The study for the quantitative analysis of saikosaponin of Bupleurum falcatum root produced by tissue culture was attempted. The optimal concentration of 2,4-D was 0.1 mg/l for inducing the callus. The induction and growth of the adventitious root from the callus was obtained in the suspension culture containing MS basal medium supplemented with no plant growth regulators. The results of the quantitative analysis of saikosaponins by high performance liquid chromatography (HPLC) showed that the content of saikosaponin a and c was high in the one-year-old root from somatic embryos and that of saikosaponin d was remarkably high in three-months-old adventitious root from callus.
Pandey, M. B.;Singh, Ashok K.;Singh, Anil K.;Singh, U. P.
Mycobiology
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제35권3호
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pp.157-158
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2007
The alkaloid fuyuziphine was isolated from the whole plant of Fumaria indica. It had inhibitive effect against spore germination of some plant pathogenic fungi (Collectotrichum sp., C. gloeosporioides, C. falcatum, Curvularia maculans, C. lunata, Erysiphe cichoracearum, Helminthosporium pennisetti, Oidium erysiphoides, Ustilago cynodontis, Alternaria chieranthi, A. mel-ongenae, A. brassicicola and A. solam). Curvularia lunata, Oidium erysiphoides, Alternaria brassicicola and A. solani did not germinate at 750 and 1000 ppm and Colletotrichum gloeosporioides, C. falcatum, Curvularia maculans were inhibited at 1000 ppm for 24 hr incubation. Germination of most fungi was significantly inhibited at $100{\sim}750ppm$.
시호 캘러스로부터 유도된 부정근의 saikosaponin 함량을 분석하였다. 캘러스로부터 부정근 발생은 0.1 mg/L a4-D가 첨가된 MS배지에서 가장 양호하였으며, 배양기간에 따른 부정근 형성은 오래된 캘러스에 비해 4주 배양한 캘러스가 효과적이였다. 캘러스당 부정근 형성율은 캘러스의 크기가 900-1000 $\mu$M에서 가장 높았다. Saikosaponin의 총 함량은 배양기간이 길어짐에 따라 현저히 증가하였다. Saikosaponin a와 d의 함량은 배양 150일에서 g부정근 건물 중량당 각각 2089 $\pm$ 124 $\mu$g과 4778 $\pm$ 214 $\mu$g이였으며 saikosaponin c의 함량은 60일 배양에서 3492 $\pm$ 123 $\mu$g 으로 높았다.
Discovery and isolation of compounds capable of blocking the interactions between VCAM-1 and VLA-4, a major pair of adhesion molecules contributing to the different steps of leukocyte migration across the endothelium in inflammatory responses, has been a major goal of this lab. Through bioactivity-guided fractionation, five saikosaponins were subsequently isolated from the methanol extracts of the roots of Bupleurum falcatum L. Their structures were elucidated by spectroscopic analysis ($^1H-$, $^{13}C$-NMR and 2D-NMR), as follows, saikosaponins: A (1); D (2); C (3); B3 (4); B4 (5). Compounds 1 and 2 inhibited interaction of sVCAM-1 and VLA-4 of THP-1 cells with respective $IC_{50}$ values of 7.8 and 1.7 ${\mu}M$. The aglycone structure of 2 also showed cell adhesion inhibitory activity with an $IC_{50}$ value of 21.1 ${\mu}M$. With these results, we suspect these two saikosaponins from the Bupleurum falcatum L. roots to be prime candidates for therapeutic strategies towards inflammation.
한국에서 재배되고 있는 시호(Bupleurum falcatum L.)의 유전적 계통의 확립을 위해 시호(Bf), 참시호(BfC), 대전 삼도시호(BfJ) 및 수원 삼도시호(BfS)등 4계통을 대상으로 핵형분석을 통해 염색체의 다형현상을 비교하고, SDS PAGE를 이용하여 저장단백질의 양상을 분석하였다. 체세포 염색체 수는 3계통(Bf, BfC, BfJ)에서 2n=20, 1 계통(BfS)에서 2n=26으로 구분되었다. 염색체 1번은 2n=20 계통의 경우 차중부 염색체였으나, 계통 2n=26에서는 중부 염색체로 관찰되어 차이를 보였다. 계통 2n=20에서 2번, 3번 및 5번염색체가 다형현상을 보였으며, 한국에서 재배되고 있는 계통의 핵형은 일본에서 도입되어 재배되고 있는 대전 삼도시호 및 수원 삼도시호와 차이를 보였다. 이러한 결과는 세포유전학적으로 다른 2가지 이상의 계통이 한국에서 재배되고 있음을 보여주는 것이다. 종자에서 추출한 저장 단백질은 45KD 이상의 단백질에서 수적 차이를 보였으며, 2n=20의 계통에서 3개, 2n=26 계통에서 2개의 특이한 밴드가 관찰되었다.
