• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제11권5호
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• pp.819-824
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• 2001

The principal DNA modification systems of the amino-acid-producing bacteria Corynebacterium glutamicum AS019, Brevibacterium flavum BF4, and B. lactofermentum BL1 was investigated using two approaches; digestion of plasmid DNA isolated from these species TseI and Fnu4HI, and sequence analysis of the putative methyltransferase target sites following the derivatization of DNA using metabisulfite treatment. The C. glutamicum and B. flavum strains showed similar digestion patterns to the two enzymes, indicating that the target for cytidine methyltransferase recognizes 5'-GCSGC-3'(where S is either G or C). Mapping the methylated cytidine sites by bisulfite derivatization, followed by PCR amplification and sequencing, was only possible when the protocol included an additional step eliminating any underivatized DNA after PCR amplification, thereby indicating that the derivatization was not $100\%$ efficient. This may have been due to the high G0C content of this genus. It was confirmed that C. glutamicum AS019 and B. flavum BF4 methylated the cytidine in the $Gm^5CCGC$ sequences, yet there were no similar patterns of methylation in B. lactofermentum, which was consistent with the distinctive degradation pattern seen for the above enzymes. These findings demonstrate the successful application of a modified bisulfite derivatization method with the Corynebacterium species for determining methylation patterns, and showed that different species in the geneus contain distinctive restriction and modification systems.

• 한국식품영양과학회지
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• 제16권4호
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• pp.251-261
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• 1987

본(本) 실험(實驗)은 세균(細菌)에 의한 L-threonine의 효율적인 생성(生成)을 검토할 목적(目的)으로 Brevibacterium flavum ATCC 14067을 사용하여 L-threonine 생성능(生成能)이 우수한 균수(菌株)를 선발(選拔)하기 위해 변이원인 N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG)로 처리하여 돌연변이주(突然變異株)를 유도(誘導)한 후(後), 다시 methionine 영양요구주, lysine 영양요구주, isoleucine 영양요구주, lysine 영양요구주, isoleucine 영양요구주, methionine 및 isoleucine 영양요구주를 선발(選拔)하였다. 또한 선발(選拔)된 영양요구성 변이주들 중에서 L-threonine 생성능(生成能)이 원균(原菌)에 비(比)해 $3{\sim}4$배(倍)정도 우수한 B-13균주(菌株)$(met^-)$를 선발(選拔)하여 L-threonine 생성력(生成力), 배지(培地) 조성(組成) 및 배양(培養)에 따른 몇가지 요인(要因)들에 대하여 실험한 결과 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1. L-threonine생성량은 원균주가 1.4mg/ml에 비해 methionine 영양요구성 변이주인 B-13은 4.86mg/ml로서 약 3.5배(倍)의 높은 생성량을 나타내었다. 2. B-13에 의한 L-threonine 생성(生成)에 적당한 배지조성(培地組成)은 glucose 10%, ammonium sulfate 2%, potassium phosphate monobasic 0.2%, magnesium sulfate 0.05%, biotin $200{\mu}g/l$ thiamine $300{\mu}g/l$이였으며 nicotinic acid 0.05% 첨가시 더욱 증가 되었다. 3. B-13에 있어서 유기영양원에 대한 효과는 yeast extract와 Peptone이 양호하였으며 영양요구물질인 metionine은 $100{\mu}g/ml$가 적당하였으며 aspartic acid와 homoserine 첨가시 L-threonine 생성이 증가되었으며 lysine 첨가시에는 감소하는 경향이 나타났다. 4. B-13에 의한 L-threonine 생성에 가장 적절한 pH는 $7.0{\sim}8.0$이였으며 배양일수(培養日數)는 4일(日)이 적당하였다.

• 한국식품영양학회지
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• 제9권1호
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• pp.21-28
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• 1996

This study was attempted to investigate the production of L-tyrosine by Brevibacterium flavum ATCC 14067. To select the strain which produce more L-tyrosine, mutants were induced by N-methyl-N'-nitro-nitrosoguanidine (NTG) treatment and phenylalanine auxotrophic mutants were induced by NTG and penicillin treatments. PFP resistant mutant was isolated from a phenylalanine auxotroph by retreatment with NTG and screened for increase of L-tyrosine production. PFP-326 mutant resistant to PPP (100ug/ml) was derived from phenylalanine auxotroph by mutagenesis with NTG and PFP-106 mutant resistant to PFP (1201g/ml) was derived from PFP-326 by mutagenesis with NTG. The composition of media for L-tyrosine production in strain PFP-106 was studied. PFP-106 mutant strain produced 50mg 11 of L-tyrosine while the parent strain produced 0.56mg 11 of L-tyrosine. The optimum composition of medium for L-tyrosine by strain PFP-106 was 10cA sucrose as carbon source, 3% ammonium sulfate as nitrogen source. The optimum cultural condition for producing L-tyrosine by strain PFP-106 was L-phenylalanine at a concentration of 1000g/mg.

