본 연구는 핵이식 기술에 의한 재구축 배의 작성과정에서 핵의 세포주기단계에 따른 재구축 배의 염색체의 핵상변화를 검토하고, 염색체의 핵상변화와 핵이식란의 체외발육과의 관계를 검토하였다. 공핵란은 nocodazole 처리에 의해 분할구가 분열기에 정지되도록 한 후, 분열개시 1.5 시간 이내, 분열 후 3 시간째 핵 및 무처리 분할구 핵올 활성화 전 (metaphase-II기 : M II기 ), 후 (S 기)의 탈핵 미수정란 세포질에 이식하였다. MII기 수핵란에 핵이식 된 재구축 배의 극체상 방출, 미성숙 염색체응축, 염색질구조 변화 등과 같은 핵형 변화 형태 및 재구축 배의 발육능은 핵의 세포주기 단계에 의해 영향을 받았으며, 극체상 방출 유무에 따라서도 재구축 배의 발육율에 차이가 있었다. S기 수핵란에 핵이식 된 경우에는 이식된 핵의 형태변화가 거의 없었다. 본 연구의 결과는 재구축 배의 핵형 변화가 핵 및 세포질의 세포주기단계에 따라 다양하며, 이것이 핵이식 재구축 배의 발육에 영향을 미칠 수 있음을 확증한다.
Tsuzuki, Yasuhiro;Toyama, Hitomi;Nabenishi, Hisashi;Morita, Tetsuo;Ashizawa, Koji
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제23권7호
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pp.873-879
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2010
We investigated the effect of various concentrations of taurine during in vitro fertilization (IVF) on the embryonic development up to the blastocyst stage of bovine oocytes fertilized with three different Japanese Black bulls (Bull A, B and C). In vitro matured oocytes were fertilized with various concentrations of taurine (0, 1, 10, 50 and 100 mM) in the presence of 2.5 or 5.0 mM caffeine plus $25{\mu}g$/ml heparin (CH) for 6 hr or $100{\mu}g$/ml heparin (H) for $24{\pm}2$ h. After IVF, the cleavage rates from the 2 to 16 cell stage determined at 3 days and the development rates up to the blastocyst stage determined at 7-8 days from the onset of IVF were assessed. Although the cleavage rates for the taurine concentration groups were not significantly increased in any of the three bulls in the CH groups, the development rates up to the blastocyst stage of the 50 mM taurine group of Bulls A and B, and of the 1 to 50 mM groups of Bull C were increased (p<0.05) compared to those of the control (0 mM taurine) groups. On the other hand, none of the bulls in the H groups showed any significant increase either in the cleavage rates or blastocyst formation rates in any taurine concentrations groups compared with those of the control groups. These results indicate that the addition of 50 mM taurine to a fertilization medium containing caffeine and heparin may stimulate embryonic development up to the blastocyst stage when fertilized with different bull semen.
Bacillus subtilis의 세포내 이눌라아제가 부분정제되고 그의 작용 모드와 일반적 특성이 조사되었다. 이 효소는 gel filtration에 의하여 분자량을 추정하였을 때 49,000이었고, 등진점은 5.2 이었다. 기질에 대한 친화성의 지표인 Km값은 설탕에 대해서는 10mM, 라피노오스에 대해서는 18mM 이었다. 이 효소는 산성쪽에서는 불안정한 단백질로서 pH6.6에서 최대 활성을 보였으며 최적온도는 10분간 반응시켰을 때 50'C였다. 이 효소의 작용모든는 이눌린같은 구조를 가지는 과당 중합체를 과당 끝부분으로부터 하나씩 잘라가는 exo-cleavage 형이었다.
Kim, C.K.;Chung, Y.C.;Park, J.W.;Yoon, J.T.;Kim, H.T.
