흰굳음병균(B. basiana)을 이용하여 백강잠의 대량생산과 효과적인 사상균 살충제 개발을 위해, 사상균의 대량배양 체계에 있어서 접종원인 단균사의 대량 확보에 필수적인 1차 액제배지를 개발하였다. 농가부산물인 저가의 밀기울을 탄소원으로, 질소원으로는 대두박을 선발하고, 이들의 조성비와 농도에 따른 밀기울·대두박 배지에서 단균사의 성장을 조사한 결과, 밀기울과 대두박을 3:2의 비율로 최종배지 농도가 5%되게 조성하였을 때, 배양 4일째 배지 ml당 약 7.6X108개의 단균사를 얻을 수 있어, 단균사의 성장과 경제성면에서 가장 효과적이었다.
The principal objective of this study was to determine the optimal liquid culture conditions in shake flasks for maximal sporulation of Beauveria bassiana. The optimal initial pH for the spore production of B. bassiana using Potato Dextrose Broth was 5.2. The screening in shake flasks of carbon and nitrogen sources resulted in the identification of an optimal medium based on 3% sucrose and 1% casamino acid, with a C : N ratio of 22 : 4. Using this medium, a production level of $5.65{\times}10^7$ spores per ml was obtained after 5 days of culture. Using 3% corn meal, 2% corn steep powder, and 2% rice bran, the maximum spore concentration of $8.54{\times}10^8$/ml was achieved 8 days after inoculation at $25^{\circ}C$ in a rotary shaking incubator operated at 200 rpm. This represents a yield gain of approximately 2.89 times that of pre-optimization.
The growing behavior of Candida albicans in various concentration of glucose and corticosteroid media was studied with the method of modified hanging slide culture. The strains of Candida albicans used in this study were obtained from vaginal swab from outpatients and were isolated from cultured colonies on Sabouraud's glucose agar media. To detect the budding rate of blastospore, the diluted suspension of Candida albicans in normal saline were inoculated into various concentration of glucose (Gl, G2, G3, G4), corticosteroid (S1, S2, S3, S4) and corticosteroid with 10% pepton broth (D1, D2, D3, D4) respectively and cultured at room temperature $(22{\sim}25^{\circ}C)$. The number of budding of blastospore were counted under the high power field of light microscope (400X) at specific time interval, e.g, 1, 2, 3, 6, 9, 12, 18, and 24 hours after inoculation. The results are as following: 1. The most effective budding rate was seen in G4 media (1.25% glucose) in 18 hours aft inoculation (89%). 2. The budding rate in Sabouraud's glucose broth with various concentration of dexamethasone added, was not significantly different from that of simple Sabouraud's glucose broth within 18 hours after inoculation, but there was statistically. significant difference in two budding rate at 24 hours observation. 3. The budding rate in 10% pepton broth media with various concentration of dexamethasone was almost same budding rate in control group, which is normal saline and 10% pepton broth, except on 2 and 24 hours results.
1차 액체배양액과 2차 pellet 배지로 이루어지는 대량배양체계의 다른 곤충병원성 곰팡이인 Beauveria bassiana, Beauveria brongniartii, Metarhizum anisopliae, Verticillium lecanii 등에 대한 효용성을 조사하기 위하여 단균사 및 분생포자의 성장율을 비교하였다. 그 결과, 액체배양액에서 단균사의 성장율은 접종 후 72시간에 그 수가 최초 접종수에 비해 103-104배까지 증가함을 확인할 수 있었으며, pellet 배지에서 분생자의 수는 접종 후 3주 째에 103배까지 증가됨을 확인할 수 있었다. 본 실험의 결과 진균의 대량배양을 위해 선발된 1차 액체배양액과 2차 pellet 배지는 여러 곤충병원성 진균의 성장에 효율적인 체계임을 확인할 수 있었다.
