This paper presents a basic concept of lab-on-a-chip systems and their advantages in chemical and biological analyses. In addition, magnetic bead-based immunoassay on a microfluidic system is also presented as a typical example of lab-on-chip systems. Rapid and low volume immunoassays have been successfully achieved on the demonstrated lab-on-a-chip using magnetic beads, which are used as both immobilization surfaces and bio-molecule carriers. Total time required for an immunoassay was less than 20 minutes including sample incubation time, and sample volume wasted was less than $50{\mu}l$ during five repeated assays. Lab-on-a-chip is becoming a revolutionary tool for many different applications in chemical and biological analysis due to its fascinating advantages (fast and low cost) over conventional chemical or biological laboratories. Furthermore, simplicity of lab-on-a-chip systems will enable self-testing capability for patients or health consumers overcoming space limitation.
In this study, we have described a method for the fabrication of a protein chip on silicon substrate using hydrophobic thin film and microfluidic channels, for the simultaneous detection of multiple targets in samples. The use of hydrophobic thin film provides for a physical, chemical, and biological barrier for protein patterning. The microfluidic channels create four protein patterned strips on the silicon surfaces with a high signal-to-noise ratio. The feasibility of the protein chips was determined in order to discriminate between each protein interaction in a mixture sample that included biotin, ovalbumin, hepatitis B antigen, and hepatitis C antigen. In the fabrication of the multiplexed assay system, the utilization of the hydrophobic thin film and the microfluidic networks constitutes a more convenient method for the development of biosensors or biochips. This technique may be applicable to the simultaneous evaluation of multiple protein-protein interactions.
Nara Shin;Jinok Oh;Suwon Kim;Yeda Lee;Yuni Shin;Suhye Choi;Shashi Kant Bhatia;Yung-Hun Yang
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.34
no.7
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pp.1530-1543
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2024
With an increase in the commercialization of bioplastics, the importance of screening for plastic-degrading strains and microbes has emerged. Conventional methods for screening such strains are time-consuming and labor-intensive. Therefore, we suggest a method for quickly and effectively screening plastic-degrading microbial strains through dual esterase assays for soil and isolated strains, using p-nitrophenyl alkanoates as substrates. To select microbe-abundant soil, the total amount of phospholipid fatty acids (PLFAs) included in each soil sample was analyzed, and esterase assays were performed for each soil sample to compare the esterase activity of each soil. In addition, by analyzing the correlation coefficients and sensitivity between the amount of PLFAs and the degree of esterase activity according to the substrate, it was confirmed that substrate pNP-C2 is the most useful index for soil containing several microbes having esterase activity. In addition, esterase assays of the isolated strains allowed us to select the most active strain as the degrading strain, and 16S rRNA results confirmed that it was Bacillus sp. N04 showed the highest degradation activity for polybutylene succinate (PBS) as measured in liquid culture for 7 days, with a degradation yield of 99%. Furthermore, Bacillus sp. N04 showed degradation activity against various bioplastics. We propose the dual application of p-nitrophenyl alkanoates as an efficient method to first select the appropriate soil and then to screen for plastic-degrading strains in it, and conclude that pNP-C2 in particular, is a useful indicator.
The separation of X and Y chromosome-bearing sperm is of use in many aspects of livestock maintenance. In this study, we sought to determine the difference in DNA content between X- and Y-bearing sperm, separate sperm into X- and Y-enriched pools, and assess the efficacy of sorting. Sperm collected from Duroc and miniature pigs were stained with 20.8 $\mu{M}$ Hoechst 33342 and analyzed using a high-speed cell sorter. Measurement of the fluorescence intensity of stained sperm nuclei revealed that the X-bearing sperm of Duroc and miniature pigs respectively contain 2.75% and 2.88% more DNA than Y-bearing sperm. In total, 50.18% of the sperm were assigned to the X-sorted sample and 49.82% was assigned to the Y-sorted sample for Duroc pigs. For miniature pigs, the Xsorted sample represented 50.19% of the population and the Y-sorted represented 49.81% of the population. Duplex PCR was used to evaluate accuracy of sorting. A fast and reliable method for porcine sexing was developed through amplification of the sex-determining region of the Y chromosome gene (SRY). Oligonucleotide primers were designed to amplify the conserved porcine SRY high motility group (HMG) box sequence motif. We found that the primer pair designed in this study was 1.46 times more specific than previously reported primers. Thus, this study shows that the present method can be applied in porcine breeding programs to facilitate manipulation of the sex ratio of offspring and to achieve precise sexing of porcine offspring by amplification of the HMG box of the SRY gene.
