배양후 12일부터 배양말기 (40일)까지 계속하여 증가하였다. 배양시기별 POD 동위효소의 패턴은 배양시기에 관계없이 거의 일정하였으나 배양 25일이후 산성의 주요 동위효소들의 활성이 약간 증가하였다. 이러한 결과로부터 고구마 세포배양의 POD는 세포생장 및 계대배양과 배지고갈로 인한 배양스트레스와 밀접한 관련 이 있을 것으로 간주된다. 본 연구에서 확립한 SP-47세포주는 하나의 동위효소가 강하게 발현되어 높은 활성을 보임으로써 새로운 POD 대량생산 시스템에 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
Various culture conditions for cell growth and berberine production in cork tree (Phellodendron amurense Rupr.) were investigated. Callus was induced from cambium tissue of cork tree, and cultured on LS liquid medium supplemented with 0.5 mg/1 2,4-D, 0.1mg/1 BA, and 3% sucrose. Several factors enhancing berberine production and cell growth in cork tree cell cultures were found. Some of them enhanced both cell growth and berberine production, but others resulted in a decoupling of cell growth and berberine production with significant in the specific levels. High level of nitrate (80mM), high level of phosphate (8.98mM), and sucrose (7%), 1.0mg/l IAA were effective in berberine production, whereas low level of nitrate (40mM), and phosphate (2.25mM), and high level of sucrose (7%) in the medium were effective in cell growth. Two stage culture(first stage for cell growth, and second stage for berberine production) increased berberine production almost twice (5.06mg/g dry weight) as much as single stage cultures in berberine production.
본 논문에서는 Thalictrum rugosum 식물세포의 회분식 배양에 있어서 동역학적 특성들을 연구하였다. 본 실험에서 alkaloid의 생성은 일반적인 2차대사 산물의 생성 특성과 달리 세포성장에 비례함이 확인되었다. 세포 성장기의 비증식속도는 $0.20~0.25\;day\;^{-1}이었으며 FW / DCW 비가 배양상태를 나타내는 중요한 인자임을 알수 있었다. Cell yield는 0.36g cells/g sugar이었으며 berberine은 139mg/L까지 생성되었고 그중 120mg/L는 세포내에 존재하였다. 이를 specific content로 계산하면 dry cell weight의 1.10%가 된다. 세포 성장기에서 비증식속도와 당농도간의 관계는 Monod kinetics로 잘 기술될 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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