This study demonstrated that the brown rot basidiomycete Fomitopsis palustris was able to degrade crystalline cellulose (Avicel). This fungus could also produce the three major cellulases (exoglucanases, endoglucanases, and $\beta-glucosidase$) when the cells were grown on $2.0\%$ Avicel. Avicel degraded by F. palustris showed a decrease in relative crystallinity from $83\%\;to\;78.5\%$ after 14 days of incubation. The characterization study indicated that optimum pH was 4.5 and optimum temperature was $70^{\circ}C$ for exoglucanase (cellobiohydrolase) activity. Hydrolysis of Avicel by the crude enzyme from F. palustris yielded 1.6 mg/ml of glucose after 43 h, which corresponded to a cellulose conversion degree of $3.2\%$. Therefore, this study revealed for the first time that the brown rot basidiomycete F. palustris produces cellulases capable of yielding soluble sugars from crystalline cellulose.
Two endoglucanases with processive cellulase activities, produced from Fomitopsis palustris grown on 2% microcrystalline cellulose(Avicel), were purified to homogeneity by anion-exchange and gel filtration column chromatography systems. SDS-PAGE analysis indicated that the molecular masses of the purified enzymes were 47 kDa and 35 kDa, respectively. The amino acid sequence analysis of the 47-kDa protein(EG47) showed a sequence similarity with fungal glycoside hydrolase family 5 endoglucanase from the white-rot fungus Phanerochaete chrysosporium. N-terminal and internal amino acid sequences of the 35-kDa protein(EG35), however, had no homology with any other glycosylhydrolases, although the enzyme had high specific activity against carboxymethyl cellulose, which is a typical substrate for endoglucanases. The initial rate of Avicel hydrolysis by EG35 was relatively fast for 48 h, and the amount of soluble reducing sugar released after 96 h was $100{\mu}g/ml$. Although EG47 also hydrolyzed Avicel, the hydrolysis rate was lower than that of EG35. Thin layer chromatography analysis of the hydrolysis products released from Avicel indicated that the main product was cellobiose, suggesting that the brown-rot fungus possesses processive EGs capable of degrading crystalline cellulose.
Fomitopsis palustris, a brown-rot basidiomycete, causes the most destructive type of decay in wooden structures. In spite of its great economic importance, very little information is available at the molecular level regarding its complex decay process. To address this, we generated over 3,000 expressed sequence tags (ESTs) from a cDNA library constructed from F. palustris. Clustering of 3,095 high-quality ESTs resulted in a set of 1,403 putative unigenes comprising 485 contigs and 918 singlets. Homology searches based on BlastX analysis revealed that 78% of the F. palustris unigenes had a significant match to proteins deposited in the nonredundant databases. A subset of F. palustris unigenes showed similarity to the carbohydrateactive enzymes (CAZymes), including a range of glycosyl hydrolase (GH) family proteins. Some of these CAZyme-encoded genes were previously undescribed for F. palustris but predicted to have potential roles in biodegradation of wood. Among them, we identified and characterized a gene (FpCel45A) encoding the GH family 45 endoglucanase. Moreover, we also provided functional classification of 473 (34%) of F. palustris unigenes using the Gene Ontology hierarchy. The annotated EST data sets and related analysis may be useful in providing an initial insight into the genetic background of F. palustris.
Recently the production of ethanol from lignocecllulosics has received much attention due to immense potential for conversion of renewable biometerials into biofuels and chemicals. Fomitopsis palustris causes a typycal brown-rot and is unusual in that it rapidly depolymerize the cellulose in wood without removing the surrounding lignin that normally prevents microbial attack. This study demonstrated that the brown rot basidiomycete F. palustris was able to degrade crystalline cellulose. This fungus could also produce the three major cellulases (BGL, EXG and EG) when the cells were grown on 2.0% Avicel. The fungus was able to degrade both the crystalline and amorphous forms of cellulose from woody biomasses. Moreover, we found that this fungus has the processive EG like CBH which are able to degrade the crystalline region of cellulose. To establish the cellulase system in relation with degradation of woody biomass, we performed that purification, characterization and molecular cloning of a BGL, EGs and GLA from F. palustris grown on Avicel.
본 논문에서는 갈색부후균 Fomitopsis palustris가 볏짚을 분해하는 과정 중에 생산하는 xylanase를 확인하여 분리 정제하고, 아미노산 서열분석을 통해 동정하였다. 그리고 동정된 단백질의 효소특성을 조사하였다. 분리 정제된 단백질은 SDS-PAGE분석에서 43kDa의 분자량을 나타내었고, 아미노산 서열분석에서는 Glycoside Hydrolase family 10에 속하는 xylanase와 높은 상동성을 나타내었다. 정제효소의 기질에 대한 $K_m$치는 $31 mg/m{\ell}$, $V_{max}$는 252.3 U/mg, $K_{cat}$은 $2.3{\times}10^4/min$이고, 최적 pH 범위는 pH 4.0~5.0 최대 활성 온도는 $70^{\circ}C$로 밝혀졌다.
