These experiments were carried out to construct mouse testis cDNA library and to to seen H-Y Ag gene. Mouse testis was obtained from BALB/c inbreed mouse that was after-born 1 week. Isolation of mouse testis total RNA was carried out by guanidum/cesium choloride, poly(A+) mRNAs were purified by oligo d(T)-cellulose chromatography method. To investigate protein synthesis activity, in-vitro translation carried out by total RNA and poly(A+) mRNA. The products of in-vitro translation were identified in 12.5% PAGE. Single strand DNA and double strand DNA were synthesized from poly(A+) mRNA and purified using phenol/chloroform/isoamylalcohol. Synthesized cDNA was combined with cohesive Eco RI polylinker, its recombination efficiencies were identified by X-gal and IPTG. In the cDNA library, 1$\times$107 phagemids were screened with 32P labelled probe. Hybridization were carried on $65^{\circ}C$ for 16~20hours. And 1$\times$106 phagemids were screened with rabbit-anti-H-Y. In former, select 5 positive clones, and later, 1 positive clone. Its southern blot analysis showed various size of insert cDNA from 0.7kb to 3kb.
Opioid수용체는 adenylate cyclase의 활성을 억제하므로써 cyclic AMP의 양을 감소시킨다. 본 연구에서는 striatum에서 dopamine과 opioid 신경전달계의 상호관계를 알아보고자 haloperidol(750ug/kg)을 10일간 복강내 투여하여 dopaminergic pathway를 차단시킨후 mouse striatum에서 선택적 opioid ${\mu},\;{\gamma}\;{\kappa}$ 수용체 agonist들에 의해 축적되는 cAMP양을 측정하여 본 결과, haloperidol단독투여에 의해서 cAMP는 유의한 증가를 나타내었으며, haloperidol 장기투여된 mouse striatum 에서 morphine(20mg/kg), DAGO(5Oug/kg), DPDPE(50ug/kg), U5O,488H (500ug/kg)투여에 의해서 haloperidol에 의한 cAMP 증가는 억제되었으며, 정상 mouse에 투여된 morphine, DAGO, DPDPE, U5O,488H에 비해서는 DAGO, DPDPE 투여군에서 증가를 나타내었다. Haloperidol장기투여로 인한 morphine, DAGO, DPDPE, U5O,488H의 영향은 naloxone에 의해서 morphine과 U5O, 488H투여군에서 길항되었으며 정상 mouse에 투여된 morphine, DAGO, DPDPE, U5O,488H에 의한 cAMP의 감소는 naloxone에 의하여 모든 실험군에서 길항되었다. 이상의 결과로 보아 dopaminergic denervation시 mouse striatum에서 ${\mu},\;{\gamma},\;{\kappa}$효현제에 의하여 축적되는 cAMP양은 ${\kappa}$수용체 효현제인 U5O,488H에서 가장 현저한 감소를 보여 각 수용체의 활성화정도는 변화되며, 그중에서 ${\kappa}$수용체는 그 기능이 가장 보존되고 있음을 알 수 있었다.
To study the immunotoxicity of mouse injected with fungal mycotoxin, T-2 toxin (Fusarium mycotoxin) was treated to 6 week-old female C3H/He mouse and the body, organ weight and morphological change were investigated. The weights of body, liver and kidney of mouse injected the 2 mg/kg of toxin was decreased to 17, 20 and 3%, respectively, compared to control animal and the comsumption of feed was also decreased with lapsing the time. The fat dropleting phenomenon and destruction of Golgi apparatus in liver and histopathological changes of tissue and mitochondria in small intestine were found by scanning electron microscopic observation.
We isolated a mouse nck cDNA from the thymus cDNA expression library. The cDNA encodes a 377 amino acid protein and displays 97% amino acid sequence identity to human oncogenic protein nck, which is composed almost exclusivelv of three src homology 3 (SH3) domains and one SH2 domain. The sequence analysis also showed that the isolated cDNA is the mouse counterpart of the human nck and different from the mouse grb4, which has been reported to be highly similar to the human nck and, therefore considered as a mouse nck, Northern blot analysis showed that the transcript of the gene was 1.8 kb and was highly expressed in the testis, thymus, and brain but moderately in the liver and lymph node. Western blot analysis showed that the size of the protein was about 47 kDa. Overexpression of the mouse Nck transformed a mouse fibroblast cell line, NIH3T3. The results clearly indicate that normal nck gene has transforming ability and provide an argument against a suggested possibility that the transforming ability of the human nck gene is due to a mutation(s) in the gene.
We have synthesized 4-isonitroso-4H-1-benzopyran and 4-amino-2,3-dihydro -4H-1-benzopyran of chromone derivatives by using condensation method. Physico-chemical properties of these compounds were measured and analyzed by UV and HPLC method. The correlation coefficient of their methanol solutions by UV were 0.9992 and 0.9994, respectively. And oxime compound was resolved within 4 min and had a detection limit of 3 ng at S/N=3 by HPLC using a reversed phase column with three solvents(MeOH, $H_2O$, HAc). The amino compound was resolved within 4.5 min and had a detection limit of 10 ng at S/N=3 by HPLC under the same conditions. Anti-diabetic effect of chromone derivatives were investigated in the streptozotocin (STZ)-induced diabetic rats. Diabetes was induced in male Sprague-Dawley rats by injections of STZ (45 mg/kg, i.v). The investigation of the hair growth effect of isonitrosobenzopyran and 4-aminobenzopyran on the hair of black mouse (C57BL/6) was also carried out. The administraion of their ethanol solution to the black mouse (C57BU/6) through skin them promoted the growth of hair.
