• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권4호
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• pp.446-453
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• 1995

$\alpha $-Arabinofuranosidase was produced by E. coli HB101 haboring the recombinant plasmid pKMG11 which contained the arfI gene of Bacillus stearothermophilus. The maximum production of the enzyme was observed when E. coli HB101 cells were grown at 37$\circ$C for 20 hours in the medium containing 0.5% arabinose, 1.0% tryptone, 0.5% yeast extract, and 1% NaCl. The $\ALPHA $-arabinofuranosidase produced was purified to homogeneity using a combination of 20-50% ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sepharose CL-6B ion exchange column chromatography and Sepharose 6B-100 gel filtration. The purified enzyme was most active at 55$\circ$C and pH 6.5. The K$_{m}$ and V$_{max}$ values of the enzyme on $\rho $-nitrophenyl-$\alpha $-arabinofuranoside was determined to be 2.99 mM and 0.43 $\mu $mole/min (319.74 $\mu $mole/min/mg), respectively. The pI value was 4.5. The molecular weight of the native protein was estimated to be 289 kDa. The SDS-polyacrylamide gel clectrophoresis analysis suggested that the functional protein was a trimer of the 108 kDa identical subunits. The N-terminal amino acid sequence of the a-arabinofuranosidase was identified as X-Ser-Thr-Ala-Pro-Arg( \ulcorner )-Ala-Thr-Met-Val-Ile-Asp-X-Ala-Phe.

• 약학회지
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• 제60권1호
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• pp.1-7
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• 2016

The aim of this study was to investigate the prevalence of quinolone resistant E. coli from retail meat and to characterize the resistant determinants. Determination of minimum inhibitory concentration, the sequence analysis of gyrA, gyrB, parC, and parE quinolone resistance determining regions (QRDR), the presences of plasmid mediated quinolone resistance (PMQR) and the expression of efflux pump genes were investigated. Of the total 277 retail meat samples, 67 coli form bacteria were isolated. 15 of 67 isolates showed nalidixic acid resistance and 7 of 15 nalidixic acid resistant isolates were also resistant to ciprofloxacin, moxifloxacin and levofloxacin. 11 of 15 nalidixic acid resistant strains were isolated from chicken, 2 of 15 were isolated from beef and 2 of 15 were isolated from pork samples. 11 of 15 nalidixic acid resistant strains have single mutation at codon 87 (D87N or D87G) in gyrA, 2 of 11 gyrA mutants have double mutations at codon 86 and 87 (L86A and L87I) in parC with mutations at codon 434+445+465 or 429 in gyrB. 2 of 15 resistant isolates harbored qnrS, a PMQR determinant. Over expression of the acrB gene, efflux pump gene (3.93~16.53 fold), was observed in 10 of 15 resistant isolates.

• 대한미생물학회지
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• 제22권3호
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• pp.267-273
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• 1987

In the analysis of plasmid profile obtained by agarose gel electrophoresis, the strain harvoring multiple reference plasmids of known molecular weight were needed to estimate the size of unknown molecular weight plasmids. Six strains of E. coli isolated from clinical specimens carried multiple plasmids and these strains could be available as a reference plasmids harvoring strain. These E. coli strains showed 4 to 9 plasmids of various size ranging 2.5 to 94.3 megadalton (Mdal). The correlation coefficients of linear regression between the relative mobility and molecular weight were 0.99966 to 1.00000. Among them, E. coli KE327 from throat which contained 7 plasm ids as follows: 79 Mdal, 46 Mdal, 33 Mdal(pKY3027 C), 4.9Mdal, 3.8Mdal(pKY3027 E), 3.5Mdal, and 2.7 Mdal. Relative amount of the pKY3027 C was the smallest(7.09%) and that of the pKY3027 E was the largest (24.24%) among the plasmid fractions of E. coli KE327.

• 한국수산과학회지
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• 제10권1호
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• pp.23-29
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• 1977

냉동수산물 가공 공장에서 전처리한 꽃새우, 붕장어, 쥐치를 동결처리전과 Contact freezer에서 $-30^{\circ}C\~-40^{\circ}C$로 급속동결한 것으로 구분하여 동결한 것은 32시간 저장하면서 8일 간격으로 일반세균, 대장균군 E. coli 균수측정을 하는 한편 분리균주를 동정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 시료중의 일반세균, 대장균군 및 E. coli의 분포 범위는 $6.5\times10^5\~9.6\times10^6/g,\;10\times10\~3.7\times10^4/g,<1.8\~2.4\times10^2/100g$으로 대장균군, E. coli는 저장기간이 경과함에 따라 감소하는 경향을 보였으나 일반세균수는 동결처리전후 별 변동이 보이지 않았다. 2. 대장균군 97균주를 분리하여 K. aerogenes 14주, K. cloacae 4주만을 동정했고 그 외는 모두 비동정균 이였다. 3. 대장균군의 약 $90\%$가 $5^{\circ}C$에서 1주일 이내에 발육가능한 저온성 대장균이였다. 4. 동결처리전의 일반세균 Flora는 Vibrio, Pseudomonas가, 동결처리후는 Flavobacterium-cytophaga, Moraxella가 우세하였다. 5. 동결어에 있어서 우세한 Flavobacterium-cytophaga는 $5^{\circ}C$에서 10일 이내에 발육하지 않은 균주가 약 $80\%$를 점하였고, Moraxella는 $5^{\circ}C$에서 전균주가 발육가능하였다.(본 연구는 1976연도 문교부 학술연구 조성비에 의한 것임).