This study was conducted to evaluate the estrogen activity of silkworm (Bombyx mori) pupa extracts and their fractions. Powdered samples of freeze-dried silkworm pupa were extracted at room temperature (RT), $40^{\circ}C$, $60^{\circ}C$, $80^{\circ}C$, and $100^{\circ}C$ in water (D.W), chloroform, ethyl acetate, and methanol for 6h and then filtered (0.45 um). The extracts were then freeze-dried. The estrogenic activity of these extracts was then investigated by competition binding assays using estrogen receptor ${\alpha}\;(ER{\alpha})$ and $ER{\beta}$, and by evaluating their effects on the proliferation of the human breast cancer cell line, MCF-7. Among the extracts evaluated, water extracts prepared at RT showed the highest binding affinity to $ER{\alpha}$ ($IC_{50}$, 1.76 ug/ml) and $ER{\beta}$ ($IC_{50}$, 0.07 ug/ml). In addition, MCF-7 cells that were treated with 62.5 ug/ml of the RT extract showed the greatest increase in proliferation (2-fold; 1291.79%) when compared to control cells (659.82%). Next, the water extract that was prepared at RT (sample 1) was dissolved in D.W. and further fractionated using a Dowex 50W - 8X ($H^+$) column. The flow-through and wash were then pooled together and freeze-dried (sample 2). The bound materials were then eluted with 20 mM NaCl, after which they were applied to a Dowex 1X2 - 200 ($Cl^-$) column and washed with D.W. to remove the sodium ions. The eluants were then freeze-dried (sample 3). Of these fractions, sample 2 showed the highest binding affinity to ER{\alpha} ($IC_{50}$, 1.44 ug/ml) and $ER{\beta}$ ($IC_{50}$, 1.18 ug/ml). In addition, MCF-7 cells that were treated with sample 2 (15.6 ug/ml) showed the largest increase in growth (1159.39%) when compared to control cells (525.26%). Taken together, these results suggest that the fraction of the RT water extract of silkworm pupa referred to as sample 2 may be useful as a phytoestrogen.
The accurate determination of bisphosphonate levels in bone and biological fluids is important in both clinical and pharmacological/toxicological studies; however, the quantitative analysis of the bisphosphonate is difficult because its concentration is quite low in most of biological sample. A novel fluorescent chemosensor (FCS)-based measurement method of bisphosphaonate levels using Naphta-diDPA-$2Zn^{2+}$ (NadDPA-$2Zn^{2+}$, DPA = dipycolylamine), an excellent FCS previously used for detecting PPi, was developed. By the FCS method, the concentration of bisphosphonates having no fluorophores can be determined analyzed with sufficient sensitivity. The results of this study indicate that the FCS-based measurement can be a useful method to analyze bisphosphonates in biological samples.