In the present study, the halophyte C. falcatum extract and its solvent fractions (n-hexane, 85% aqueous methanol, n-butanol, and water) were evaluated for antioxidant and anti-inflammatory activities. Antioxidative ability was measured by DPPH radical, intracellular reactive oxygen species (ROS) and peroxynitrite scavenging, DNA oxidation inhibition, and ferric reducing antioxidant power (FRAP). For DPPH radical and peroxynitrite scavenging, DNA oxidation inhibition, and FRAP, 85% aq.MeOH and n-BuOH fractions showed significant scavenging activity. For production of intracellular ROS in HT-1080 cells, 85% aq.MeOH fraction showed the highest scavenging activity. In addition, anti-inflammatory activity was also assessed by measuring the inhibitory effect against mRNA expression of pro-inflammatory factors (NO, IL-1β, IL-6 and COX-2) in LPS-stimulated Raw 264.7 macrophages. For NO production, crude extract exhibited a strong inhibitory effect at a concentration of 100 ㎍/ml. For mRNA expression of pro-inflammatory cytokines (IL-1β, IL-6, and COX-2), n-BuOH greatly suppressed expression levels of IL-1β and IL-6 at 100 ㎍/ml concentration while 85% aq. MeOH fraction significantly inhibited that of COX-2 even at 100 ㎍/ml. These results suggest that C. falcatum may be used as a potential source for the development of a natural antioxidant or anti-inflammatory agent.
본 실험(實驗)은 자호종자(紫胡種子)의 발아적정온도(發芽適定溫度)를 구명(究明)하고, 유수 황산(流水 黃酸) 및 $GA_3$ 처리(處理)가 시호종자의 발아(發芽)에 미치 는 영향(影響)을 조사(調査)하며, 발아억제물질(發芽抑制物質)을 검정(檢定)하고자 수행(遂行)하였던 바 다음과 같은 결론(結論)을 얻었다. 1. 공시품종(供試品種)모두 암상태(暗狀態)에서 15, 20, 25및 $30^{\circ}C$ 처리(處理)에서는 $15^{\circ}C$에서 발아율(發芽率)이 가장 높게 나타났으며, 황산0.1및 1.0%를 5, 10 및 60분간처리 하였을 경우는 두 품종 모두 5분간 처 리 하였을 때 발아율이 높았으며, 유수(流水)에 1, 2및 5일간 처리하였을 경우는 두 품종 모두 2일간 처리 하였을 때 발아율이 가장높았고, 10, 50 및 100ppm의 $GA_3$를 처리하였을 경우는 두 품종 모두 100ppm에서 발아율이 높았다. 이상 모든 처리(處理)의 품종간 비교에서는 처리에 상관(相關)없이 정선종이 삼조종보다 발아율이 높게 나타났다. 2. SEM으로 관소(觀素)한 결과(結果) 무처리 에 북(比)해 유수(流水)에 2일간 처리한 경우는 시호종자의 종피 에 붙어 있던 많은 발아억제물질(發芽抑制物質)같은 것이 씻겨져 종피 표면(種皮 表面)이 깨끗하였다. 3. 시호종자 EtOH 추출물 농도(抽出物 濃度)가 4000ppm일 때 정선종에서는 41.7%, 삼도종에서는 58.3%의 상추종자 발아율을 나타내어 추출(抽出)농도가 높아질수록 상추종자 발아억제 현상(發芽抑制 現象)이 심(甚)하게 나타났다. 4. Phenolic acids의 검정(檢定)에 있어서는 두 품종에서 orchinol, Pyrogallol 및 p-hydroxybenzoic acid의 함양(含量)이 모두 높게 나타났으나, 삼도종은 정선종에 비하여 salicylic acid와vanillic acid의 함량이 다소 낮게 나타났다.
시호 재분화 체세포클론과 야생 개체의 뿌리에서 사이코사포닌 함량을 정량하여 비교 분석하였다. 사이코사포닌 함량은 1년생 체세포클론, 경상북도 영덕시호, 강원도 정선시호, 2년생 체세포클론 순으로 높게 나타났다. 사이코사포닌 함량 변이는 3개월간 배양한 캘러스에서 유도되어 2년간 재배된 체세포클론에서 2년간 배양한 캘러스에서 유도되어 1년간 재배된 체세포클론에서보다 높게 나타났다. 이러한 결과는 시호의 경우 사이코사포닌 변이가 캘러스 배양 기간에 별로 영향을 받지 않는다는 것을 보여주는 것이다. 1년생 체세포클론에서 야생 개체에서보다 사이코사포닌 함량이 2배 이상 높은 4개의 체세포클론이 발견되었는데, 이러한 결과는 체세포클론 변이를 이용한 우량 변이주 선발의 가능성을 보여 주는 것이다.
Effects of growth regulators(2,4-D, IAA, NAA, BA and kinetin) and chilling treatment on callus induction. embryogenesis and regeneration through anther cultures of B. falcatum L. were examined. Frequency of callus induction and embryogenesis was effectively increased by the treatment of chilling at 5$^{\circ}C$ for 10 days before anther inoculation. Optimal level of growth regulator for callus induction and embryogenesis from anther was 2,4-D 1.0 mg/L in Murashige and Skoog(MS) basal medium supplemented with 30 g/L sucrose, 8 g/L agar. Frequency of embryogenesis from anther derived callus was increased up to 48% or 45% by addition of IAA 0.1+ kinetin 1.0 mg/L of IAA 0.1+ BA 1.0 mg/L in MS medium, respectively, Optimal medium for obtaining green callus was MS basal supplemented with BA 1.0mg/L. Addition of auxins(IAA or NAA) inhibited the formation of green callus from anther derived callus.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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