• 한국미생물생명공학회:학술대회논문집
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• 한국미생물생명공학회 1978년도 춘계학술대회
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• pp.97.1-97
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• 1978

발효에 guaicol, vanillin 및 O-V-anillin phenol 등의 유도체를 처리한 결과, yeast, Bacillus subt-ilis, Brevibacterium flavum, Pseudomonas ovalis 등의 mass, 호흡량, 성장속도 등에 미치는 영향이 크므로 발효공학에 이들 phenol 유도체를 이용하면 생산성을 향상시킬 수 있을 것으로 예상되었다.

• 미생물학회지
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• 제23권4호
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• pp.265-270
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• 1985

Brevibacterium flavum과 Corllnebac ter ium glutamicum세포로부터의 원형질쳐l 형성과정, 형성된 원형질체의 미세구조, 이들 원형질체간의 융합 및 세포벽 재생을 투과전자현미경을 사용하여 관찰하였다. 원형질쳐1의 형성과 정은 특이하게 관찰되었다. 즉, penicillin G와 lysozyme의 작용을 받아 세포벽의 한 부위가 파괴되어 생긴 細孔응 통하여 원형질이 빠져나가 구형의 원형질체를 형성하였닥 융합과정에서는 원형질체들이 서로 접촉하여 접촉부꾀 를 형성하고 이어서 이 부위의 셰포막이 얼부 소실되며 양 원형질쳐1간에 내부의 울질들이 이동하였다 융합 원 행질체들은 비융합 원형질체에 비하여 세포벽의 재생이 다소 더디게 일어나는 것으로 관찰되었으며, 융합 원형질 쳐l들이 비융합 원형질체들 보다 그 크기가 월등히 컸다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권3호
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• pp.296-300
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• 1990

자외선 조사와 NTG를 처리하여 Brevibacterium flavum 10AHR(arg his $Rif^r$)과 Corynebacterium glutamicum 11TS(trp $Sm^r$의 돌연변이주를 분리하였다. B.flavum 10AHR과 C.glutamicum 11TS를 300$\mu g$/ml의 lysozyme으로 18시간 처리하여 원형질체를 형성하고, 융합시 30의 PEG 6,000으로 처리하였을 때 가장 높은$3.7\times 10^{-6}$의 융합빈도를 나타내었다.

• 한국식품과학회지
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• 제4권2호
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• pp.123-133
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• 1972

전보에서 분리 확보한 lysine 생산균주 Corynebacterium sp. S-27-12와 Brevibacterium flavum ATCC 15168 및 Micrococcus glutamicus ATCC 13032를 친주로 하여 자외선, $Co^{60}$및 N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine treatment를 처리, 90여주의 변이주를 분리하고 이들의 lysine 생산능을 비교하여 lysine 생산이 8mg/ml 이상인 균주 6주를 선정하였다. 이들 중 leucine 요구주 Brev. flavum U46-N59의 lysine 축적조건을 검토한 결과를 종합하여 포도당 100, urea 10, CSL 40, $KH_2PO_4\;2;\;K_2HPO_4,\;0.5;\;MgSO_4.\;7H_2O,\;0.4;\;antifoam\;S-57,\;1g;\;Fe_2(SO_4)_3.XH-2O,\;10;\;MnCl_2,\;4H_2O,\;10mg;\;biotin,\;30;\;thiamine-HCl,\;100{\mu}g;$ 증류수 1 l로 된 pH7.5의 합성배지에 Brev. flavum U46-N59를 $28^{\circ}C$에서 4일간 플라스크(20ml/500ml)에 진탕배양했을때(180진탕/분) 최대로 21.6mg/ml의 lysine을 생산하였다. Penicilin은 40U/ml의 농도가 되도록 배양 36시간 후에 첨가하였다.

