• 제목/요약/키워드: Buffer Stability

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세포외 5-Fluorocytosine Deaminase의 특성 (Properties of an Extracellular 5-Fluorocytosine Deaminase)

  • 이인;전홍기;윤용균
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제20권2호
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    • pp.150-155
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    • 1992
  • 토양 분리 균주로부터 얻은 배양액을 20-80 황산암모늄으로 분획한 후 세포의 cytosine deaminase의 성질을 검토하였다. 이 효소는 cytosine과 5-fluorocytosine(5-FC)에 기질 특이성을 가짐으로서 각각 uracil과 5-fluorouracil(5-FU)로 전환을 촉매하였다. 효소안정성에 대한 온도와 보존기간은 tris-HC1 완충용액에서 검토한 결과 최적온도는 $50^{\circ}C$ 부근이하에서 90 이상의 잔존활성을, 보존시간은 4일정도에서 80 이상의 잔존활성을 유지하였다. 최대 pH 8.0과 $37^{\circ}C$의 온도에서 나타났다. 활성에 적당한 pH는 8.0~8.5였고, 온도는 37~$45^{\circ}C$의 범위였다.

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Characteristics of Urease from Vibrio parahaemolyticus Possessing tah and the Genes Isolated in Korea

  • Kim, Young-Hee;Kim, Jong-Sook
    • Journal of Microbiology
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    • 제39권4호
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    • pp.279-285
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    • 2001
  • Vibrio parahaemolyticus is a halophilic bacterium associated with seafood gastroenteritis. An unusual strain of Kanagawa-positive urease producing Vibrio parahaemolyticus O1:K1 was isolated from the environment and identified . A polymerase chain reaction assay revealed that this strain harbored both the tdh and the genes. The urease from this strain was studied. Maximum urease production was induced in LB medium containing 0.2% urea, 0.5% glucose, 2% NaCl and pH 5.5 with 6h of culti-vation at 37$\^{C}$ under aeration. Purification of urease was achieved by the process of whole cell lysate, 65% ammonium sulphate precipitation, DEAE-cellulose ion exchange column chromatography, Sepharose CL-6B gel filtration and oxirane activated Sepharose 6B-urea affinity chromatography with 203 fold purification and 2.2% yield. Analysis of the purified enzyme by SDS-PAGE demonstrated the presence of the subunits with a molecular weight of 85kDa, 59kDa, 41kDa and the molecular weight for the native enzyme by nondenaturing PAGE and gel filtration chromatography was 255kDa. The purified urease was stable at pH 7.5 and the opeimal pH in HEPES buffer was 8.0 The enzyme was stable at 60$\^{C}$ for 2 h with a residual activity of 32% . The addition of 10$\mu$M if NiCl$_2$maintained stability for 30 min. The Km value of the purified enzyme was 35.6 mM in urea substrate. The TD$\_$50/(median toxic dose) of the purified urease was 2.5$\mu\textrm{g}$/ml on human leukemia cells.

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고준위 방사성폐기물 처분장에서 초기 용기 파손 시나리오의 장기 방사선적 안전성 평가 (Post Closure Long Term Safety of an Initial Container Failure Scenario for a Potential HLW Repository)

  • 황용수;서은진;이연명;강철형
    • 한국방사성폐기물학회:학술대회논문집
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    • 한국방사성폐기물학회 2003년도 가을 학술논문집
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    • pp.229-232
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    • 2003
  • 고준위 방사성폐기물 처분장에서 적용하고 있는 다중 방벽의 한 부분인 처분 용기는 벤토나이트 완충재의 팽윤과 지압으로부터 폐기물을 역학적으로 안전하게 보호함과 동시에 일정 기간 방사성폐기물의 유출을 억제하는 역할을 한다. 용기는 엄격한 재질 선정과 품질 보증을 거쳐 건전성을 확보하나 보수적인 관점에서 보면 용기 제작 과정이나 수송 중 예상치 못한 사건으로 인해 불량품이 발생할 개연성이 있다. 본 연구에서는 이와 같은 사고 시나리오를 가정할 경우 불량 용기를 포함한 전체 용기에 거치된 방사성폐기물의 시간에 따른 환경 위해도를 평가하였다. 본 연구결과 일부 처분 용기에 초기 파손이 발생하더라도 규제치를 잘 만족하는 것으로 판명되었다.