Kim, Hyun Young;Seo, Hye-Young;Seo, Woo Duck;Lee, Mi Ja;Ham, Hyeonmi
The Korean Journal of Food And Nutrition
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v.32
no.6
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pp.636-642
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2019
The purpose of this study was to examine biological activities, including total contents of polyphenol, antioxidant activities, inhibitory activities of tyrosinase, and protective effect against oxidative stress in the HepG2 cells of ethanol extracts from wheat sprout. The antioxidant activity of extracts was determined by ABTS and DPPH radical scavenging activities. Ethanol extracts were tested using different ethanol concentrations (0%, 30%, 50%, 80% and 95%, respectively). The highest amount of total polyphenol was extracted by 50% and 80% ethanol which was 26.3 and 26.8 mg gallic acid equivalents/g sample, respectively. High levels of ABTS and DPPH radical scavenging activity were found in 50% ethanol (26.7 and 15.0 mg TEAC/g sample, respectively) and 80% (24.3 and 16.1 mg TEAC/g sample, respectively) ethanol extracts. Also, 50% and 80% ethanol extracts indicated higher inhibitory activities of tyrosinase compared with other extracts. In the cell-based assay, pre-treatment of the HepG2 cells with wheat sprout extracts prevented the cell damage induced by TBHP (tert-butyl hydroperoxide). The results of this study indicate that wheat sprout has significantly higher diverse biological activities and apparently has significant health benefits.
Hypocreales is one of the largest orders within the class Sordariomycetes in Ascomycota. Several species of this order are cosmopolitan and have a broad range of habitats. Here, we isolated several fungal strains from environmental samples, including freshwater sediment and plant litter. The strains were identified via molecular and phylogenetic analyses of rDNA and other DNA markers, such as TUB, RPB2, and EF1. The morphological characteristics of the fungi were investigated using microscopy, and culture characteristics were assessed from their growth on several media. We identified 17 species previously unrecorded in Korea: Dactylonectria hordeicola, Flavocillium bifurcatum, Fusarium luffae, Ilyonectria ilicicola, Ilyonectria qitaiheensis, Ilyonectria robusta, Lecanicillium aphanocladii, Nectria ulmicola, Neonectria lugdunensis, Ovicillium oosporum, Pseudonectria foliicola, Sarocladium spinificis, Scolecofusarium ciliatum, Trichoderma appalachiense, Trichoderma subviride, Trichoderma taiwanense, and Trichoderma tsugarense.
Yayota, M.;Kouketsu, T.;Karashima, J.;Nakano, M.;Ohtani, S.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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v.22
no.12
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pp.1620-1624
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2009
This study aimed to clarify the effect of mobile bag size and ratio of sample size to bag surface area on intestinal digestibility of forage in sheep. Four Suffolk ewes fitted with ruminal and proximal duodenal cannulae were fed second-cut Italian ryegrass (Lolium multiflorum Lam.) hay twice daily, and the same forage was used to measure intestinal digestibility. The forage samples were incubated in the rumen for 16 h and then in pepsin-HCl solution for 3 h before intestinal incubation. The incubated forage samples were placed in a nylon mobile bag. The bag sizes used were either 20 mm${\times}$20 mm (small bag size; SBS) or 30 mm${\times}$30 mm (large bag size; LBS) and the ratio of the sample size to the surface area of the bag was either 5.5 $mg/cm^{2}$ (low ratio; LR) or 11.0 $mg/cm^{2}$ (high ratio; HR) resulting in four different treatment conditions: SBS-LR, SBS-HR, LBS-LR and LBS-HR. Eight bags per animal were inserted through the duodenal cannulae at 15-min intervals and were subsequently collected from the feces of the animal. The mean intestinal bag transition time did not differ significantly between animals, but ranged from 23.2 to 27.0 h. The intestinal digestibility of dry matter (IDDM) ranged from 0.162${\pm}$0.019 g/g in the SBS-HR treatment group to 0.195${\pm}$0.018 g/g in the SBS-LR treatment. The intestinal digestibility of crude protein (IDCP) ranged from 0.610${\pm}$0.031 g/g in the LBS-LR treatment to 0.693${\pm}$0.018 g/g in the SBS-LR treatment. There was no difference in the IDDM and IDCP between different treatments. It was therefore concluded that the size of the mobile bag and the ratio of the sample size to the bag surface area did not influence the intestinal digestibility of forage. Future studies should use bags with high ratios of sample size to surface area in order to obtain sufficient residue for further analysis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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