• 한국식품영양학회지
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• 제23권2호
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• pp.171-177
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• 2010

Serratia marcescens catabolic threonine dehydratase는 streptomycin sulfate treatment, Sephadex G-200 gel filtration, AMP-Sepharose 4B affinity chromatography 등의 방법으로 정제하였는데, 최종 단계에서 회수율은 15.5%이었으며 50배 정제되었다. Native 분자량은 native pore gradient polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE) 방법으로는 120,000이었다. SDS-PAGE에 의한 subunit의 분자량은 30,000이었고, 즉 S. marcescens 효소는 4개의 동일한 subunit으로 구성된 homo-tetrameric protein임이 판명되었다. S. marcescens 효소의 L-threonine에 대한 Km값은 AMP가 있는 조건에서 7.3 mM, AMP가 없는 조건에서 92 mM이었다. S. marcescens 효소는 효소 1 mole 당 각각 2 mole의 pyridoxal 5'-phosphate(PLP), 16개의 free-SH group을 가지고 있었다. S. marcescens 효소는 AMP의 존재 하에서 $\alpha$-ketobutyrate, pyruvate, glyoxylate, phosphoenol pyruvate(PEP)에 의해 효소 활성이 억제되었으며, cAMP와 ADP에 의해서는 효소 활성이 증가되었다. 효소학적 성질면에서 S. marcescens 효소는 E. coli 효소보다는 S. typhimurium 효소와 유사하였다. 한편, E. coli 효소는 cAMP에 의하여 효소 활성이 증가되고, S. typhimurium 효소는 ADP에 의해 효소 활성이 증가되는 것과 다르게, S. marcescens 효소는 cAMP와 ADP 모두 효소 활성이 증가되었다. 따라서 이상의 연구 결과들은 세 enteric bacteria의 catabolic threonine dehydratase가 서로 작은 차이점이 있다는 것을 반영하며, 이러한 사실을 규명하기 위해서는 향후 보다 심층적인 연구를 수행하여야 할 것으로 사료된다.

• 한국동물학회지
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• 제27권2호
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• pp.103-116
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• 1984

유전자 구조 및 유전정보 흐름의 차이로 인하여 고등생물의 유전자를 미생물에 직접 cloning하면 원하는 유전자 산물을 얻지 못하는 경우가 많다. 이것을 극복하기 위해서는 화학적인 방법으로 유전자를 합성하든지, 또는 역제효소를 사용하여 고등생물의 mRNA로부터 유전자를 합성하여 cloning하는 방법을 사용한다. 본 연구에서는 oligo(dT)-cellulose column 방법으로 순수분리한 plasmid pBR322의 Pst I site에 cloning하였다. 우선 AMV reverse transcriptase로 primary cDNA를 합성하고, 알칼리를 처리하여 주형 RNA를 제거했다. 이번에는 이 primary cDNA를 주형으로 Klenow enzyme과 reverse transcriptase를 차례로 처리하여 double stranded DNA를 합성하고, 이 때 5' end 근처에 형성되는 hairpin loop을 Sl nuclease로 제거했다. Terminal deoxynucleotidyl transferase를 사용하여, 합성된 dsDNA에는 poly(dC) track을, Pst I endonuclease를 처리한 plasmid DNA에서는 poly(dG) track을 각각 붙인다음 이들을 서로 annealing시키고 E. coli에 transformation시켜서 크기가 큰 plasmid를 갖는 clone을 cracking 방법으로 일처 선별하였다. 이렇게 선별된 clone을 in 냐셔 hybridization 방법으로 조사하여 globin DNA가 들어간 colony를 이차 선별하고 여러 restriction enzyme으로 잘라보아 globin DNA가 cloning된 것을 확인하였다. 토끼 hemoglobin으로 immunize한 rat (Wistar)에서 뽑은 제일차 혈청과 염소에서 뽑은 제이차 혈청의 antibody를 사용한 radioimmunoassay방법으로, cloning된 globin gene이 대장균내에서 발현되는 지의 여부를 살펴 보았는데, 박테리아의 $\\beta$-lactamase와 토끼의 globin이 결합된 chimeric protein이 대장균 내에서 다량 합성되며, 이 단백질은 토끼 hemoglobin의 antigenic determinant를 가지고 있음을 알 수 있었다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제22권4호
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• pp.317-322
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• 2007