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온도 기울기 전기영동장치의 CAMP 수용성 단백질에 응용 (Application of Temperature Gradient Gel Electrophoresis To cAMP Receptor Protein)

  • Gang, Jong-Back;Cho, Hyun-Young
    • 생명과학회지
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    • 제14권2호
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    • pp.309-314
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    • 2004
  • cAMP수용성 단백질(CRP)은 E. coli의 100가지 이상의 유전자 전자조절에 관계된다. CRP는 dimer로 존재하며 cAMP의 결합으로 활성인 형태로 전환된다. 이중체인 CRP 단백질의 열 안정성과 구조 전이의 연구에 효과적인 온도 기울기 전기영동장치를 이용하여 확인하였다. 본 연구에서 야생형과 S83C CRP 단백질의 melting temperature (Tm)는 산성인 완충용액[89.8 mM Glycine, 24mM Boric acid (pH 5.8)]에서 57$\pm$1(야생형 CRP)과 55$\pm$1$^{\circ}C$ (S83G CRP)였다. 그리고 온도에 따른 CRP 단백질의 구조변화도 protease digestion과 CD spectropolarimeter을 이용하여 확인하였다.

인삼엽요병에서 효소활성도의 변화 (Study on the Enzyme Activity in Leaf-Burning Disease of Panax ginseng C.A. Meyer)

  • 양덕조;김명원
    • Journal of Ginseng Research
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    • 제13권1호
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    • pp.92-97
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    • 1989
  • 인삼엽을 강광(100 KLuw) 및 고온($45^{\circ}C$, 암상태)에 처리하여 효소(glucose-6-phosphate dehydrogenase, acid phosphatase, catalase, peroxidase)의 활성도를 조사한 결과 두 처리구에서 공히 감소하는 경향이었으나, 특기 강광에서 활성도가 현저히 감소하였다. 이와 같은 활성도 감소는 효소의 thermal stabilities나 coagulation 등과 같은 광에 의한 2차적인 엽온상승 효과에 따른 inactivation이 아니며, proteolytic activity 증가로 인한 효소단백질의 함량감소로 확인되었다. 인삼엽에서 proteolytic activity가 강광에 의해 급속히 증가하는 것으로 보아 정상엽(normal leaf)에 inactive 상태로 내재(compartmentation)되어 있는 proteinase가 타 식물에 비해 많은 것으로 사료된다. 또한 chlorphyll bleaching과 효소의 inactivation을 유발시킬 수 있는 superoxide radical(${O_2}^{-}$)의 광화학적 생성율이 비교식물(Solanum nigrum)보다 높게 나타나고 crude saponin이 superoxide의 생성율을 촉진하는 것으로 보아 superoxide에 의한 pigment system의 광산화율이 타 식물에 비해 높을 것으로 사료된다.

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Synthesis of a Novel Anthraquinone Diamino-Bridged Bis(β-cyclodextrin) and Its Cooperative Binding toward Guest Molecules