• 동아시아식생활학회지
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• 제5권1호
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• pp.93-99
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• 1995

For the improvement of the L-lysine productivity of Brevibacterium flavum and Corynebacterium glutamicum, fusants were induced by interspecific protoplast fusion of Bacillus subtilis with C. glutamicum and B. flavum. The following results were obtained through protoplast formation of strains condition of protoplast fusion, characteristics of the fusants, and the productivity of lysine form starch. B. flavum BF-5 and C. glutamicum protoplasts were made by the treatment of 0.3unit/$m\ell$ of penicillin G at the early stationary growth phase for 2 hours followed by incubation with 10mg/$m\ell$ of lysozyme at 37$^{\circ}C$ for 120 min. When a mixture of the protoplast was treated with 30% PEG(M.W.6,000) solution containing 50mM CaCl2 at optimal conditions, the intergeneric fusion frequency between protoplasts of C. glutamicum CG-2 and B. subtilis BD 224 was 7.1${\times}$105. The genetic properties on the L-lysine producing fusants were compared with those of parental strains. As a results, the intergeneric fusants were completed in each auxotrophic requirement, resistances for S-(2-amino-ethyl)-L-cysteine and kanamycine were confirmed. And one of fusants selected, FBB-41 were found to be genetically stable fusants. The aspartokinase activity of FBB-41 strain increased than that of the parent strain.

• 미생물학회지
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• 제22권3호
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• pp.175-181
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• 1984

In order to develope a protoplast fusion system for industrial coryneform bacteria, the optimum conditions for the formation and regeneration of progoplast were examined for Brevibacterium flavum and Corynebacterium glutamicum and the protoplast fusion was performed. For the formation of the protoplast of B. flavum and C. glutamicum, the optimum time for penicillin G. treatment to obtain protoplast was mid-exponential growth phase ($O.D_{580}=0.6-0.8,\;8.0{\times}10^7-1.0{\times}10^8cell/ml$). At the optimum conditions (0.3units/ml penicillin G and $400{\mu}g/ml$ lysoyme for treatement), frequencies of protoplast formation and protoplast regeneration were 99% and 25%, respectively. Protoplast regeneration frequency was highest under the optimum conditions for the protoplast formation. Addition of 25mM $Mg^{2+}\;and\;50mM\;Ca^{2+}$ to the regeneration medium further increased the regeneration frequencies. The protoplast fusion frequencies of B. flavum and C. glutamicum in intraspecies fusion were $1.0{\times}10^{-8}\;and\;7.8{\times}10^{-4}$, of the regenerated protoplast respectively, when 33% of PEG (polythylene glycol) 6,000 was used as the fusing agent.

• 한국수산과학회지
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• 제12권2호
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• pp.95-102
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• 1979

glutamin산 발효용 균 Brevibacterium flavum을 phenol유도체인 guaiacol, o-vanillin의 처리 및 존재하에서 발효를 행한 결과를 요악하면 다음과 같다. 1) glutamin산 축적량은 guaiacol 및 o-vanillin을 처리하였을 때에는 각각 12.5g/l와 14.2g/l이 었으며 비 처리균에서는 7.0g/l이었다. 2) 발효중 세균의 단위량의 호흡계수(r)는 guaiacol 처리균, o-vanillin 처리균의 순서로 각각 2.1, 1.7mol/UOD.hr 이었으며, 비 처리균에서는 1.6mol/UOD.hr였다. 3. 발효중 산소의 용량계수는 guaiacol 처리균이 0.28/hr, o-vanillin 처리균이 0.40/hr였으며 비 처리균에서는 0.20/hr로서 o-vanillin 처리때가 가장 컸다. 4) Brevibacterium flavum의 개스교환배율은 guaiacol 300ppm의 존재시 0.85, o-vanillin 20ppm의 존재시에는 1.0이 되어 비 처리균의 0.75보다 큼으로서 phenol 유도체의 존재에 의해 RQ가 증가하였다. 5) $5%$의 포도당을 기질로 하여 발효를 행하였을 때 glutamin산의 최고농도에 달하는 시간은 guaiacol 처리 및 o-vanillin 처리때는 각각 52시간과 48시간이었으며 비 처리때에는 56시간이었다. 6) glutamin산 최고농도에 달했을 때의 세균농도는 guaiacol 처리균, o-vanillin 처리균, 비 처리균의 순서로 8.91, 9.41 UOD/ml 및 8.82 UOD/ml이었다. 7) $5\%$의 포도당은 기질로 했을 때 축적되는 glutamin산의 포도당에 대한 전이비율을 guaiacol 처리균에서는 $25\%$, o-vanillin 처리균에서는 $28.5\%$, 비 처리균에서는 $14.0\%$의 전이율을 나타내었다. 8) phenol유도체 처리로 발효능이 증가되는 현상이 phenol 유도체가 산소와 전자이동착체를 형성하여 원골한 산소공급을 배양계에 해주는 때문이라 생각된다.