Proceedings of the Korean Society for Bioinformatics Conference
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2005.09a
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pp.278-283
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2005
Cell cycle is regulated cooperatively by several genes. The dynamic regulatory mechanism of protein interaction network of cell cycle will be presented taking the budding yeast as a sample system. Based on the mathematical model developed by Chen et at. (MBC, 11,369), at first, the dynamic role of the feedback loops is investigated. Secondly, using a bifurcation diagram, dynamic analysis of the cell cycle regulation is illustrated. The bifurcation diagram is a kind of ‘dynamic road map’ with stable and unstable solutions. On the map, a stable solution denotes a ‘road’ attracting the state and an unstable solution ‘a repelling road’ The ‘START’ transition, the initiation of the cell cycle, occurs at the point where the dynamic road changes from a fixed point to an oscillatory solution. The 'FINISH' transition, the completion of a cell cycle, is returning back to the initial state. The bifurcation analysis for the mutants could be used uncovering the role of proteins in the cell cycle regulation network.
Proceedings of the Korean Society for Bioinformatics Conference
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2004.11a
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pp.50-56
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2004
Bifurcation analysis of cell cycle regulation in the budding yeast is performed basedon the mathematical model by Chen et al [Molecular biology of cell, 11:369-391, 2000]. On the bifurcation diagram, locations of both stable and unstable solutions of the nonlinear differential equations are presented by taking the mass of cell as a controlparameter. Based on the bifurcation diagram, dynamic mechanism underlying the 'start' transition, initiation of a new round of cell cycle, and the 'finish' transition, completion of cell cycle and returning back to the initial state, is discussed: the 'start' transition is a transition from a stable fixed solution for a small mass and to an oscillatory state for a large mass, and the 'finish' transition is a switching back to the stable fixed solution from the oscillatory state. To understand the role of the genes during the cell cycle regulation, bifurcation diagrams for the mutants are compared with that of the wild type.
Optimum conditions for vacuum-drying ad cultivation of yeast cells for the production of active dry yeast were examined. At lower temperature, more drying time was required to dry the yeast pellet to reach the desirable water content(8%). Optimum temperature of vaccum oven and time for drying was 63$^{\circ}C$ and 90 min, respectively. Optimum medium composition for flask culture using cane molasses as the substrate were 0.25% sugar, 0.013% $K_2$HPO$_4$, 0.1% $K_2$HPO$_4$. and 0.125% (NH$_4$)$_2$SO$_4$. Culture temperature $25^{\circ}C$ gave the highest survival rate of dired yeast. After finishing fed-batch culture and the culture was left in the fermentor without adding any sugar or nutrient, survival of the dried yeast harvested from the fermentor increased to 86.0% after 36 hr. It was also observed that the yeast cells with higher budding rates showed lower survival rate.
Incorporation of unique barcodes into fission yeast gene deletion collections has enabled the identification of gene functions by growth fitness analysis. For fine tuning, it is important to examine barcode sequences, because mutations arise during strain construction. Out of 8,708 barcodes (4,354 strains) covering 88.5% of all 4,919 open reading frames, 7,734 barcodes (88.8%) were validated as high-fidelity to be inserted at the correct positions by Sanger sequencing. Sequence examination of the 7,734 high-fidelity barcodes revealed that 1,039 barcodes (13.4%) deviated from the original design. In total, 1,284 mutations (mutation rate of 16.6%) exist within the 1,039 mutated barcodes, which is comparable to budding yeast (18%). When the type of mutation was considered, substitutions accounted for 845 mutations (10.9%), deletions accounted for 319 mutations (4.1%), and insertions accounted for 121 mutations (1.6%). Peculiarly, the frequency of substitutions (67.6%) was unexpectedly higher than in budding yeast (~28%) and well above the predicted error of Sanger sequencing (~2%), which might have arisen during the solid-phase oligonucleotide synthesis and PCR amplification of the barcodes during strain construction. When the mutation rate was analyzed by position within 20-mer barcodes using the 1,284 mutations from the 7,734 sequenced barcodes, there was no significant difference between up-tags and down-tags at a given position. The mutation frequency at a given position was similar at most positions, ranging from 0.4% (32/7,734) to 1.1% (82/7,734), except at position 1, which was highest (3.1%), as in budding yeast. Together, well-defined barcode sequences, combined with the next-generation sequencing platform, promise to make the fission yeast gene deletion library a powerful tool for understanding gene function.
The purpose of this study was to isolate and identify wild yeasts from soil samples collected in Seoul and Daejeon, Republic of Korea. To identify wild yeast strains, pairwise sequence comparisons of D1/D2 region of the 26S rRNA gene sequence were done using Basic Local Alignment Search Tool (BLAST). The cell morphologies were observed by phase contrast microscope and carbon source assimilation test were done using API 20C AUX kit. Among the 13 isolated strains, 11 strains were previously reported, but two strains have never been reported from Republic of Korea. The 13 strains were assigned to the phylum Basidiomycota. The two unrecorded yeast strains B2UV-201 and DJ1-5-B-10C belong to the genera Rhodotorula and Rhodosporidiobolus, respectively. The two unrecorded yeast strains are oval shaped and polar budding cells. This research focuses on the morphological and biochemical properties of the two unreported yeast species that have not officially been reported in Korea.
The purpose of this study is to isolate and identify wild yeasts from the soil samples collected in Daegu and Daejeon City, Republic of Korea. Among 15 strains isolated in this study, 13 strains were previously reported and two strains had not been reported in Republic of Korea. To identify wild yeast strains, pairwise sequence comparisons of D1/D2 region of the 26S rRNA gene sequence were done using Basic Local Alignment Search Tool (BLAST). The cell morphologies were observed by phase contrast microscope and assimilation tests were done using API 20C AUX kit. All strains were assigned to the phylum Basidiomycota. The two unrecorded yeast strains, PG2-2-10C and DJ2-14-10C, belong to the genus Holtermanniella (family Holtermanniaceae, order Holtermanniales, class Tremellomycetes) and Goffeauzyma (family Filobasidiaceae, order Filobasidiales, class Tremellomycetes), respectively. The two unrecorded yeast strains had oval shape and polar budding cells. This research describers the morphological and biochemical properties of the two unreported yeast species that had not officially reported in Korea.
Glutaredoxins (Grxs), also known as thioltransferases (TTases), are thiol oxidoreductases that regulate cellular redox state in a variety of organisms. In the budding yeast Saccharomyces cerevisiae, Grx1 and 2 are cytosolic dithiol Grxs, while Grx3, 4 and 5 are monothiol Grxs. A gene encoding a new monothiol Grx, Grx6, was cloned from the genomic DNA of S. cerevisiae by PCR. Its DNA sequence contains 1,080 bp, and encodes a putative protein of 203 amino acid residues containing Cys-Phe-Tyr-Ser at the active site. Grx6 is similar to other monothiol Grxs in the same organism and to Grx3 in the fission yeast Schizosaccharomyces pombe. and its predicted three-dimensional structure resembles that of S. pombe Grx3. S. pombe cells harboring plasmid pFGRX6 containing the Grx6 gene had about 1.3-fold elevated Grx activity in the exponential phase, and grew better than the control cells under some stressful conditions. Synthesis of ${\beta}$-galactosidase from a Grx6-lacZ fusion gene in S. pombe was enhanced by potassium chloride, aluminum chloride and heat ($37^{\circ}C$) treatment. S. pombe cells harboring plasmid pFGRX6 had elevated ROS levels whereas S. pombe cells harboring extra copies of Grx3 had reduced ROS levels.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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