The periodontal ligament (PDL) is the connective tissue between tooth root and alveolar bone containing mesenchymal stem cells (MSC). It has been suggested that human periodontal ligament stem cells (hPDLSCs) differentiate into osteo/cementoblast and ligament progenitor cells. The periodontitis is a representative oral disease where the PDL tissue is collapsed, and regeneration of this tissue is important in periodontitis therapy. Fibroblast growth factor-2 (FGF-2) stimulates proliferation and differentiation of fibroblastic MSCs into various cell lineages. We evaluated the dose efficacy of FGF-2 for cytodifferentiation of hPDLSCs into ligament progenitor. The fibrous morphology was highly stimulated even at low FGF-2 concentrations, and the expression of teno/ligamentogenic markers, scleraxis and tenomodulin in hPDLSCs increased in a dose dependent manner of FGF-2. In contrast, expression of the osteo/cementogenic markers decreased, suggesting that FGF-2 might induce and maintain the ligamentogenic potential of hPDLSCs. Although the stimulation of tenocytic maturation by $TGF-{\beta}1$ was diminished by FGF-2, the inhibition of the expression of early ligamentogenic marker by $TGF-{\beta}1$ was redeemed by FGF-2 treatment. The stimulating effect of BMPs on osteo/cementogenesis was apparently suppressed by FGF-2. These results indicate that FGF-2 predominantly differentiates the hPDLSCs into teno/ligamentogenesis, and has an antagonistic effect on the hard tissue differentiation induced by BMP-2 and BMP-4.
갱년기 여성에는 여러 폐경 증후들이 나타나는데, 특히 에스트로겐의 감소로 인한 혈중 지질 조성의 변화 등으로 심혈관계 질환의 발병율이 급격히 증가하는 경향을 보이고 있으며, 또한 급격한 골 소실로 인한 골다공증의 위험성이 높아 이에 대한 예방 및 치료에 대한 연구가 활발히 이루어지고 있다. 본 연구에서는 갈조류인 곰피 추출물을 시료로하여 in vivo 실험을 통하여 갱년기 장애 시 나타날 수 있는 골 손실 개선효과를 검토하기 위하여 골 형성 지표인 alkaline phosphatase(ALP) 활성 및 osteocalcin 농도와 골 용해 지표인 C-telopeptide of collagen cross-links(CTx) 및 결합조직 중의 collagen 함량을 측정하였다. ALP는 폐경 시 에스트로겐의 결핍으로 인하여 골 전환이 증가하므로 골 형성의 지표로써 널리 사용되고 있다. 난소절제 시 에스트로겐 결핍으로 bone turnover가 증가되어 비 난소절제군에 비해 혈장 중의 ALP 활성이 증가되었으나, 난소 절제 후 곰피 추출물을 투여한 군에서는 그 활성이 유의적으로 감소하는 경향이 나타났다. 이것은 난소절제 후 에스트로겐의 분비가 감소되는데 반해 곰피 추출물이 에스트로겐 대체 작용을 함으로써 난소절제로 인한 골 손실 정도를 완화시킨 것으로 추측되어진다. 혈중 osteocalcin은 난소를 절제한 OVX-CON군의 경우 난소를 절제하지 않은 SHAM군에 비해 높은 경향을 나타내어 상대적으로 골 중의 osteocalcin 함량은 줄어들었음을 나타내었다. 곰피 추출물을 투여한 경우 OVX-CON군보다 혈중 osteocalcin 농도가 농도 의존적으로 감소하는 경향을 나타내었으나, 유의적인 차이는 나타나지 않았다. 혈중 osteocalcin은 골 대사가 균형을 유지할 때에는 골 대사 표지자로서 작용하여 폐경 후 증가하는 것으로 나타나고 골 대사가 불균형 시에는 골 형성 표지자로서 작용하여 증가 또는 감소하는 것으로 나타나 폐경 후 혈중 osteocalcin의 증감에 대한 해석이 다르게 나타날 수 있으므로 보다 많은 연구가 추가적으로 이루어져야 할 것으로 생각된다. 한편, 골 용해 지표인 혈액 중의 CTx는 난소절제군이 비 절제군에 비해 높은 수준을 보여 난소절제군에 있어 골 용해가 증가되었음을 나타내었다. 반면 곰피 추출물의 투여로 인해 CTx 함량이 감소하였으며, ES200군의 경우 SHAM군보다 높은 수준으로 나타났다. 이는 난소절제로 인해 bone turnover가 증가된 상태에서 곰피 추출물의 투여로 인해 CTx 함량이 점진적으로 감소한 결과로써 곰피의 골 흡수 저해 효과에 의한 것으로 추정된다. 결합조직 중의 collagen 함량은 난소절제로 인하여 감소하였으나, 곰피 추출물의 투여에 의해 회복되는 경향을 나타내었다. 특히 연골 및 폐 조직에서는 난소 절제에 의해 감소한 collagen 함량이 난소 절제 후 곰피 추출물을 투여한 군에서 증가하였고, 곰피 추출물 200 mg/kg bw/day 투여군인 OVXEC200군에서 유의적으로 증가하는 결과가 나타났다. 한편 골 및 피부조직에서도 난소 절제에 의해 감소한 collagen 함량이 곰피 추출물 투여에 의해 증가하였고, 정상군인 SHAM군 수준 이상으로 증가하는 결과가 나타났다. 이상의 실험 결과는 estrogen 부족 시 일어날 수 있는 골 손실에 대한 예방 소재로써 곰피의 활용 가능성을 시사하고 있으며, 이를 활용한 기능성 소재 개발도 가능할 것으로 기대된다.
