• 대한약리학회지
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• 제25권1호
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• pp.75-85
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• 1989

면역 보체가 결합되어 있는 zymosan에 의하여 활성화된 다형핵 백혈구에서 세포 투과성 물질인 N-ethylmaleiamide과 $Hg^{++}$은 superoxide 라디칼 생성, NADPH oxidase 활성도 및 lysosomal enzyme (lactic dehydrogenase, ${\beta}-glucuronidase$)의 유리를 억제하였다. 세포막 단백에 특이적인 p-chloromercuribenzoic acid와 p-chloromercuribenzenesulfonic acid는 superoxide 라디칼 생성에 영향을 주지 않았으나 NADPH oxidase 활성도와 lysosomal enzyme의 유리를 억제하였다. 식작용 중에 세포막과 세포내의 sulfhydryl기는 반응시간에 따라 점진적으로 감소하였다. N-ethylmaleiamide와 $Hg^{++}$은 세포막과 세포내의 sulfhydryl기를 모두 감소시켰다. P-Chloromercuribenzoic acid와 p-chloromercuribenzenesulfonic acid는 세포막의 sulfhydryl기를 유의하게 감소시켰으나 세포내 용해성 sulfhydryl기에는 영향을 주지않았다. Cysteine과 mercaptopropionylglycine는 superoxide 라디칼의 생성과 lysosomal enzyme의 유리를 억제하였다. Gluthathione은 superoxide생성에 영향을 주지 않았으나 뚜렷하게 lactic dehydrogenase의 유리를 억제하였다. N-ethylmaleiamide에 의한 superoxide 생성의 억제는 cysteine과 mercaptopropionyl-glycine에 의하여 반전되었으나 gluthathione의 영향은 없었다. N-ethylamleiamide에 의한 NADPH oxidase의 비활성화는 gluthathione, cysteine과 mercaptopropionylglycine에 의하여 저해되었다. Carbachol에 의하여 항진된 superoxide 라디칼 생성은 N-ethylamleiamide에 의하여 완전히 억제되었고, atropine에 의하여 길항되었다. 그러므로, 외부 자극에 대한 다형핵 백혈구 반응의 표현은 sulfhydryl기의 양의 변화와 연관이 있을 것으로 시사되었다. Lysosomal enzyme 유리는 세포막과 세포내의 sulfhydryl기에 의하여, 이에 반하여 superoxide생성은 세포내 sulfhydryl기에 의해서 영향받을 것으로 추정되었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제42권4호
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• pp.356-363
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• 2015

나무의 유전 공학적 연구를 위해서는 목본 고유의 유전자 및 프로모터 연구가 필수적이다. 우리는 포플러(P. alba ${\times}$ P. glandulosa)의 Pagns-LTP 유전자의 867 bp 프로모터를 분리하였고, ${\beta}$-glucuronidase (GUS) reporter 유전자를 이용한 프로모터의 형질전환 포플러를 제작하여 특성 분석하였다. Pagns-LTP 유전자는 어린뿌리에서 강하게 발현되었고 어린잎에서는 약하게 발현되었으며, 그밖에 다른 조직에서는 발현되지 않았다. 또한, 프로모터의 활성은 뿌리와 어린잎에서 한정되었으며 어린뿌리의 세포 전체에서 강한 활성을 나타내었다. 이에 포플러 ns-LTP 프로모터 내의 cis-element를 조사하고 현사시나무에서 Pagns-LTP 프로모터를 분리한 후 활성을 분석하였다. 프로모터 내의 cis-element를 분석한 결과, 조직 특이적 발현과 호르몬 및 스트레스에 반응하는 다양한 cis-element가 존재함을 확인하였다. 이를 통해 포플러의 ns-LTP는 생장뿐만 아니라, 스트레스에도 관여할 것이라고 추측할 수 있었다. 본 연구는 목본의 유전자 기능 분석 및 다양한 응용 연구를 위해 유용하게 이용될 수 있는 도구로서의 가능성을 제시하였다.

