Bovine brucellosis has occurred for years in Gyeonggi province under the national test and slaughter scheme. The serum agglutination test (SAT) is a diagnostic tool to confirm the disease despite the argument on its specificity. We selected 8 farms where only one or two individuals were diagnosed as brucellosis through SAT at the primary regular herd check and isolated the causative organism and characterized the species by species-specific PCR. The pathogen isolation was successful in 6 farms out of 8 farms by microbiological culture, showing the successful rate of 75%. The isolation rate of the causative organism represents 70% from supra-mammary lymph node and 60% from uterine tissues. They were characterized as Brucella abortus biovar 1 after biotyping by PCR, showing the fragment of 498 bp. Five of 8 farms were diagnosed as brucellosis two to four times more over the intervals of two or three months. Here in this study we briefly showed the correlation of the sporadic outbreak of brucellosis tested by SAT and the isolation of the causative organism. Moreover one or two reactors against brucellosis among considerable size of herd may indicate that SAT failed to detect potentially infected individuals in the incubation stage or chronic phase of the disease.
살모넬라증과 부루셀라증은 가축에 심각한 피해를 유발하는 질병으로, 축산업과 식품산업에 많은 경제적 손실을 초래하고 있다. 본 연구에서는, 포비돈-아이오딘을 주성분으로 하는 소독제 베타딘$^{(R)}$ 농후액의 Salmonella typhimurium과 Brucella ovis에 대한 효력시험을 수행하였다. 배지희석법을 이용한 살균효력시험은 $4^{\circ}C$에서 30분 동안 시험 세균을 희석 소독제에 노출시켜 소독제의 가장 효과적인 낮은 희석배수를 결정하는 시험이다. 베타딘$^{(R)}$ 농후액과 시험 세균들을 처리조건에 따라 경수와 유기물로 희석하여 반응을 시켰다. 유기물 조건에서, Salmonella typhimurium과 Brucella ovis에 대한 베타딘$^{(R)}$ 농후액의 살균력은 경수조건에서의 살균력과 비교하여 낮게 나타났는데, 이는 유기물들에 의한 소독제의 살균 유효성분에 대한 저해작용에 따른 것으로 사료된다. 베타딘$^{(R)}$ 농후액은 Salmonella typhimurium과 Brucella ovis와 같은 가축병원성 질병들에 대해 살균효과를 가지므로, 살모넬라증과 브루셀라증과 같은 세균성 질병의 확산을 제어하는데 효과적으로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
The diagnosis of brucellosis is currently based on serological and microbiological tests. However, the microbiological isolation and identification have several disadvantages such as time-consuming and laborious, and the serological methods have been reported to cross-react with antigens other than those from Brucella spp. To develop a sensitive and rapid diagnostic method for detection of Brucella species, the genus-specific primers were designed and synthesized from the sequence of gene encoding a 31kDa cell surface protein(BCSP) and a 36kDa outer membrane protein(OMPB) of B abortus. The amplified 711bp and 982bp DNA fragments were only visible in each species of Brucella by PCR method using the BCSP and OMPB primers, respectively. However, PCR product was not obtained with DNA from other Gram-negative bacteria. As little as 1pg of the B abortus genomic DNA could be detected by this PCR method. Using the PCR technique, semen samples from 185 bulls of Brucella-seronegative herds in Cheju island were examined for comparison of this PCR method with conventional methods in 1995. The semen samples from 5 bulls were positive by culture method and PCR, and one was positive and 5 were suspect by semen plasma agglutination test. However, the semen samples obtained from 177 bulls were negative by semen plasma agglutination, culture and PCR methods in 1996. The results of comparison tests suggested that PCR was a better test than agglutination test against semen of bulls. This study indicated that the PCR technique was a valuable for the diagnosis of bovine brucellosis, particulary in bull semens.
살모넬라증과 부루셀라증은 가축 및 사람에 심각한 피해를 유발하는 질병으로, 축산업과 식품산업에 많은 경제적 손실을 초래하고 있다. 본 연구에서는, 자몽종자추출물, 구연산, 사과산 그리고 염화벤잘코늄을 주성분으로 하는 스프레이형 소독제의 Salmonella Typhimurium과 Brucella ovis에 대한 효력시험을 수행하였다. 살균효력시험은 배지희석법에 따라 수행하였으며, 스프레이형 소독제와 시험 세균들을 처리조건에 따라 경수와 유기물로 희석하여 반응을 시켰다. 유기물 조건에서, Salmonella Typhimurium과 Brucella ovis에 대한 스프레이형 소독제의 살균력은 경수조건에서의 살균력과 비교하여 낮게 나타났는데, 이는 유기물들에 의한 소독제의 살균 유효성분에 대한 저해작용에 따른 것으로 사료된다. 스프레이형 소독제는 Salmonella Typhimurium과 Brucella ovis와 같은 인수공통전염병 유발 병원균들에 대해 살균효과를 나타내어, 살모넬라증과 브루셀라증과 같은 세균성 질병의 확산을 제어하는데 효과적으로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
Brucellosis is a serious zoonosis, recognized worldwide. It primarily affects animals, which act as reservoirs for human infection as well as being of economic significance to the agri-food industry. Bangladesh has been reported as an endemic area for brucellosis. So a cross sectional study was conducted to determine the seroprevalence and potential risk factors of brucellosis in cattle in Dinajpur and Mymensingh districts of Bangladesh. A total of 182 cattle were examined by Rose Bengal Plate Test (RBPT) between September 2008 and October 2009. Then Positive, doubtful, and negative samples were further confirmed with slow agglutination test (SAT) and both indirect and competitive enzyme linked immunosorbent assay (iELISA and cELISA). A questionnaire was used to collect epidemiological information of the animals. The overall animal-level prevalence was 3.30%. Brucellosis seroprevalence was higher (4.76% by cELISA) in cattle above 48 months than those under 48 months. Female showed higher seroprevalence (10.67%) than male (6.25%). Higher seroprevalence was also found in cattle bred naturally (20.0%) than artificially (8.77%) and cattle that aborted or with previous abortion record (22.22%) showed higher seroprevalence than non-aborted (7.69%). The sensitivity of RBT and SAT was found 100% as compared to cELISA standard test, whereas specificity of RBT (95.35%) was higher than that of SAT (94.32%).