Aim of the study: An alternative source of adult stem cells that could be obtained in large quantities, under local anesthesia, with minimal discomfort would be advantageous. Adipose tissue could be processed to obtain a fibroblast-like population of cells or adipose tissue-derived stromal cells (ATSCs). This study was performed to confirm the availability of ATSCs in bone tissue engineering. Materials amp; Methods: In this study, adipose tissue-derived mesenchymal stem cell was extracted from the liposuctioned abdominal fat of 24-old human and cultivated, and the stem cell surface markers of CD 105 and SCF-R were confirmed by immunofluorescent staining. The proliferation of bone marrow mesenchymal stem cell and ATSCs were compared, and evaluated the osteogenic differentiation of ATSCs in a specific osteogenic induction medium. Osteogenic differentiation was assessed by von Kossa and alkaline phosphatase staining. Expression of osteocyte specific BMP-2, ALP, Cbfa-1, Osteopontin and osteocalcin were confirmed by RT-PCR. With differentiation of ATSCs, calcium concentration was assayed, and osteocalcin was evaluated by ELISA (Enzyme-linked immunosorbant assay). The bone formation by 5-week implantation of HA/TCP block loaded with bone marrow mesenchymal stem cells and ATSCs in the subcutaneous pocket of nude mouse was evaluated by histologic analysis. Results: ATSCs incubated in the osteogenic medium were stained positively for von Kossa and alkaline phosphatase staining. Expression of osteocyte specific genes was also detected. ATSCs could be easily identified through fluorescence microscopy, and bone formation in vivo was confirmed by using ATSC-loaded HA/TCP scaffold. Conclusions: The present results show that ATSCs have an ability to differentiate into osteoblasts and formed bone in vitro and in vivo. So ATSCs may be an ideal source for further experiments on stem cell biology and bone tissue engineering.
Few studies investigated the effects of nutrition education and exercises in women with osteopenia. This study examined the relationship between changes in dietary intakes and changes in indicators related to bone health in postmenopausal women with osteopenia (-2.5 ${\leq}$ T-score ${\leq}$ 1) after a 12-week intervention. Thirty-one postmenopausal women aged > 50 years residing in Seoul were recruited and participated in nutritional education regarding bone health and general nutrition practices and aerobic exercises (three times a week; 60 min per session). Twenty-five subjects completed the study and were eligible for the analysis. Bone mineral density (BMD) at femoral neck was measured by dual energy x-ray absorptiometry. Serum calcium, osteocalcin, and intact parathyroid hormone (PTH) were also measured. Dietary intake was estimated by using a one-day 24 recall by a clinical dietitian. After 12 weeks, meat consumption increased (P = 0.028) but vegetable intake decreased (P = 0.005). Intakes of animal protein (P = 0.024), vitamin B1 (P = 0.012) and vitamin $B_2$ (P = 0.047) increased, and sodium intake decreased (P = 0.033). Intact PTH (P = 0.002) decreased and osteocalcin (P = 0.000) increased, however, BMD decreased (P = 0.000). Changes in mushroom consumption were positively correlated with femoral neck BMD (r = 0.673, P = 0.003). Changes in animal iron intake were negatively correlated with intact PTH (r = -0.488, P = 0.013) but were positively correlated with osteocalcin (r = 0.541, P = 0.005). These results suggested that the association between animal iron intake and biochemical markers of bone turnover may play an important role in bone metabolism. Further studies are needed to shed light on complicated mechanisms of diet, hormonal levels of bone metabolism, and bone density.