• 한국균학회지
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• 제16권1호
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• pp.21-25
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• 1988

원형질체융합(原形質體融合)에 의한 영지(靈芝)의 육종(育種)을 위(爲)하여 기초자료를 얻고자 원형질체(原形質體)의 이출(裡出) 및 환원(還元)에 관한 실험결과(實驗結果)는 다음과 같다. 1. 원형질체이출(原形質體裡出)은 영지(靈芝)에서는 0.6M sucrose에 Novozym 234 $10mg{\cdot}ml^{-1}$를 단용(單用)하여 5시간(時間)정도 처리(處理)하고 4일간(日間) 배양(培養)한 균사체(菌絲體)를 사용(使用)하는 것이 좋았으며, G. sp.는 4일간(日間) 배양(培養)한 균사체(菌絲體)를 사용(使用)하고 0.6M sucrose에 Novozym 234와 ${\beta}-glucuronidase$를 각각 $10mg{\cdot}ml^{-1}$로 혼용(混用)하는 것이 좋았다. 2. 원형질체환원(原形質體還元)은 G. lucidum에서 0.6M sucrose를 첨가(添加)한 MCM에서 가장 양호(良好)하였으며, G. sp.에서는 0.6M sucrose를 첨가(添加)한 SCM에서 가장 효과적(效果的)이었다. 영지(靈芝)와 황지(黃芝)는 20% 이상(以上)의 무척 높은 환원률(還元率)을 보였다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제37권3호
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• pp.319-326
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• 2010

화석에너지의 고갈과 지구 온난화 현상으로 인해 재생 가능한 식물자원으로부터 바이오에너지를 얻고자 하는 관심이 높아지고 있다. 이에 바이오디젤의 원료로 사용 되기 적합한 형질전환이 된 유채를 개발하기 위한 첫 단계로 한국 고유 유채 품종을 이용한 형질전환 체계를 구축하였다. 내한, 영산, 탐미, 한라 유채의 종자를 분양 받아 지방산 분석을 실시한 결과, 종자의 약 32-40% 식물성 오일이 포함되어 있었고, 그 중 올레인산의 함량은 60mole% 이상 존재하는 것으로 확인되었다. 그 중 오일 함량 및 올레인산 함량이 높고, 형질전환 효율이 비교적 높은 한라 유채품종이 그리고 $\beta$-glucuronidase (GUS)와 phosphinothricin acetyltransferase (PAT) 유전자가 포함된 pCAM-BIA3301 벡터가 도입된 Agrobacterium tumefaciens GV3101균주가 형질전환에 사용되었다. 형질전환이 된 유채 식물체는 제초제에 대한 내성, PCR을 이용한 PAT 유전자의 도입 여부 및 GUS 활성 분석을 통하여 선별하였다. 그 결과 한라 유채의 경우, 10. 4% 형질전환 효율을 보였고, 제초제 저항성이 다음 세대 ($T_1$ 식물체)로 안정되게 유전됨을 확인하였다. 이러한 연구는 바이오디젤 원료로 사용될 다양한 유채 품종에 교배를 통해 제초제 저항성 유전자를 쉽게 도입할 수 있는 가능성을 제시하였다.

• 대한약리학회지
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• 제28권1호
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• pp.91-102
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• 1992

칼슘을 함유하는 반응액에서 arachidonic acid는 뚜렷하게 superoxide와 $H_2O_2$의 생성을 자극하였고 NADPH oxidase를 활성화하였다. 칼슘이 없는 반응액에서 NADPH oxidase에 대한 arachidonic acid의 자극 작용은 나타나지 않았다. Arachidonic acid에 의하여 자극된 respiratory burst는 EGTA, TMB-8, verapamil, diltiazem, nifedipine, dibucaine, lidocaine, CCCP, 2,4-dinitrophenol, sodium arsenate, chlorpromazine, theophylline, $HgCl_2$, PCMB와 PCMBSA에 의하여 억제되었으나, tetrodotoxin, tetraethyl ammonium chloride와 procaine의 영향은 받지 않았다. EGTA는 거의 완전히 arachidonic acid에 의한 ${\beta}-glucuronidase$의 유리를 억제하였으며, verapamil, CCCP와 theophylline은 약간 억제하였으나, 이에 반하여 dibucaine은 유의한 효과를 나타내지 않았다. Arachidonic acid는 중성호성 백혈구로 부터 칼슘을 유리시켰으며, 이는 TMB-8에 의하여 감소되었다. Arachidonic acid에 의한 세포내 유리 칼슘 농도의 상승은 EGTA와 CCCP에 의하여 억제되었고 TMB-8에 의하여 약간 억제되었다. Arachidonic acid와 verapamil 또는 arachidonic acid와 dibucaine의 동시 첨가에 의하여 상승된 세포내 유리 칼슘 농도의 양은 arachidonic acid 단독에 의한 것보다 현저하였다. 이상의 결과로 부터 다양한 생화학적 변화가 arachidonic acid에 의하여 활성화된 중성호성 백혈구의 기능 표현에 관여할 것으로 시사된다. Arachidonic acid는 세포내 칼슘 저장고로부터 칼슘유리를 자극하여 세포내 유리 칼슘 농도를 상승시킬 것으로 추정된다. 중성호성 백혈구의 활성화증에 칼슘 유입과 유출은 동시에 이루어질 것으로 추정된다.