한국가축번식학회지
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제12권2호
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pp.120-124
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1988
Rat oocyte-cumulus complexes were cultured in verious media in order to induce maturation division in vitro. When the complexes were cultured in mKRB containing estrous rat serum (ERS) and FCS of 5% instead of BSA higher proportions(83.3 and 86.7%) of oocytes matured to metaphase II in 20h compared to control(75%) and t도 maturation rates in mKRB plus FCS were generally higher than those in mKRB plus ERS. Fertilization and early cleavage rates in vitro of the intact oocytes matured in mKRB containing BSA and FCS were generally higher than those of cumulus-removed oocytes and these rates were higher in mKRB containing 5% FCS than those in mKRB containing BSA. These results indicate that maturation rate in vitro was greatly increased by the addition of FCS instead of BSA to mKRB solution and the presence of cumulus cells around oocytes prior to sperm insemintion may be responsible for the increase of in vitro fertilization and early cleavage rates.
In order to find the rational methods for improving the thermal stability of subtilisin Carlsberg, the mechanisms of irreversible thermoinactivation of the enzyme were studied at $90^{\circ}C.$ At pH 4, the main process was hydrolysis of peptide bond. This process followed first order kinetics, yielding a rate constant of $1.26\;{\times}\;10^{-1}h^{-1}$. Hydrolysis of peptide bond of PMS-subtilisin occurred at various sites, which produced new distinct fragments of molecular weights of 27.2 KD, 25.9 KD, 25.0 KD, 22.3 KD, 19.0 KD, 17.6 KD, 16.5 KD, 15.7 KD, 15.0 KD, 13.7 KD, and 12.7 KD. Most of the new fragments originated from the acidic hydrolysis at the C-side of aspartic acid residues. However 25.0 KD, 15.7 KD, and 13.7 KD which could not be removed in purification steps stemmed from the autolytic cleavage of subtilisin. The minor process at pH 4 was deamidation at asparagine and/or glutamine residues and some extend of aggregation was also observed. However, the aggregation was main process at pH 7 with a first order kinetic constant of $16 h^{-1}.$ At pH 9, the main process seemed to be combination of deamidation and cleavage of peptide bond.
The potential energy surface (PES) for the loss of HCN or HNC from the pyrazine molecular ion was determined based on quantum chemical calculations using the G3//B3LYP method. Four possible dissociation pathways to form four $C_3H_3N^{+{{\bullet}}$ isomers were examined. A Rice-Ramsperger-Kassel-Marcus quasi-equilibrium theory model calculation was performed to predict the dissociation rate constant and the product branching ratio on the basis of the obtained PES. The resultant rate constant for the HCN loss agreed with the previous experimental result. The kinetic analysis predicted that the formation of $CH=CHN{\equiv}CH^{+{\bullet}}+HCN$ was predominant, which occurred by three consecutive steps, a C-C bond cleavage to form a linear intermediate, a rearrangement to form an H-bridged intermediate, and elimination of HCN.
대전 근교의 농약으로 오염된 토양으로부터 파라치온을 분해하는 81균주를 분리한 후, 분리균주들중 파라치온 이용능이 가장 우수한 한 균주를 최종선별하였다. 최종 선별된 균은 생리생화학적 조사와 16S rRNA 염기 서열분석 등을 통하여 Pseudomonas rhodesiae H5로 확인되었다. Pseudomonas rhodesiae H5는 다양한 당을 이용하였으나 sorbose는 이용하지 못하였다. 또 이 균주는 ampicillin, spectinomycin, mito-mycin C에는 일부 저항성을 가지나 kanamycin, chloram-phenicol에는 저항성을 나타내지 않았다. 그리고 $BaCl_2$, LiCl, $MnSO_4$등의 중금속에서는 mg/ml 단위까지 강한 내성을 나타냈다. Pseudomonas rhodesiae H5의 최적 생장 조건은 3$0^{\circ}C$, pH 7.0 이었고, 이 균주는 파라치온의 organophosphate bond를 가수분해하여 p-nitrophenol를 생성한 후 ortho-ring cleavage를 거쳐 중심대사에 연결되는 것으로 추정된다.