이소플라본 보충과 운동의 병행이 성장기 암컷 흰쥐의 골격대사에 미치는 영향을 알아보고자 생화학적 골대사 지표 및 골대사 관련 호르몬, 척추와 대퇴 골밀도 및 골함량에 미치는 영향을 분석하였다. 그 결과, 체중증가량과 식이섭취량, 식이효율은 이소플라본 보충과 운동의 병행에 따라 실험군간에 유의적인 차이가 없었다. 골형성 지표인 혈중 ALP와 osteocalcin은 이소플라본 보충과 운동의 병행에 따라 실험군간에 유의적인 차이가 없었고, 골용해 지표인 요 중 DPD crosslink value는 실험군간에 유의적인 차이가 없었다. 골대사관련 호르몬인 혈중 부갑상선 호르몬, 칼시토닌 및 에스트로겐 농도도 실험군 간에 유의적인 차이가 없었다. 척추 골밀도, 척추 골함량 및 대퇴골함량은 이소플라본 보충과 운동의 병행에 의해 유의적인 차이가 없었고 대퇴골밀도는 IFR군이 대조군보다 유의적으로 높았다. 체중당 대퇴골함량은 IFS군이 대조군보다 유의적으로 높았다. 체중 당 척추골밀도 및 척추골함량, 체중 당 대퇴골밀도는 대조군과 비교하여 이소플라본 단독 보충, 달리기운동 병행, 수영운동 병행 모두 유의적으로 증가하여 실험군내에서 이소플라본 보충과 운동 병행에 따른 유의적 차이는 없었고 운동병행군에서는 운동형태에 따라 달리기와 수영 운동의 차이가 없었다. 결론적으로 성장기 쥐에서 이소플라본 보충과 운동의 병행은 이소플라본 단독보충과 비교하여 상승효과는 없었으나 이소플라본의 섭취 및 달리기와 수영운동 병행 각각은 척추 및 대퇴 골밀도와 골함량을 증가시켜 성장기 최대골밀도 형성에 유리한 것으로 나타났다.
Purpose: The purpose of this experiment was to evaluate the clinical effect of cultured autoglogous osteoblasts as a way to treat the defect of mandible in rabbits. Materials and Methods: Twelve rabbits were used to determine the rate of osteogenesis. The osteoblasts were obtained from the iliac crest of rabbits using aspiration. They were then cultured in Dulbecco's Modified Eagles's Medium (DMEM) with beta-glycerophosophatate, L-ascorbicacid, and dexamethasone to proliferate and differentiate osteoprogenitor cells. The expression of osteogenic markers were detected by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and silver nitrate staining techniques. Five, 10-mm holes were placed in each rabbit mandible to simulate defective regions with the use of a low speed trephine bur. In the experimental group, the previously cited defects were grafted with both activated osteoblastic and autogenous bone. The control group, however, was only grafted with autogenous bone. Both groups were then analyzed at 2, 4, and 8-week intervals using bone histomorphometric analysis. Results: According to histomorphologic analysis, the rates of new bone formation at the 2, 4, and 8-week intervals were 36%, 51%, and 23% for the control group, respectively; 52%, 39%, and 28%, for the experimental group, respectively. The experimental group showed higher rates of new bone formation compared to the control group at both the 2-week and 8-week interval. Conclusion: Bone marrow-derived osteoblasts seems to be a promising bone graft material.
It is commonly acknowledged that bone morphogenic protein (BMP-2) functions as a potential osteogenic inducer in bone formation. Recently, several papers reported that bone marrow-derived stem cell (BMSC) from human is not responsive to BMP-2 in comparison to high capacity of BMP-2 in the osteoinduction of stromal cell derived from bone marrow of rodent animals such as rat or mouse. In this study, we characterized BMSC derived from 11 years old donor for the responsiveness to rhBMP-2, dexamethasone (Dex) and 1,25-dihydroxyvitamin D (vitamin D), in order to analyze their function in the early osteogenesis. The effect of over mentioned agents was evaluated by means of assessing alkaline phosphatase (ALP) activity/staining, RT-PCR analysis and von Kossa staining. In addition, we analyzed the meaning of expressed several osteoblastic markers such as alkaline phosphatase, collagen typeI, osteopontin, bone sialoprotein and osteocalcin with relation to either differentiation or mineralization. Only in the presence of Dex, human BMSC could commit osteoblastic differentiation and matrix mineralization, and either BMP-2 or vitamin D treatment was not able to induce. But BMP-2 or Vitamin D showed potential synergy effect with Dex. ALP and bone sialoprotein were clearly expressed in response of Dex treatment compared to weak expression of osteopontin in early osteogenesis. Therefore, we expect that this study will contribute partly to elucidiating early osteogenesis mechanism in human, but variations among bone marrow donors must be considered through further study.
