This stydy was performed to investigate the inhibitory effect of bovine milk on the atherosclerotic rats. Eighty male rats of 5-weeks of age were divided into 4 groups, control, active treatment control fed the atherogenic feed, and skim milk and whole milk groups fed powdered skim or whole milk mixed with the atherogenic feed and observed for 13 weeks. Growth, clinical and pathological changes of the rats were examined. Rats of the 4 groups did not show significant difference of feed intake and weight gain. The level of serum cholesterol, high density lipoprotein cholesterol (HDL-cholesterol) fraction, and inorganics between skim milk and whole milk groups were not significantly different though significant difference was shown between active treatment control and milk groups. Milder calcification and nearosis in aorta, heart and kidney and fat degeneration in liver were seen in the milk groups than were in active treatment control. Marked difference, however, was not found between the skim milk and whole milk groups. Both powdered skim and whole milks could have a helpful effect of vitamin D2-and -cholesterol-induced atherosclerosis in rats.
상업적 단백질 분해 효소에 0.02% $CaCl_2$를 첨가하여 응유 활성화를 시킨 탈지유에 대한 분해 작용의 결과를 요약하면 다음과 같다. 다양한 효소별 가수분해 시간에 따른 가수분해도는 미생물 유래 효소와 trypsin은 pepsin과 papain W-40보다 높은 분해도를 나타냈다. 12% TCA 용액에 가용성인 NPN의 양은 trypsin이 가장 높은 분해도를 나타내었고 rennet과 pepsin이 가장 낮은 분해도를 보였다. 전기영동에 있어서 trypsin과 protease S는 $\alpha$- lactalbumin을 분해하였고 papain w-40은 $\beta$- lactoglobulin을 미약하게 분해하였으며 neutrase 1.5는 90분 이후부터 $\alpha$-lactalbumin과 $\beta$-lactoglobulin을 분해하였다. Rennet과 비교한 전기영동상에서는 rennet에 의해 분해 되지 않은 ${\alpha}_s$- casein과 $\beta$-casein을 trypsin과 protease S가 다량 분해하였고 $\kappa$-casein은 rennet에 비해 papain W-40이 상당 수준의 분해상을 나타내었다. 이상의 결과 가수분해도 및 NPN 양은 trypsin, neutrase 1.5 및 protease S가 다른 효소에 비해 높게 나타났으며, 전기영동상에서는 pepsin과 neutrase 1.5가 rennet과 유사한 경향을 나타내었다.
Kim, Sang Hoon;Lee, Ji Yoon;Balolong, Marilen P.;Kim, Jin-Eung;Paik, Hyun-Dong;Kang, Dae-Kyung
한국축산식품학회지
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제37권3호
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pp.402-409
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2017
A novel peptide having free radical scavenging activity was separated, using an on-line high-performance liquid chromatography (HPLC) - ABTS screening method, from bovine skim milk fermented by Lactococcus lactis SL6 (KCTC 11865BP). It was further purified using reverse phase-HPLC (RP-HPLC) and sequenced by RP-HPLC-tandem mass spectrometry. The amino acid sequence of the identified peptide was determined to be Phe-Ser-Asp-Ile-Pro-Asn-Pro-Ile-Gly-Ser-Glu-Asn-Ser-Glu-Lys-Thr-Thr-Met-Pro-Leu-Trp (2,362 Da), which is corresponding to the C-terminal fragment of bovine ${\alpha}_{s1}$-casein (f179-199). The hydroxyl radicals scavenging activity ($IC_{50}$$28.25{\pm}0.96{\mu}M$) of the peptide chemically synthesized based on the MS/MS data showed a slightly lower than that of the natural antioxidant Trolox ($IC_{50}$$15.37{\pm}0.52{\mu}M$). Furthermore, derivatives of the antioxidant peptide were synthesized. The antioxidative activity of the derivatives whose all three proline residues replaced by alanine significantly decreased, whereas replacement of two proline residues in N-terminal region did not affect its antioxidative activity, indicating that $3^{rd}$ proline in C-terminal region is critical for the antioxidative activity of the peptide identified in this study. In addition, N-terminal region of the antioxidant peptide did not show its activity, whereas C-terminal region maintained antioxidative activity, suggesting that C-terminal region of the peptide is important for antioxidative activity.