• 한국균학회지
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• 제15권2호
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• pp.80-86
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• 1987

자연계에서 섬유소분해능이 우수한 균을 분리하였고 섬유소분해능을 더욱 증진시키기 위한 기초단계로서 그 분리균주의 원형질체 생성과 융합의 최적조건을 조사하였다. 토양에서 채취한 시료로부터 섬유소분해능력이 우수한 Aspergillus sp., Penicillium sp., Trichoderma sp., 3균주를 분리 동정하였고 산업적으로 유용한 균주이며 cellulase activity가 있는 Aspergillus niger를 비교균주로 선택하여 각각의 효소활성도를 비교 조사한 결과, Aspergillus sp.가 가장 좋은 효소활성도를 보였으며 그 다음 Penicillium sp., Trichoderma sp., 그리고 Aspergillus niger 순이었다. 효소활성도가 가장 좋은 Aspergillus sp.에 자외선$(12erg/sec/mm^2)$을 4 분 30초 동안 조사하여 영양요구성 변이주를 유도, 분리하였다. 세포벽분해효소로는 pH6.0에서 ${\beta}-glucuronidase$가 효과적이었고 그 효소를 농도별로 처리해본 결과 5, 000unit/ml가 최적농도이었다. 재생률은 삼투안정제로 0.6M KCI을 사응하여 pH6.0에서보았을 때 야생형은 7.0%, met. 영양요구주는 7.5%, arg. 영양요구주는 5.2%이있다. 영양요구성변이주간의 원형질체융합에 필요한 PEG는 분자량이 6,000인 것이 좋았으며 최적농도는 $30^{\circ}C$ 이었다. 이때 융합율은 1.2%까지 획득하었다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제26권2호
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• pp.114-119
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• 2011

본 연구에서는 신선편의 채소와 과일에서 주로 검출되는 대장균(E. coli Ol577:H7), 리스테리아(L. monocytogenes), 살모넬라(Salmonella, spp.), 형색포도상구균(S. aureus)을 검출하고 동정할 수 있는 real time PCR 방법을 melting curve 분석을 활용하여 single tube 반응으로 두 종의 식중독균을 동시 검출하는 방법을 개발하고자 하였다. 대장균의 ${\beta}$-glucuronidase (uidA), 황색포도상구균의 thermonuclease (nuc), 리스테리아의 hemolycin (hly), 살모넬라의 tetrahionate reductase (ttr) 를 특이적으로 검출할 수 있는 4종의 프라이머 세트에 대한 real-time PCR의 melting curve 분석을 통하여 황색포도상구균과 대장균 동시분석 시 $T_m$ 값이 $80.6{\pm}0.9^{\circ}C$와 $86.9{\pm}0.5^{\circ}C$, 리스테리아와 살모넬라 동시분석 시 Tm 값이 $80.4{\pm}0.6^{\circ}C$와 $88.1{\pm}0.11^{\circ}C$로 확인하였고, 그 결과 정제되어진 각 식중독균의 genomic DNA를 주형으로 한 duplex real-time PCR 방법이 uniplex real-time PCR 방법과 마찬가지로 10 genome equivalents 까지 검출할 수 있는 민감도를 나타내었다. 또한, 양배추에 네 종의 식중독균을 접종하고, 증균배양 없이 DNA를 추출하여 duplex real-time PCR 을 수행한 결과 모든 식종목균에서 $10^3$ CFU/g의 검출 한계를 나타내었다. 결과적으로 개발된 melting curve 분석을 이용한 duplex real-time PCR 방법은 식품안전 증진을 위한 시간, 노동력, 비용 절감에 있어서 유효한 방법이 될 것으로 판단된다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제29권4호
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• pp.223-228
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• 2002