Kim, Jae-Su;Roh, Jong-Yul;Choi, Jae-Young;Shin, Sang-Chul;Jeon, Mun-Jang;Je, Yeon-Ho
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제17권2호
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pp.181-187
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2008
An entomopathogenic fungus, Paecilomyces fumosoroceus SFP-198 was isolated in Kyungbuk province, Korea and screened out for the control of Trialeurodes vaporariorum nymphs. It showed 72.5% efficacy against second instars of T. vaporariorum nymphs at 6 days after treatment in the laboratory. To select an active ingredient for the mass production and the formulation, SFP-198 culture products were compared based on their insecticidal activities against T. vaporariorum nymphs. Among them, conidia and blastospores showed much higher insecticidal activity than supernatants. Furthermore, SFP-198 conidia were more heat-resistant than blastospores, and also powder form of conidia was more stable than their suspension form. SFP-198 conidia showed high pathogenicity on not only T. vaporariorum but also Tetranychus urticae in the glasshouse. This result suggested that SFP-198 conidia can be used as a multi-targeting biological control agent against sucking agri- cultural pests, such as whiteflies and mites.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제35권1호
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pp.58-62
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2017
The two-spotted spider mite (Tetranychus urticae) has sustained damage on more than 200 host plants worldwide. Many farmers have relied on chemical acaricides to control mite, but the abuse of acaricides has caused serious resistance to mite. To overcome this problem, microbial control using entomopathogenic fungi have been studied. Entomopathogenic fungi have been an important role against the control of pest, and most of their culture products have been demonstrated to have virulence against pest population. In this study, we evaluated and compared the virulence of culture filtrates, aerial conidia and blastospores of selected Metarhizium anisopliae 4-2 and Beauveria bassiana 2R-3-3-1, respectively, among two-spotted spider mite-pathogenic fungi. As a result, the virulence was confirmed in all treatments, and the accumulated mortality rates were between 77 and 100% within 7 days. Especially, treatment with the fungal culture filtrate alone exhibited quite high virulence, and combined treatment with aerial conidia or blastospores enhanced activity. However, the median lethal time of treatments was not significantly different. When two isolates were compared, M. anisopliae 4-2 showed higher virulence than B. bassiana 2R-3-3-1. These results suggest that the selected two fungal isolates and their culture products could be used effectively for the control of two-spotted spider mite.
점박이응애와 복숭아혹진딧물 그리고 잿빛곰팡이병균에 대해 우수한 살충 및 항균활성을 지닌 4가지 곤충병원성 곰팡이에 대해 효율적인 배양 배지 선발 및 다른 식물병원균에 대한 항균활성을 검정하였다. 효율적인 배지 선발은 출아포자 생산량과 배양액의 항진균활성 검정을 통해 선발하였으며, 그 결과 Beauveria bassiana 2R-3-3-1, Metarhizium anisopliae 4-2, SD3의 경우 GY배지가, B. bassiana SD15의 경우에는 PDB 배지가 적절한 배지로 선발되었다. 다른 식물병원균에 대한 항균활성 검정 결과, 4개 균주 모두 Colletotrichum acutatum과 Sclerotinia sclerotiorum에 대해서는 항진균 활성을 보였으나, Phytophthora capsici와 Colletotrichum fructicola에 대해서는 M. anisopliae SD3만 P. capsici에 대해 높은 항진균 활성을 나타내었고 다른 균주들의 활성은 미미하였다. Clavibacter michiganensissubsp. michiganensis에 대한 항세균 활성은 Metarhizium속의 2균주는 높은 활성을 보였으나 Beauveria속의 2 균주들은 활성을 보이지 않았다. 이상의 결과로 해충방제에 효과적인 곤충병원성 곰팡이가 다양한 식물병원균에 대해서도 효과적인 방제제로 이용될 수 있음을 확인할 수 있었다.
곤충병원성 진균은 다양한 흡즙형 및 저작형 해충 방제에 적용이 가능하며, 익충과 천적에 낮은 영향을 보여, 화학농약의 대체체로서 관심이 높아지고 있다. 현재까지 전세계적으로 170여개의 제품들이 등록되어 판매되고 있으며, 최근 연구측면에서는 작용기작 및 곤충-진균 상호작용체 구명에 집중하고 있다. 해충 방제를 위한 곤충병원성 진균의 산업화 연구는 초기 살충성이 높은 균주 선발에 집중하였으나, 최근에는 환경 스트레스 인자에 대한 저항성 확보를 포함한 생산성 향상이 해결해야 할 주요 과제이다. 분생포자(conidia)가 주된 처리 형태였지만, 액체배양을 통해 생산되는 아포자(blastospore)의 한계점을 극복하여 대량생산의 경제성을 확보하려는 노력들도 진행되고 있다. 추가로 살충효과를 향상시키기 위해, 형질전환을 비롯한 분자생물학적 연구와 유전자 및 유전체 기능 구명에 집중하고 있다. 해충방제 시장측면에서, 글로벌 작물보호제 기업들은 인수합병 또는 공동 연구개발 형태로 전문 생물농약 기업들과의 협력체계를 구축하고 있으며, 화학농약과 곤충병원성 진균의 tank-mix 전략을 주된 방향성으로 삼고 있다. 현장에서 곤충 생태에 대한 이해를 기반으로 한 생태학적 처리(ecological application)는 곤충병원성 진균의 살충효과를 향상시킬 수 있는 기회가 된다. 앞으로의 디지털팜(digital farming) 기술과 접목된다면, 지상부 해충 방제를 위한 실질적인 적용도 가능하다. 곤충병원성 진균의 산업화를 위해서는 지적재산권 분쟁 해결을 위한 명확한 비교 연구자료 확보도 필요하다. 이와 같은 곤충병원성 진균이 식량생산의 안전성과 경제성을 확보하는 중요한 미생물자원으로 활발히 활용되고 개발되길 기대한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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