초고온-살균 우유를 이용하여 탈지유와 콜로이드성 인산칼슘이 제거된 우유에 TGase를 첨가하여 반응시킨 다음 초고속 원심분리를 실시하고 침전된 카제인 입자들을 동결건조하여 조직의 성상에 대해 주사 전자 현미경을 이용해 관찰, 비교하였다 탈지유는 카제인 입자들이 원심분리 초기(5,000${\times}$g)에는 규칙적으로 회합하였으며 원심분리 속도가 증가하면서 홈을 형성하였고(10,000∼20,000${\times}$g), 40,000${\times}$g에서 다시 회합하였다. 그리고, 100,000${\times}$g에서는 카제인 입자 수의 증가와 함께 규칙적인 회합층을 이루었다. 탈지유에 TGase를 처리하고 1시간 반응시킨 경우에 카제인 입자들의 성상은 입자들끼리 엉켜져서 회합을 하였으며 초고속 원심 분리 속도 증가에 따라 규칙적으로 혹은 불규칙적으로 변형되면서 입자들이 넓어지다가 다시 규칙적으로 카제인 입자들이 회합층을 이루었다. 탈지유에 TGase를 처리하고 8시간 반응시킨 경우 카제인 입자들의 성상은 1시간 반응시킨 경우보다 카제인 입자들이 미세해지면서 규칙적인 층을 형성하였으며, 초고속 원심분리 속도가 증가함에 따라 카제인입자들의 조직이 홈을 형성하면서 불규칙적으로 회합하여 분산된 형태를 나타내다가 다시 비교적 규칙적으로 회합하였다. 콜로이드성 인산칼슘이 유리된 우유에서는 카제인 입자들이 침전되지 않았다. TGase가 첨가되어 1시간 반응시킨 후 콜로이드성 인산칼슘이 유리된 우유에서는 20,000${\times}$g 속도에서부터 카제인 입자들이 침전하였고 그 양상은 작은 낙엽처럼 미세하게 회합층을 형성하였으며, 속도 증가에 따라 카제인 입자들의 조직은 개방되었다. TGase가 첨가된 후 8시간 반응시킨 다음 콜로이드성 인산칼슘이 유리된 시료의 경우 카제인 입자들은 대부분 넓게 회합층을 이루고 불규칙적이었으며 원심분리 속도 증가에 따라서도 큰 변화가 없었다. TGase가 첨가된후 1시간 혹은 8시간 반응시킨 다음 콜로이드성 인산칼슘을 제거하고 원심분리한 현탁액(유청 단백질)을 pH 4.6으로 조정 후 2단계 원심 분리한 침전물의 경우 카제인 입자들은 1시간 반응시킨 시료에서는 대부분의 카제인 입자들끼리 엉켜져 불규칙적인 회합층을 이루고 있는 반면에 8시간 반응시킨 시료에서는 입자들이 미세한 형태로 분산되어 규칙적인 층을 형성하였다.
원유를 이용하여 탈지유와 콜로이드성 인산칼슘이 제거된 우유에 TGase를 첨가하여 반응시킨 다음 초고속 원심분리를 실시하여 침전된 카제인 입자들을 동결건조하여 조직의 성상을 주사 전자 현미경을 이용해 관찰, 비교하였다. 탈지유와 탈지유에 TGase를 처리하고 1시간 반응시킨 경우에서 카제인 입자들의 성상은 초고속 원심분리 속도 증가에 따라 불규칙적으로 혹은 규칙적으로 변형되면서 입자들이 넓어지다가 다시 규칙적으로 카제인 입자들이 회합층을 이루었다. 탈지유에 TGase를 처리하고 8시간 반응시킨 경우 카제인 입자들의 성상은 불규칙적으로 모여서 덩어리 형태를 나타내다가 다시 규칙적으로 회합하였으며, 원심분리 속도의(20,000∼40,000 ${\times}$g)증가에 따라 조직이 넓어지면서 층을 이루다가 다시 불규칙으로 회합하여 분산되는 현상이 관찰되었다. 콜로이드성 인산칼슘이 제거된 우유와 콜로이드성 인산칼슘이 제거된 우유에 TGase를 첨가하여 1시간 반응시킨 경우에서는 카제인 입자들이 거의 침전하지 않았다. 반면에 8시간 반응시킨 경우에서는 카제인 입자들이 초고속 원심분리 속도 증가에 따라 모여서 회합층을 이루다가 점차적으로 조직이 넓어지는 현상을 관찰할 수 있었다. 결론적으로 주사 전자 현미경에 의한 카제인 입자들의 조직 성상은 TGase를 처리하고 반응시간과 초고속 원심분리 속도를 증가했을때 입자들이 모여 불규칙하게 분산되거나 혹은 넓게 회합층을 형성하였다. 이러한 현상은 TGase가 우유 단백질에 작용하여 교차결합을 촉매함으로써 단백질의 분자구조가 변형되어 카제인 입자들의 조직이 다양하게 나타난 것으로 생각된다.