Outer membrane proteins(OMPs) of Brucella abortus 1119-3 strain were extracted by Triton X-100 treatment, and fractionated by DEAE-cellulose column chromatography and Sephacryl S-300 column chromatography. The antigenic proteins in these fractions were identified by Western blot analysis. In Western blot analysis, a single band(38kDa) was observed in the DEAE fractions from 36th fraction to 38th fraction against sera of cattle infected with B abortus. And other fractions have several bands. However, the Sephacryl S-300 fractions exhibited a total of 3 peaks of proteins with a broad range from about 30 to 116kDa. In order to characterize further, the extracted OMPs and the DEAE fractions were analyzed by two dimensional polyacrylamide gel electrophoresis(2-DE) and Western blot using serum from naturally infected cattle with Brucella spp. The 2-DE immunoblots of DEAE fraction showed immunoreactive spots more than twenty two. The major protein spots have ranging from about 32 to 47kDa. The pI values of the spots were detected from pH 4.7 to 5.4. Among the major protein spots, the 38kDa protein which is a specific antigen, located at the point of approximately a pI 4.8.
Brucellosis is a major zoonosis caused by Gram negative facultative intracellular bacterial organisms of the genus Brucella that are pathogenic for a wide variety of animals and human beings. Because of its economic impact on animal health and the risk to the human population,most countries have a brucellosis control program. Brucellosis is also an economically important andprevalent disease in Bangladesh. The accurate and prompt diagnosis is very important in controlling and eradicating of the disease in animals. The present study was undertaken to determine the seroprevalence of brucellosis in cattle in Mymensingh and Patuakhali district of Bangladesh. A total of 120 serum samples were collected from the two districts along with a questionnaire related to the epidemiology of the disease. The sampleswere screened by using slow agglutination test and conformed by indirect enzyme linked immunosorbent assay. The overall seroprevalence of brucellosis in cattle was 5% and it was observed that, a higher prevalence of Brucella was found in female than male, through natural breeding than artificial insemination (AI) and animal above 4 years old are highly susceptible than younger ones. Higher prevalence was found in aborted animals in comparison with non aborted animal. Finally, the study revealed that the female animal has more susceptible to brucellosis and healthy semen should be used for AI.
In this study, we isolated 12 of Brucella (B.) spp. from cattle, which have been positive in Rose Bangal test and tube agglutination test in Gyeongbuk province in 2009. According to AMOS PCR analysis, isolated 12 strains were identified as B. abortus. Murine derived macrophage, RAW 264.7 cells, were infected with isolated 12 strains or reference strain (B. abortus 544), and bacterial internalization were characterized. According to these results, we divided the isolated strains into the following three groups: class I, lower internalization than that of B. abortus 544; class II, similar internalization to that of that of B. abortus 544; class III, higher internalization than that of B. abortus 544 within RAW 264.7 cells. Furthermore, intracellular growth, bacterial adherent assay, LAMP-1 colocalization, virulence in mice and surface protein pattern were characterized. From these results, representative strains of class III showed lower LAMP-1 colocalization, higher adherent efficiency, higher virulence in mice than those of B. abortus 544, and showed different pattern of surface proteins. These results suggest that B. abortus field strains, isolated from cattle in Korea, possess various virulence properties and higher internalization ability of field strain may have an important role for its virulence expression.
Bovine brucellosis, an important zoonosis, is diagnosed with serological tests such as the RBT, TAT using inactivated whole bacterial cells or bacterial lipopolysaccharide (LPS) antigen in Korea. However, a strong cross-reaction between Brucella spp. and Yersinia enterocolitica O9 in these tests has seriously complicated the diagnosis of animal brucellosis because Brucella spp. shares common antigenic determinants with Y. enterocolitica O9 in the smooth LPS region. In this study, Brucella-field strains were isolated from Brucellapositive Hanwoo in Kimhae, Korea and outer membrane protein (omp) which has low cross-reaction with Y. enterocolitica O9 and high immunogenicity was extracted from the field strains Then we compared ELISA using the extract with RBT-TAT. Fifteen field strains were isolated from 47 supra-mammary-lymph nodes, which were collected from 18 farms. Isolation rate was 32%. Brucella-specific antigen was identified by performing SDS-PAGE or Western blotting on extracted omp with at 0.5% n-lauroylsarcosine One hundred and ninety-two serum-samples were used in the experiment: 142 negative and 50 positive samples verified by RBT-TAT. According to ELISA results, 127 samples were negative and 15 appeared positive among 142 negatives by RBT-TAT, while 42 samples were positive and 8 were negative among 50 positives by RBT-TAT. Therefore, it showed 89.4% of specificity and 84% of sensi-tivity. Through the current experiments, we could set up an ELISA based on the omp which has low cross-reaction and high immunogenicity and concluded that the omp could be a good material for accurate diagnosis of bovine brucellosis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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