본 연구실에서 개발된 particle inflow gun (PIG)은 조작이 간편하고, 사용비용도 저렴하며, 식물 세포 내의 유전자 도입효율이 높은 특징을 갖고 있다. PIG 장비를 이용하여 벼 캘러스 내로의 유전자 도입 조건을 검토하기 위해서 사용된 vector는 pIG121Hm으로서 T-DNA 내부에 intron GUS ($\beta$-glucuronidase)와 hygromycin 및 kanamycin 저항성 유전자를 포함하고 있다. 또한 벼 캘러스 내에 물리적으로 DNA를 도입할 때에 DNA 도입 효율과 관계가 높은 요인들을 GUS의 발현빈도를 통하여 조사하였다. 그 결과 gold particle에 DNA를 부착하는 과정에 사용되는 spermidine과 calcium chloride의 경우 무첨가구에 비해 16 mM의 spermidine과 1.5 M의 calcium chloride 첨가구에서 GUS 발현율이 각각 2배, 3배 증가하였다. 그리고 1회 분사되는 gold particles양이 2 mg의 경우 가장 높은 GUS 발현율을 보여주었으며, 또한 PIG장비의 분사거리와 헬륨의 압력은 벼의 배양세포의 경우 12cm의 분사거리에서 3.5 bar (50 psi)의 헬륨압력으로 분사하였을 때 GUS 발현율이 가장 높았다. 이상의 결과에서 PIG 장비를 이용한 유전자 도입은 본 연구에서 검토한 최적의 조건을 이용하였을 경우 기존에 많이 사용되고 있는 Biolistic Gun (Bio-Rad 사)과 거의 비슷한 유전자 도입효율을 보여 주었다. 특히 PIG 장비의 경우 조작이 매우 간편하고, 분사에 사용되는 일회용 부품이 필요하지 않기 때문에 대량의 반복실험을 필요로 하는 연구에서 손쉽게 사용되리라 기대된다.

• 한국식품과학회지
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• 제21권1호
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• pp.37-44
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• 1989

Monascus 균주의 적색색소의 최적 생산조건을 규명하기 위하여, Monascus anka IFO 4478과 IFO 6540의 영양요구성 돌연변이주인 M. anka, 4478-27-37 $(Thi^-,\;Met^-),\;4478-27-62\;(Thi^-,\;Arg^-)$와 M. anka, 6540-185-24 $(Pan^-,\;Leu^-)$ 6540-185-72$(Arg^-)$의 균주를 이용하여 세포융합을 시도하였다. Protoplasts의 생성은 chitinase (10mg/ml), cellulase (5mg/ml) 및 ${\beta}-glucuronidase\;(5mg/ml)$의 혼합처리가 효과적이었고, 융합조건은 protoplasts를 30% PEG 6.000, $0.01M-CaCl_2$ 및 0.05M-glycine, pH 6.0으로 처리했을 때 융합빈도는 0.7%-0.85%이였다. 융합주 중에서 No. 14와 42의 색소 생산능이 가장 높았다.

• 사상체질의학회지
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• 제17권1호
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• pp.130-141
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• 2005

1. Objectives The present study was carried out to investigate the effects of Chungpyesagan-tang on the $CCI_4-induced$ Liver Damage in Rats. 2. Methods Sprague-Dawley rats were devided into 5 experimental groups : Normal, $NS+CCI_4(Solid$ extract of $CCI_4$ injection group after Normal Saline feed), $CP+CCI_4(Solid$ extract of $CCI_4$ injection group after Chungpyesagantang feed), $CCI_4+NS(Nomal$ Saline feed group after $CCI_4$ injection), $CCI_4+CP(Solid$ extract of Chungpyesagantang feed group after $CCI_4$ injection). Biochemical assays for serum enzyme activities such as AST, ALT, ALP, BUN, Creatinine, Uric Acid, Total Protein, Albumin, Total Cholesterol, Triglyceride, Glucose, and mRNA Revelation of Cytochrome p450 and activities such as LPO(Lipid Peroxidation), GSH(Glutathione), GST(Glutathione-S- Transferase), Glutathione Reductase, Glutathione Peroxidase, SOD(Superoxide Dismutase), Catalase, Hydroxyproline, and ${\beta}-Glucuronidase$ were performed. 3. Results 1) $CP+CCI_4$ showed significantly lower relation of Cytochrome p450 than $NS+CCI_4$. 2) As to LPO Hydroxyproline, $CCI_4+CP$ showed significantly lower activity than $CCI_4+NS$. 3) As to GSH GST Glutathione Peroxidase Catalase, $CP+CCI_4$ showed higher activity than $NS+CCI_4$, $CCI_4+CP$ showed significantly higher activity than $CCI_4+NS$. 4) As to Glutathione Reductase SOD, $CCI_4+CP$ showed significantly higher activity than $CCI_4+NS$. 5) As to ${\beta}-Glucuronidase$, $CP+CCI_4$ showed signficantly lower activity than $NS+CCI_4$. 4. Conclusions Chungpyesagantang has the recovering effects on the $CCI_4-induced$ Liver Damage.