In the intestinal mucosa, mast cells are thought to be responsible for the expulsion of parasites. We investigated the relationship of worm expulsion and mast cells in C3H/HeN and BALB/c mice infected with Echinostoma hortense. In addition, we examined whether the worm recovery rate was associated with the strain of mice, and whether a toluidine stain and immunohistochemistry using the c-kit antibody was effective in the detection of mast cells. In order to investigate the mucosal immune response of C3H/HeN and BALB/c mice, each mouse was infected orally with 30 E. hortense metacercariae. Then, the number of mucosal mast cells and worm recovery rates was observed in experimentally infected mouse strains between 1 week and 8 weeks post infection (PI). Mucosal mast cells were increased in 3 weeks P.I. in C3H/HeN and BALB/c mice. On the other hand, only mucosal goblet cells and worm recovery rates correlated in C3H/HeN mice (P=0.0482). Worm recoveries in C3H/HeN mice were 65.7$\pm$5.6, 53.3$\pm$5.4 and 6.7$\pm$0.6 in week 1, 2, and 3 P.I. and strongly decreased in week 3 P.I. Worm recoveries in BALB/c mice were 23.0$\pm$2.5, 10.0$\pm$1.0, and 6.7$\pm$0.6% in week 1, 2, and 3 P.I. and gradually decreased from week 1 P.I. to week 3 P.I. Worm recoveries in C3H/HeN mice were significantly higher than in BALB/c mice (P<0.00l). The number of mast cells in C3H/HeN and BALB/c mice using the anti-c-kit antibody reached to a peak in week 3 P.I. and recovered as normal level in week 5 P.I. and 6 P.I. The number in E. hortense-infected C3H/HeN mice (P=0.0015) was higher than in E. hortense-infected BALB/c mice (P=0.01) compared with the control group. There were significant differences in the number of mast cells among regions of the intestine in in C3H/HeN mice (P<0.05) but not in BALB/c mice (P>0.05). Immunohistochemistry using the anti-c-kit antibody was significant method as an examination of the number of mast cells (P=0.0002). In conclusion, the present study demonstrated that mast cells play an important role in worm recovery, and immunohistochemistry using the anti-c-kit antibody was superior to toluidine stain as an examination of mast cells.
Endostatin, a proteolytic fragment of collagen XVIII, is a potent inhibitor of angiogenesis and the growth of several primary tumors. However, the opinions on the activity of endostatin derivatives deleted N- or C- terminal are still controversial. In this regard, we produced mouse endostatin and its derivatives in the prokaryotic system, and studied their anti-tumor activity. The [$^3H$]-thymidine incorporation assay demonstrated that N-terminal deleted mouse endostatin, and a C- and N-terminal deleted mutant, effectively inhibited the proliferation of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). The biological activity of endostatin was also shown by its in vivo anti-angiogenic ability on the chorioallantoic membrane (CAM) of a chick embryo. Treatment of $200\;{\mu}g$ of mouse endostatin, or N-terminal deleted mouse endostatin, inhibited capillary formation of CAM 45 to 71%, which is comparative to a 80% effect of positive control, $1\;{\mu}g$ of retinoic acid. An in vivo mouse tumor growth assay showed that N-terminal deleted mouse endostatin, and the N-/C-terminal deleted mutant, significantly repressed the growth of B16F10 melanoma cells in mice as did the full-length mouse endostatin. According to these results, N-and N-/C-terminal deleted mouse endostatins are the potent inhibitors of tumor growth and angiogenesis.
Park, M.C.;Kim, J.Y.;Kim, S.B.;Park, Y.S.;Park, H.D.;Lee, J.H.;Oh, D.S.;Kim, Jae-myeoung
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제22권2호
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pp.174-180
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2009
This study was carried out to establish an appropriate condition for the efficient cryopreservation of the mouse pronuclear embryo. In vitro cryopreservation of pronuclear embryos was carried out by slow freezing or vitrification methods and development rate of 2-cell, blastocyst and hatched blastocyst was measured as well as survival rate of the thawed pronuclear embryo. After slow freezing, vitrification and thawing of mouse pronuclear embryos, the survival rate and blastocyst development rate for the vitrification group was 97.3 and 53.4%, respectively, which was significantly higher as compared to the slow freezing group with 88.6 and 23.9%, respectively (p<0.05). Blastocyst developmental rate in each experimental group was significantly higher for 21 h in the post-hCG group at 40.5-57.0% than the 24 h post-hCG group at 40.5% (p<0.05). ICM (Inner cell mass) cell numbers of blastocyst-stage embryos during the different stages of mouse pronuclear embryos, slow freezing and vitrification period in the control and vitrification groups were 22.1${\pm}$2.7 and 17.0${\pm}$3.1-22.0${\pm}$3.2, respectively; hence, the slow freezing group (10.2${\pm}$2.0) had significantly higher cell numbers than those of the other two groups (p<0.05). Trophoblast (TE) cell number in the control group, 65.8${\pm}$12.6, was significantly higher than in the slow freezing group, 41.6${\pm}$11.1 (p<0.05). The total cell numbers in the control group and 21 h post hCG group were 87.9${\pm}$13.6 and 81.8${\pm}$14.1, respectively, and were significantly higher than for the slow freezing group (51.8${\pm}$12.6; p<0.05).