Kim, Myung-Wan;Ju, Sung-Min;Kim, Kun-Jung;Yun, Yong-Gab;Han, Dong-Min;Kim, Won-Sin;Jeon, Byung-Hun
동의생리병리학회지
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제19권1호
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pp.234-241
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2005
Galla Rhois is a nest of parasitic bug, Mellaphis chinensis Bell, in Rhus chinensis Mill. Galla Rhois has been used for the therapy of diarrhea, peptic ulcer, hemauria, etc., that showed various antiinflammatory activity, and other biological properties. We studied the effect of Galla Rhois water extract(GRWE). The cytotoxic activity of GRWE in HL-60 cells was increased in a concentration-dependent manner. GRWE was cytotoxic to HL-60 cells, with $IC_50$ of $100{\mu}g/m{\ell}$. Treatment of GRWE to HL-60 cells showed the fragmentation of DNA in a concentration manner, suggesting that these cells underwent apoptosis. In addition, the flow cytometric analysis revealed GRWE concentration-dependently increased apoptotic cells with hypodiploid DNA content and arrested G1 phase of cell cycle. These results indicate that GRWE may have a possibility of potential anticancer activities. Treatment of HL-60 cells with GRWE was induced activation of caspase-3, caspase-8 and proteolytic cleavage of poly(ADP-ribose) polymerase. Also, caspase-3 was directly activated via caspase-8 activation. GRWE also caused the release of cytochrome c from mitochondria into the cytosol. GRWE-induced cytochrome c release was mediated by caspase-8-dependent cleavage of Bid and Bax translocation. These results suggest that caspase-8 mediates caspase-3 activation and cytochrome c release during GRWE-induced apoptosis in HL-60 cells.
Kim, Eun-Ji;Kang, Jung Il;Tung, Nguyen-Huu;Kim, Young-Ho;Hyun, Jin Won;Koh, Young Sang;Chang, Weon-Young;Yoo, Eun Sook;Kang, Hee-Kyoung
Biomolecules & Therapeutics
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제24권6호
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pp.623-629
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2016
(1S,2S,3E,7E,11E)-3,7,11,15-cembratetraen-17,2-olide (LS-1), a marine cembrenolide diterpene, has anticancer activity against colon cancer cells such as HT-29, SNU-C5/5-FU (fluorouracil-resistant SNU-C5) and SNU-C5. However, the action mechanism of LS-1 on SNU-C5 human colon cancer cells has not been fully elucidated. In this study, we investigated whether the anticancer effect of LS-1could result from apoptosis via the modulation of $Wnt/{\beta}$-catenin and the TGF-${\beta}$ pathways. When treated with the LS-1, we could observe the apoptotic characteristics such as apoptotic bodies and the increase of sub-G1 hypodiploid cell population, increase of Bax level, decrease of Bcl-2 expression, cleavage of procaspase-3 and cleavage of poly (ADP-ribose) polymerase in SNU-C5 cells. Furthermore, the apoptosis induction of SNU-C5 cells upon LS-1 treatment was also accompanied by the down-regulation of $Wnt/{\beta}$-catenin signaling pathway via the decrease of GSK-$3{\beta}$ phosphorylation followed by the decrease of ${\beta}$-catenin level. In addition, the LS-1 induced the activation of TGF-${\beta}$ signaling pathway with the decrease of carcinoembryonic antigen which leads to decrease of c-Myc, an oncoprotein. These data suggest that the LS-1 could induce the apoptosis via the down-regulation of $Wnt/{\beta}$-catenin pathway and the activation of TGF-${\beta}$ pathway in SNU-C5 human colon cancer cells. The results support that the LS-1 might have potential for the treatment of human colon cancer.
Amphoteric surfactants were synthesized by the cyclization of 1-(2-hydroxyethyl)-2-undecyl-2-imidazoline [I] with acrylic acid ethyl ester. Compound [I] was easily hydrolyzed with water, especially in the presence of a alkali, to afford amidoamines. After [I] was hydrolyzed, the reaction mixture was allowed to react with acrylic acid ethyl ester and then soapoinfied. Only sodium salts of N- -(2-carboxyethyl)-N'-(2-hydroxyethyl)aminoethyl]dodecanoyl amide[III] was obtained. However, when the reacton of [I] with acrylic acid ethyl ester was carried out in the presence of water, followed by soapnification, ring cleavage of [I] occurred at 2, 3 position, different from hydrolysis of [I] where the cleavage occurred at 1, 2 position, to give sodium salts of N-[N'-(2-carboxyethyl)aminoethyl]-N-(2-hydroxyethyl)dodecanoyl amide [IV] and N-[N', N'-bis(2-carboxyethyl)aminoethyl]-N(2-hydroxyethyl)dodecanoyl amide [V] as main products.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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