가공식품중의 우유단백질 분석을 위하여 효소면역측정법, ELISA를 개발하였다. 특이 항체를 생산하기 위해 열에 안정하고 우유의 주요한 단백질인 ${\alpha}_{s1}-CN$을 토끼에 면역하였다. 항${\alpha}_{s1}-CN$ 항체를 이용하여 간접경합 ELISA를 실시한 결과 검출한계는 $0.1\;{\mu}g/mL$ 이었고 ${\alpha}_{s1}-CN$, skim milk, ${\beta}-CN$과 whey protein isolate에 대한 특이항체의 반응성은 각각 100%, 37%, 0.14%과 0.04% 이었다. 그러나 다른 우유단백질인, ${\beta}-lactoglobulin,\;{\alpha}-lactalbumin$, bovine serum albumin 과 대두단백질인 isolated soy protein 에 대해서는 거의 반응성을 보이지 않았다. 샌드위치 ELISA 결과는 검출한계가 $0.01\;{\mu}g/mL$로 간접경합 ELISA 에 비하여 10배 정도 민감해져 따라서 이를 시료 분석에 이용하였다. 시유에 1-10%의 whole CN을 첨가한 spike test 결과 whole CN의 평균 회수율이 94.8%(CV, 8.2%)으로 나타났다. 식품재료와 유가공 제품에 대한 whole CN의 정량분석을 실시한 결과 탈지유는 29%, WPI는 0.03%, 농후 요구르트는 0.25%였으며 가공치즈는 6.9%로 나타났다.
Calcium-stimulated ATPase ($Ca^{2+}$-ATPase) which has optimal pH value at 7.0 was found in the membrane fraction of human milk, and its enzymatic properties were studied. The purified $Ca^{2+}$-ATPase required 0.45 mM Ca ion for maximal activity. Among the nucleosides, $Ca^{2+}$-ATPase showed a higher substrate specificity to ATP and UTP than to CTP and GTP. $Ca^{2+}$-ATPase had apparent Km value of 0.065, and V max of 7.63 mol ATP hydrolyzed/mg pro-tein per min, respectively. $Ca^{2+}$-ATPase was potently inhibited by lanthanide, vanadate, and p-chloromercuribenzoate, and inactivated by EDTA, and CDTA and EGTA, but were unaffected by N-ethylmaleimide, $NaN_3$, ouabain, or oligomycin, and was completely inactivated by heating at $60^{\circ}C$ for 10 min. This enzyme activity was concentrated in the membrane fraction of the cream and skim milk membrane, but not founded in bovine milk.
본 연구는 홀스타인, 한국재래산양 및 한우유로부터 glycomacropeptide(GMP)를 분리하였으며, 각 GMP의 trypsin 가수분해물의 혈소판응집 억제 효과를 in vitro상에서 알아보았다. 홀스타인, 한국재래산양 및 한우의 GMP는 분자량이 모두 약 20 KDa이었으며, sialic acid 함량은 각각 $36.86{\pm}2.36$, $37.98{\pm}1.27$ 및 $31.19{\pm}1.87{\mu}g/mg$이었다. 또한 모든 개체의 GMP에서 tyrosine이 검출되었다. 홀스타인, 한국재래산양 및 한우 GMP의 trypsin 가수분해물에 의한 혈소판 응집 억제율은 반응 30초에 4.02, 5.51 및 12.77%로 각각 나타나 시간이 경과할수록 감소하는 경향을 보였다. 혈소판의 현미경 관찰 결과 가수분해물 첨가 후 혈소판 수가 증가하였으나, 첨가 후 30초가 경과한 시점부터 혈소판 수가 감소하기 시작하여 120초 후에는 관찰 할 수 없었다. 본 실험 결과 bovine 및 caprine GMP의 trypsin 가수분해물에서 혈소판 응집을 억제할 수 있는 small peptide가 있는 것으로 생각되며, 향후 이러한 연구는 심근경색증 및 뇌혈전증을 예방할 수 있는 생리활성 물질로 이용될 수 있을 것이라 생각된다.