목적 : 착상전기의 진단 및 치료 영역의 방사선 조사가 임신 ddy mouse에서 산전 사망과 외부 기형을 유발하는지, Compaction전 시기의 반응에 시기별 차이가 있는지 그리고 계통에 따르는 차이가 있는지 여부를 알아 보고자 하였다. 대상 및 방법 : 임신 ddy mouse 대조군 32 마리와 실험군 53 마리를 대상으로 연구를 시행하였으며, 실험군에 대한 방사선 조사는 착상전의 중요한 두 시기인 24 h p.c.와 48 h p.c.에 진단 영역에서도 이용되는 방사선 선량인 0.1, 0.5 Gy를 포함하여 0.75, 1.5, 3 Gy를 조사한 후, 임신 18일에 희생시켜 산전 사망 즉 착상전 사망, 배 사망 및 태아 사망과 외부 기형을 관찰하였다. 결과 : 1) 착상전 사망은 24 h p.c. 및 48 h p.c.에서 대조군에 비해 현저하게 많이 발생하였으며 선량 의존성을 나타냈고, 시기별 한계 선량은 각각 0.05 Gy 및 0.075 Gy이상으로 24 h p.c.가 48 h p.c.보다 방사선에 대한 감수성이 높은 시기임을 알 수 있었다. 2) 배 사망은 48 h p.c.의 0.1 Gy 조사군을 제외한 24 h p.c. 및 48 h p.c.의 모든 조사군에서 대조군에 비해 많이 발생하였고 선량 의존성을 보였으며, 한계 선량은 각각 0.1 Gy 및 0.25 Gy이상으로 24 h p.c.가 48 h p.c.보다 방사선 조사에 의한 배 사망의 감수성이 높았다. 3) 태아 사망은 24 h p.c. 및 48 h p.c.의 실험군 모두에서 발생하지 않았다. 4) 외부 기형은 24 h p.c. 실험군에서 뇌노출 기형 2예, 안검결손 기형 3예, 무안구증 3예, 구개열 2예, 복벽 파열 2예, 꼬리 기형 2예 및 다리 기형 1예, 국소 복벽 결손 1예 등이 발생하였는데, 그 중 진단 영역의 방사선 선량인 0.1 Gy군에서 안검결손 기형 1예, 복벽 파열 1예, 0.5 Gy군에서 뇌노출 기형 1예, 꼬리 기형 2예 및 다리 기형 1예가 발생하여 대조군에 비해 통계적으로 유의한 증가를 나타냈으며 이 시기의 한계선량은 0.2 Gy이상이었다. 48 h p.c.군에서도 안검결손 기형 1예, 꼬리 기형 2예가 발생하였으나 대조군과 통계적인 유의차가 없었다. 결론 : 이상의 결과를 통해 치료 영역뿐만 아니라 진단 영역의 방사선 조사로도 착상전기 임신 ddy mouse에서 착상전 사망 및 배 사망이 발생하고 24 h p.c.에서는 기형도 유발되어 이 시기의 방사선 영향이 "all-or-none" 반응만 일어나는 것이 아님을 알 수 있었으며, 24 h p.c.가 48 h p.c.보다 방사선 감수성이 높은 시기라는 사실과 함께 다른 연구 결과들과 비교하여 계통에 따르는 차이가 있음을 알 수 있었다. 그러므로 가임기 여성의 방사선 진단 및 치료시 Rugh의 10일 법칙을 적용하여 착상전기 방사선 조사로 인한 부작용들을 적극적으로 예방하는 것이 매우 중요하다고 생각한다.
Eight-cell mouse embryos equilibrated with vitrification solution(VS3), consisting of glycerol and polyethlene glycol, were plunged directly into liquid nitrogen. The embryos were cryopreserved by vitrification without intra- and extracellular ice formation. After the vitrified embryos were warmed at 4$^{\circ}C$, sucrose dilution procedures were examined and the survival embryos were transferred to recipients after 48h incubation in vitro. The results were obtained as follows. 1. Mouse embryos equilibrated with VS3 were diluted with 1.5m sucrose-HB 1 solution, 0.5M sucrose-HB1 solution for 5min at room temperature, respectively. The proportion of vitrified-warmed embryos developed to blastocyst(85.7%) was as high as that of the embryos diluted with 1.04M sucrose-HB1 solution at 4$^{\circ}C$(85.5%). 2. Normal live youngs were obtained in 53.9%(55/102) of the vitrified-warmed embryos after tranfer to pseudopregnant recipients.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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