To evaluate the resistance of wood to decay caused by fungi, sapwood and heartwood of red pine (Pinus densiflora) and sapwood and heartwood of larch (Larix kaempferi) were conducted. Wood samples were immersed for 96 h in pyroligneous liquor. Then, the brown-rot fungus, Fomitopsis palustris, was used to examine the decay resistance of red pine and larch. Weight and density of wood from the all conditions increased after immersion treatment. Weight loss after decay resistance test was also dropped with a immersion treatment. The lowest weight loss indicated at immersion-treated heartwood of larch. Immersion treatment using pyroligneous liquor effectively increased the resistance of wood to decay caused by fungi.
목재사용량의 증가에 따라 목재의 화재안전성에 대한 요구가 높아지고 있다. 실내 사용 목재의 난연처리에 무기인계를 약제로 사용함으로써 환경에 대한 부담을 줄이면서 난연성능을 향상 시킬 수 있다. 수용성 약제를 가압 주입하여 목재 내 깊숙이 침투시키면 목재의 고유기능을 유지하면서 난연성능을 부여 할 수 있다. 난연제의 용탈을 억제하여 장기간 성능을 유지할 수 있는 장점도 있다. 저자들은 액상규산나트륨을 주약제로 하고, 붕산 및 인계 약제를 보조약제로 하여 목재 내로 약액을 주입하는 공정을 개발하였다. 이들 약제는 난연성능 외에 방부 및 방충성능을 지니는 약제가 포함되어 있어, 난연성능과 함께 목재 사용 시 노출될 수 있는 부후환경에서의 내후성능을 방미효력과 방부효력으로 평가하였다.
This study was conducted to evaluate the resistance of heat-treated wood using the catalyst to decay caused by fungi for sapwood and heartwood of two tree species, Korean red pine (Pinus densiflora) and Japanese larch (Larix kaempferi), respectively. Wood samples were immersed for 10 min in sulfuric acid (7.5%) and then heat-treated at $130^{\circ}C$ for 90 min. Fomitopsis palustris, a brown-rot fungus, was used to examine the decay resistance of Korean red pine and Japanese larch wood. Weight and density of wood from the all conditions increased after heat treatment using the catalyst. Weight loss after decay resistance test was also dropped with a heat treatment. The lowest weight loss indicated at heat-treated heartwood of Japanese larch. Heat treatment using the catalyst effectively increased the resistance of wood to decay caused by fungi.
구리 기반 목재 방부제 중 MCQ를 이용하여, 목재 내 주입량에 따른 부후 특성을 조사하였다. 목재 시편에 주입량을 달리하여 약제를 주입한 후, 갈색부후균인 부후개떡버섯에 의한 방부효력 시험을 진행하였다. 이후, 질량감소율을 측정한 결과 무처리재는 35% 이상의 질량감소율을 보였으며, 실내 부후에 의한 MCQ 약제의 방부 효력을 나타내는 주입량은 $3.99{\pm}0.42kg/m^3$로 나타났다. 광학현미경 및 전자현미경으로 시편의 3단면을 관찰했을 때, 무처리재와 낮은 주입량으로 처리한 처리재에서는 세포벽의 파괴와 함께 전체적으로 부후가 진행됨이 확인 되었고, 많은 수의 균사를 관찰할 수 있었지만, bore hole은 확인할 수 없었다. 본 연구에서 MCQ의 주입량에 따른 질량감소율 및 부후 현상이 크게 차이가 난 점 등을 고려하여, 국내 환경에서 MCQ의 주입량에 관한 적정성 검토가 필요하다고 생각되었다.
국내에서 사용되고 있는 가압주입 처리용 구리 붕소 아졸화합물계의 목재 방부제 Copper Azole (CuAz)의 목재내 주입량별 부후 특성을 조사하였다. 여러 가지 주입량으로 CuAz-2 방부제를 가압주입한 시편을 이용하여 갈색부후균인 부후개떡버섯에 의한 방부효력시험을 실시한 후 질량감소율을 측정하였다. 또한, CuAz-2 처리 시편을 부후개떡 버섯으로 부후시킨 후 광학현미경과 전자현미경으로 부후 특성을 관찰하였다. 그 결과, 부후개떡버섯에 의한 무처리재는 40% 이상의 질량감소율을 보여주었고 실내 부후에 의한 CuAz-2 약제의 방부효력을 나타내는 값은 $1.79{\sim}3.32kg/m^3$이었다. CuAz-2의 주입량에 따라 횡단면, 방사단면, 접선단면에서의 목재조직은 무처리 시편과 비교하여 부후 정도가 다르게 나타났다. 횡단면에서는 조재와 만재부분에서 수직수지구, 방사조직의 부후가 많이 관찰되었고, 방사단면에서는 방사가도관, 방사유세포, 벽공 부분이 부후되어 파괴되었고, 접선단면에서는 방사조직, 수평수지구가 심하게 부후되었다. 따라서 본 연구에서 주입량에 따른 부후 현상이 크게 차이가 난 점 등을 고려하여, 현재의 CuAz-2 주입량에 대한 적정성 검토가 국내 환경에 대해서 이루어져야 할 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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