  • Zhao, Yan;Yang, Zi Ming;Chi, Shao Ming;Gu, Juan;Yang, Yong Cun;Huang, Rong;Wang, Bang Jin;Zhu, Hong You
    • Bulletin of the Korean Chemical Society
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    • 제29권5호
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    • pp.953-958
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    • 2008
  • A novel anthraquinone diamino-bridged bis($\beta$ -cyclodextrin) 2 was synthesized. The inclusion complexation behaviors of the native $\beta$ -cyclodextrin 1 and the novel bis($\beta$ -cyclodextrin) 2 with guests, such as acridine red (AR), neutral red (NR), ammonium 8-anilino-1-naphthalenesulfonate (ANS), sodium 2-(p-toluidinyl) naphthalenesulfonate (TNS) and rhodamine B (RhB) were investigation by fluorescence, circular dichroism and 2D NMR spectroscopy. The spectral titrations were performed in phosphate buffer (pH 7.20) at 25 ${^{\circ}C}$ to give the complex stability constants (Ks) and Gibbs free energy changes (−${\Delta}G^0$) for the stoichiometric 1:1 inclusion complexation of host 1 and 2 with guests. The results indicated that the novel bis($\beta$ -cyclodextrin) 2 greatly enhanced the original binding affinity of the native $\beta$ -cyclodextrin 1. Typically, bis($\beta$ -cyclodextrin) 2 showed the highest binding constant towards ANS up to 34.8 times higher than that of 1. The 2D NMR spectra of bis($\beta$ -cyclodextrin) 2 with RhB and TNS were performed to confirm the binding mode. The increased binding affinity and molecular selectivity of guests by bis($\beta$ -cyclodextrin) 2 were discussed from the viewpoint of the size/shape-fit concept and multipoint recognition mechanism.

바이오의약품 제조공정에서 분리막의 역할과 바이러스 필터 동향 (Membrane and Virus Filter Trends in the Processes of Biopharmaceutical Production)

  • 최태환;박호범
    • 멤브레인
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    • 제30권1호
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    • pp.9-20
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    • 2020
  • 바이오 의약품 생산과정의 대부분 공정에서 분리막이 사용되고 있다. 분리막 공정은 다른 공정의 전처리, 공정 자체의 불순물 분리, 바이러스 제거, 목표 생성물 농도 조절 및 완충 용액 교환 등에 사용된다. 인체에 사용하는 바이오 의약품의 바이러스 오염은 심각한 임상 결과와 직결되는 민감한 문제이기 때문에 바이러스 필터는 제품의 효능과 안정성을 보장하기 위해 중요한 역할을 한다. 바이러스 필터는 일반적으로 표면 개질된 PVDF, PES, CRC 등 다양한 고분자로 만들어진 복합다층 구조를 가지고 있다. 제조업체에 따라 대칭(symmetric) 또는 비대칭(asymmetric) 등 다른 기공 구조와 형태를 가지고 있으며, 주름막, 평판 시트 또는 중공사 형태로 사용된다. 바이러스 필터는 Asahi Kasei 를 비롯해 Millipore, Pall, Sartorius 등 몇몇 해외 업체들이 독점적으로 국내에 공급하고 있다. 바이러스 필터를 대체하려면 검증작업을 통해 규제기관의 승인을 받는 등 상당한 시간과 비용이 소요된다. 최근 일본의 수출규제로 국산화가 중요해진 만큼 제거 성능 고도화 등 선제적으로 기술자립도를 높여가야 한다.

In vitro Evaluation of Dextran-5-aminosalicylic Acid Conjugate as a Polymeric Colon-specific Prodrug of 5-aminosalicylic Acid

  • Jung, Yun-Jin;Jeon, Hyun-Chu;Choi, Dea-Kyu;Kim, Young-Mi
    • Journal of Pharmaceutical Investigation
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    • 제37권1호
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    • pp.45-49
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    • 2007
  • Dextran-5-aminosalicylic acid conjugate (dextran-5-ASA) was in vitro-evaluated as a polymeric colon-spe-cific prodrug of 5-aminosalicylic acid (5-ASA). Chemical stability of dextran-5-ASA in the pH 1.2 or 6.8 buffer solutions was investigated at 37 for 6 hrs. The dextran backbone was not degraded and no 5-ASA release was detected. Moreover, dextran-5-ASA neither liberated 5-ASA in the homogenates of the small intestine of rats nor was transported across Caco-2 cell monolayers, suggesting no significant loss of dextran-5-ASA during transit through the upper intestine. Furthermore, incubation of dextran-5-ASA in 10% cecal contents of rats released about 37% and 55% of 5-ASA bound to dextran in 8 hr and 24 hr, respectively. While that with either esterase or dextranase failed to liberate 5-ASA from the polymeric prodrug, incubation of dextran-5-ASA with both esterases and dextranse released 5-ASA up to about 24% of 5-ASA bound to dextran. These results suggest that, after oral administration of dextran-5-ASA, the polymeric prodrug is delivered specifically to and releases 5-ASA in the large intestine, and reveal that the 5-ASA release by cleavage of the ester bond requires precedent depolymerization of the dextran backbone.