본 연구는 고흡습성 필름에 고추냉이 추출물을 첨가하여 제작한 항균흡습필름의 고등어 중 존재하는 식품위해 미생물에 대한 살균효과를 확인하고자 하였다. 총호기성균 및 식품위해미생물인, Escherichia coli O157:H7, Listeria monocytogenes Vibrio parahaemolyticus를 점 접종하여 항균흡습필름으로 포장한 후 저장온도, 기간별 및 항균 필름의 코팅 횟수가 균의 성장 및 사멸에 미치는 영향을 관찰하였다. $5^{\circ}C$에서 총균수, Escherichia coli O157:H7, Listeria monocytogenes의 성장 억제 효과는 $10^{\circ}C,\;15^{\circ}C$에서 보다 우수하였다. 특히 Usrio Vibrio parahaemolyticus는 $5^{\circ}C$에서 저온에 민감한 반응을 보이면서 모든 시료에서 1일, 4일 후 각각 약 $1\;log_{10}cfu/g\;and\;1.80\;log_{10}cfu/g$ 정도 감소하다가 7일 후에는 검출한계 아래로 모두 사멸하였다. 고추냉이 추출 물질이 함유된 흡습필름은 $10^{\circ}C,\;15^{\circ}C$에서 보다 $5^{\circ}C$ 에서 우수한 항균효과를 보였다. 세 가지 농도별 항균효과는 $5^{\circ}C$ 에서 두드러진 농도별 항균효과 차이를 보였으며 코팅 횟수가 늘어날수록 항균효과가 컸다. 이는 항균필름, 한 가지로만은 저장기간 향상에 한계가 있고 냉장저장이라는 hurdle을 동시에 적용하여 항미생물 synergy 효과를 보인다는 증거가 된다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제11권4호
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• pp.720-723
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• 2001

The effect of long-term storage on garlic antibacterial activity was investigated. A concentration of 5% or more garlic was found to be necessary to completely inhibit Eschrichia coli growth in tryptic soy broth. This value is substantially higher than the minimum inhibitory concentration of 1% for E. coli reported previously. pH-modified garlic extract was stored at different temperatures to investigate the impact of storage conditions (i.e., temperature, pH, period of storage) on the stability of the antibacterial activity of the garlic extract used against E. coli B34. The antibacterial effectiveness of the garlic extract against E. coli remained stable when both the storage temperature and the pH of the extract were kept low. When the garlic extract was stored at $40^{\circ}C and above, most or all of the garlic antibacterial activity disappeared after a 24-h storage period, regardless of the storage pH. The antibacterial activity was weakened when the pH of the garlic extract was adjusted to 8, and at low temperatures.

• Food Science and Biotechnology
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• 제17권1호
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• pp.191-194
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• 2008

The antagonistic activity of probiotic strains (Bifidobacterium animalis BB-12, Bifidobacterium bifidum A, Bifidobacterium longum B6, Lactobacillus acidophilus ADH, Lactobacillus paracasei ATCC 25598, and Lactobacillus rhamnosus GG) against nalidixic acid resistant ($NA^R$) Escherichia coli O157:H7 MF1847, E. coli O157:H7 H2439, E. coli O157:H7 ATCC 43894, and E. coli O157:H7 C7927 was investigated using the agar-overlay, well diffusion, and broth culture tests. L. paracasei ATCC 25598 was the most effective probiotic strain in terms of in vitro antagonistic activity against $NA^R$ E. coli O157:H7, followed by L. rhamnosus GG, B. longum B6, and L. acidophilus ADH. The use of selected probiotic strains could be an effective pre-harvest intervention strategy to reduce the risk of $NA^R$ E. coli O157:H7 by maintaining a balanced microflora in animals and might provide many potential benefits in lieu of using antimicrobials.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권5호
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• pp.550-555
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• 1995

A strain of Pseudomonas sp. isolated from soil was shown to produce a high level of extracellular endo-inulinase. In this work, the endo-inulinase gene (inu1) of the bacterial strain was cloned into the plasmid pBR322 by using EcoRI restriction endonuclease and E. coli HB101 as a host strain. One out of 7, 000 transformants obtained from the above cloning experiment formed a clear zone around its colony on the selective medium supplemented with 2.0% inulin after a prolonged incubation at 37$\circ$C and subsequent cold shock treatment. The functional clone was found to carry a recombinant plasmid (pKMG50) with a 3.7 kb genomic insert containing the genetic information for the inulinase activity. The inulinase from E. coli HB101/pKMG50 was proved to be an endo-acting enzyme and produced constitutively in the recombinant E. coli cells. Zymogram of the enzyme from the recombinant cells with inulin substrate indicated that the molecular mass of the active protein was 190 Kd, while that of the endo-inulinase from the Pseudomonas strain was 170 Kd. This size discrepancy suggested that the inulinase from the recombinant E. coli HB101 cells might be the initial product of translation, not the mature form produced in the strain of Pseudomonas sp..