본 연구는 0.03%의 카페인 함유 식이를 폐경모델인 난소절제쥐에서 6주간 섭취시켜 골밀도와 골무기질함량에 미치는 영향을 아래와 같이 요약하였다. 1) 체중증가량은 난소절제군이 Sham군에 비해 유의적으로 높았으며 각 군내에서 카페인 섭취에 따른 차이는 없었다. 2) 혈 중 칼슘 농도는 난소절제군내에서 카페인군이 대조군보다 유의적으로 낮게 나타났다. 3) 혈 중 ALP는 Sham군과 난소절제군 모두에서 카페인 군이 대조군보다 높은 경향을 나타내었다. 혈중 Osteocalcin은 Sham 군과 난소절제군, 그리고 각 군내에서 카페인 섭취여부에 따라 유의적인 차이를 나타내지 않았다. 4) 요 중 칼슘 및 인의 농도, 요 중 Deoxypyridinoline(DPD)와 crosslinks value는 Sham 군과 난소절제군, 그리고 각 군내에서 카페인 섭취여부에 따라 유의적인 차이를 나타내지 않았다. 5) 척추골밀도는 Sham군에 비해 난소절제군이 유의적으로 낮았고, 난소절제군내에서 카페인 첨가군과 대조군간에 차이가 없었다. 6) 대퇴골밀도와 대퇴 골무기질 함량은 Sham군과 난소 절제군 간의 차이는 없었고, 각 군내에서 식이에 따른 차이도 없었다. 따라서 카페인 0.03% caffeine 섭취는 난소절제쥐에서 6주간 섭취 시킨 경우 척추와 대퇴골밀도에 부정적 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.
The development of histomorphometric and histodynamic investigations has permitted the description of a specific and complex osteopathy in hyperthyroidism. The increased bone turnover rate in hyperthyroid patients may be accompanied by a considerable bone loss. These features are associated with both inclosed osteoclastic bone resorption and increased osteoblastric bone formation, with an accelerated calcification rate. Conventional biochemical markers of bone metabolism, i.e. serum calcium and alkaline phosphatase and urinary hydroxyproline and calcium are normal in most patients with hyperthyroidism. However, the correlation between serum BGP and serum concentration of thyroid hormon suggests that serum BGP may be a sensitive marker of increased bone formation due to the hypersecretion of thyroid hormones. Any increase in bone turnover, whether focal or diffuse, will result in an increase in $^{99m}Tc-methylenediphosphonate$ uptake (MDP). The measurement of this uptake in hyperthyroid patients by bone provides a sensitive and objective means of quantifying skeletal metabolism. Using a standard shadow-shield whole-body monitor and radioimmunoassay kit, we have measured whole-body retention of $^{99m}Tc-MDP$ up to 24hr and concentration of serum Osteocalcin in 20 patients with hyperthyroidism and in 42 normals. The results were as follows; 1) The average of serum Osteocalcin level in 42 patients with normals was $9.90{\pm}4.87(ng/ml)$ and in 20 patients with hyperthyroidism was $19.54{\pm}5.7(ng/ml)$. Both the averages of serum Osteocalcin and 24hr $^{99m}Tc-MDP$ uptakes in hyperthyroid patients were higher than those in normals. 2) $^{99m}Tc-MDP$ uptakes in skeletal system increased in proportion to normal ageing after 40 yrs old in 42 patients with normals. The average of $^{99m}Tc-MDP$ uptakes in hyperthyroid patients were higher than those in normals without related ageing. 3) A significant relationships between the $^{99m}Tc-MDP$ uptakes and serum Osteocalcin level were peformed (r=0.55, $y=17.58+6.7\times$). From the above results we concluded that the measurement of serum Osteocalcin and 24hr $^{99m}Tc-MDP$ uptakes can be used for evaluation of bone turnover as a specific marker in hyperthyroid patients.
Myogenic satellite cells have been isolated and identified by several recently elucidated molecular markers. Furthermore, knowledge about the precise function of these markers has provided insight into the early and terminal events of satellite cells during proliferation, differentiation, transdifferentiation, specification and activation. Recently, quiescent myogenic satellite cells have been associated with possession of Pax 3 and 7 that represent pluripotent stem cells capable of differentiating into other lineages. However, the mechanism by which myogenic satellite cells attain pluripotent potential remain elusive. Later, transdifferentiating ability of these cells to another lineage in the absence or presence of certain growth factor/ or agents has revolutionized the scope of these pluripotent myogenic satellite cells for manipulation of animal production (in terms of quality and quantity of muscle protein) and health (in terms of repair of skeletal muscle, cartilage or bone).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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