안정된 스텐트 코팅막을 형성하기 위해 금속표면과 고분자 사이의 화학적 결합을 이용한 고분자 코팅법 개발 (Development of Polymer Coating Method for Stable Stent Coating Using Chemical Bond Between Metal Surface and Polymer)

  • 남대식;이우경
    • Journal of Pharmaceutical Investigation
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    • 제37권1호
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    • pp.7-13
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    • 2007
  • To produce stable polymer coating layer using the interaction between metal stent and polymer layer, Ahx-HSAB was synthesized by coupling 6-aminoheanoic acid (Ahx) with N-Hydroxy succinimidyl 4-azidobenzonate (HSAB) containing photo reactive group. Then, Ahx-HSAB was applied to self·assembled monolayer (SAM) on $TiO_2$-coated surface, since one end of Ahx-HSAB was carboxyl acid which was known to be able to interact with $TiO_2$ surface. That SAM layer was incubated in 1% polycaprolacton (PCL) solution and photoreacted by ultraviolet light (254 nm) to produce the chemical bond between SAM and polymer layer, followed by PCL polymer coating ({\sim}5\;{\mu}m$) by the method of spray coating. The surface change was investigated by measuring of contact angle of the surface. The contact angle values of stainless steel (SS) surface, $TiO_2$-coated surface, SAM layer by Ahx-HSAB, photoreacted surface with PCL and PCL layer by spray coating were 70.48${\pm}$1.89, 38.57${\pm}$3.31, 60.14${\pm}$2.21, 54.91${\pm}$2.70 and 56.47${\pm}$2.12, respectively. The stability of polymer layers was tested by incubation of PCL-coated plates in 0.1M PBS buffer (pH 7.4, 0.05%, Tween 80) with vigorous shaking (200 rpm). While the poiymer layer prepared by these processes showed the intact surface morphology over 3 days, the polymer layers prepared by spray coating of PCL onto SS plate (control 1) and $TiO_2$-coated SS plate (control 2) were Peeled off in 3 days. Thus, the polymer coating method using SAM and photoreaction seems to be a effective method to obtain the stable polymer layer onto SS surface.

Independent-Gate-Mode Double-Gate MOSFET을 이용한 Optical Receiver 설계 (Design of Optical Receiver Using Independent-Gate-Mode Double-Gate MOSFETs)

  • 김유진;정나래;박성민;신형순
    • 대한전자공학회논문지SD
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    • 제47권8호
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    • pp.13-22
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    • 2010
  • Independent-Gate-Mode Double-Gate(IGM-DG) MOSFET은 기존의 bulk-MOSFET에 비해 향상된 채널 제어능력을 가지며, front-게이트와 back-게이트를 서로 다른 전압으로 구동가능하다는 이점을 가진다. 따라서, 이를 이용한 회로설계는 4-terminal의 자유도를 이용함으로써 회로성능의 향상 뿐 아니라 집적도 향상을 기대할 수 있다. 본 논문에서는 IGM-DG MOSFET의 장점을 이용하여 TIA, feedforward LA, 및 OB로 구성된 15Gb/s 광수신기를 설계하고, HSPICE 시뮬레이션을 통한 회로성능 검증 및 외부환경과 소자의 특성변화에 따른 안정성을 검증하였다.