The purpose of this study was to search the calcium and iron rich foods in Korean people. The food sources presented in the current home economics textbooks of middle and high school were investigated. And 40 kinds of calcium and iron rich foods were selected by the quantity in 100g edible portion. one serving size and according to 1997 food supply data. Also 3 major food groups of calcium and iron supply in Korean were identified, and 10 rich foods for each food groups were selected. The results were summarized as follows. 1. The food sources of calcium 1) The food sources of calcium presented in the home economics textbooks of middle and high school are milk and dairy products. small fishes such as anchovy icefish and dried strip and green vegetables etc. 2) The calcium rich foods by 100g edible portion were in order of skim milk powder river snail sesame sea mustard. whole milk powder. snapping turtle loach sea tangle(dried) opossum shrimp and sea lettuce(dried). And the calcium rich foods by the calcium content in one serving were in order of river snail snapping turtle opossum shrimp loach spiny lobster skate skim milk powder small alaska pollack freshwater crab condensed milk whole milk powder skate ray and milk. 3) The 3 major calcium supply food groups in Korean were vegetables fish and shellfishes and milk and dairy products. 4) The calcium supply foods according to the quantity of food supply in 1997 was in order of sea mustard, milk anchovy chinese cabbage soybean skin milk powder laver shrimp welsh onion and maize. The vegetables were the important sources of calcium in Korean. 2. The food sources of iron 1) The food sources of iron which are commonly presented in the textbooks of middle and high school were meat liver egg(egg yolk) and green vegetables etc 2) The iron rich foods on the basis of the iron content in 100g edible portion were in order of surf clam marsh clam laver(dried)( sea lettuce(dried), crayfish pelilla seed little neck clam orient hard clam, venus clam, and freshwater carab. And the iron rich foods by the iron content in one serving were in order of surf clam marsh clam crayfish little neck clam orient hard clam freshwater crab venus clam hen cockle green confertii(fresh) pen shell and spiny lobster. 3) The 3 major iron supply food groups in Korean were cereals an cereal products fishes and shellfishes and vegetables. 4) The iron supply food according to the quantity of food supply in 1997 was in order of soybean sea mustard maize rice meat edible viscera laver wheat flour, pook, red pepper, egg and bovine meat.
원유에서 지방을 제거한 탈지유의 pH를 5.5, 7.0, 8.5로 조정한 다음 TGase를 첨가하여 0, 1, 2, 4, 8시간 반응시킨 후 동결 건조하여 조직의 성상을 주사 전자 현미경을 이용해 관찰, 비교하였다. pH와 TGase를 처리하지 않은 탈지유는 단백질 입자들이 규칙적으로 회합해 있었다. pH 조정 후 TGase를 처리한 다음 반응시간을 달리한 시료에서는 pH를 5.5로 조정한 경우 현저한 변화가 있었는데, 그 변화 양상은 단백질 입자들이 0시간에서 조각을 이루어 회합되어 있다가 1시간 반응시킨 경우 단백질 입자들이 서로 결합하여 넓게 회합하였다. 2시간 반응시킨 경우 단백질 입자들이 다시 뭉쳐서 회합하였으며 4시간 반응시킨 경우 뭉쳐져 있던 단백질 입자들이 조그만 한 구형 성상으로 넓게 회합하였다. 8시간 반응시킨 시료는 구형 성상으로 회합되어 있던 단백질 입자들이 사라지면서 다시 넓게 회합하는 것을 관찰할 수있었다. pH 7.0과 8.5 조건하에서는 단백질 입자들이 조각 형태를 이루고 있었으며 반응시간이 증가할수록 입자들이 넓게 확대되는 현상을 나타냈다. 전반적으로 현미경적 입자의 형태는 pH 5.5로 조정된 시료가 pH 7.0또는 pH 8.5로 처리된 시료들보다 더작게 관찰되었다. 이와 같은 단백질들의 현미경적 변화 양상은 pH TGase처러 그리고 반응시간에 따라 영향을 받고 있는 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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