야생형(野生形)인 만가닥버섯 Lyophyllum ulmarium(=Hypsizigus marmoreus) ASI 8007에서 분리한 분열자(分裂子)와 잔나비걸상버섯 영양요구주 Ganoderma applanatum ASI 7-18 (cys met)의 원형질체(原形質體)를 polyethylene glycol로 융합(融合)하여 융합주를 얻었다. 융합주는 GCM(Ganoderma complete modium)에서 양친균총이 혼합된 형태였으나 3회 계대 배양되면서 만가닥버섯 균총으로 변하여 균사에는 클램프연결체와 분열자를 지녔고, 만가닥과 거의 유사한 자실체를 형성하였다. 균사체로 esterase 동위효소(同位酵素)를 분석하였는데 만가닥이 1개 밴드, 잔나비걸상이 2개의 밴드를 가진데 비하여 융합주는 양친의 3개와 새로운 2개의 밴드를 나타내었다. 이들 융합주 상호간에는 균총형태, 생장속도, esterase 동위효소, 자실체 특성에 있어서 거의 차이가 없어 아주 안정되게 양친의 유전물질을 보유하였다.
2006년 7월25일 국립공원 계룡산 상신리 지역의 활엽수림에서 채집한 무당버섯인 R. eburneoareolata Hongo의 형태학적 특징 및 생태학적 특성을 기초로 하여 상아무당버섯으로 명명하였다. 본 종의 자실체는 중형이며, 갓은 4-9 cm의 크기이며 성숙하면 표면이 갈라져 상아색 돌기 모양이 나타난다. 주름살은 조밀하며 짙은 크림색이며 자루는 길이가 3-6 cm, 두께가 12-20mm 정도이다. 포자는 타원형이며 표면에 사마귀모양의 돌기가 가는 띠로 연결되어 분포한다. 크기는 $7-8{\times}6-7\;{\mu}m$이다. 담자기는 크기가 $35-40{\times}10-11\;{\mu}m$ 정도이며 4개의 담자포자가 달린다. 낭상체는 반원통형 또는 방망이 모양으로 끝부분이 약간 뾰족하다.
본 실험결과 느타리버섯속에서의 재현성 있는 최적 RAPD 조건은 $50\;{\mu}l$ 반응액에서 80 ng template DNA, 30 pmole primer, $200\;{\mu}M$ dNTP, 2 mM $MgCl_2$, 50 mM KCl, 10 mM Tris-HCI(pH 9.0), 0.1% Triton X-100, 1.5 unit Taq polymerase(promega)였다. 여섯 개의 primer가 Pleurotus속 8종의 균주에서 RAPD polymorphism을 보임을 알 수 있었으며, 이들의 염기배열은 PR2(GGG GGG AAG C), PR3(GCG GTT GAG G), PR4(CGC ACC GCA C), PR10(CAA TCG CCG T), PR11(CAG CAC CCA C), PR17(TAG GCG TAT CAG GAG GCC CT)이었다.
사철느타리버섯과 느타리버섯의 영양요구주로 원형질체 융합과정을 관찰하고, 융합에 영향을 미치는 여러 가지 요인을 분석한 결과는 다음과 같다. 원형질체에 polyethylene glycol을 혼합하였을 때 원형질체는 서로 응집되어 원형질막의 접착이 이루어졌으며, 0.6 M sucrose로 PEG를 제거한 후에 두 개 또는 다수의 원형질체가 융합되었다. 원형질체 융합에 크게 영향을 주는 요인은 PEG 농도, pH, 삼투압조정제였으며 원형질체의 농도, PEG 흔합시간, 원형질체 배양온도 및 시간, PEG 분자량, $CA^{2+}$, glycine도 영향을 주었다. 가장 알맞는 조건을 pH 8.0으로 조절된 30% PEG 8000으로 원형질체에 혼합하여 $30^{\circ}C$에서 10분간 배양하고 0.6 M sucrose에 현탁하여 동일한 삼투압조정제가 첨가된 배지에서 배양될 때 가장 많은 융합주를 획득할 수 있었다.
The internal regions of nuclear small subunit rRNA from 6 plaeurotus species and 5 Pleurotus ostreatus strains were amplified by PCR and sequenced. The DNA sequences of 8 Pleurotus strains (P. ostreatus NFFA2, NFFA4501, NFFA4001, KFFA4001, KFCC11635, P florida, P. florida, P. sajor-cuju, P. pulmonarius, and P. spodoleucus) were idential, but P. cornucopiae differed from them in two bases out of 605 bases. However, p[hylogenetic analysis of the sequences by DNA-distance matrix and UPGMA methods showed that P. ostreatus NFFA2m1 and NFFA2m2, known as mutants of P. ostreatus NFFA2, belonged to anther group of Basidiomycotina, which is close to the genus Auricularia. The difference of the SSU rDNA sequences of P. cornucopiae from other Pleurotus species tested corresponds to the difference of mitochondrial plasmid type present in Pleurotus species as observed by Kim et al. (1993, Korean J. Microbiol. 31, 141-147).ishement of silencing at the HMR/hsp82 locus can occur in G1-arrested cells. Cell cycle arrest at G1 phase was achieved by treatment of early log a cell cultures with .alpha.-factor mating pheromone, which induces G1 arrest. The result suggests that passage through S phase (and therefore DNA replication) is nor required for re-establishing silencer-mediated repression at the HMNRa/HSP82 locus. Finally, to test whether de nono protein synthesis is required for re-establishment of silencer-mediated repression, cells were pretreated with cycloheximide (500 /.mu.g/ml) 120 min. It was apparent that inhibiting protein synthesis delays, but does not prevent, re-establishment of silencer-mediated repression. Altogether, these results indicate that re-establishment of silencer-mediated repression is not dependent on the DNA replication and has no requirement for protein synthesis.
2004년 4월부터 2010년 10월까지 내장산 국립공원 고등균류를 조사한 결과는 다음과 같다. 진균문의 담자균아문 48과 158속 451종, 자낭균아문 13과 26속 39종, 점균문 4과 7속 7종이 조사되었으며, 대부분의 고등균류는 담자균아문 중 모균아강에 속하는 것으로 나타났다. 가장 많이 발생된 균류는 송이버섯과로 72종이었으며, 무당버섯과(43종), 구멍장이버섯과(41종), 그물버섯과(40종), 끈적버섯과(35종), 광대버섯과(28종)순이었다. 미기록종이라 판단되는 종은 무당버섯과 1종(Lactarius vietus), 압정버섯과 1종(Ionomidotis frondosa), 트리코코마과 1종(Penicilliopsis clavariaeformis), 망사점균과 1종(Fuligo septica) 등 총 4과 4속 4종이 조사되었다. 서식환경별 분포에서는 외생균근성버섯이 15과 36속 193종(38.8%), 낙엽 및 목재부후균은 36과 107속 196종(39.4%), 지상균은 24과 51속 99종(19.9%) 및 기타 3과 4속 9종(1.8%)인 것으로 나타났다. 월별 분포에서는 7월이 가장 많은 종수가 조사되었고 8월, 9월 순으로 나타났으며, 11월의 분포가 가장 적은 것으로 나타났다. 기후 환경별 요인에 있어 대부분의 고등균류는 평균온도 $23^{\circ}C$이상, 최저온도 $20^{\circ}C$이상, 최고온도 $29^{\circ}C$이상일 때, 상대습도는 73% 이상일 때, 월 강수량는 200 mm 이상일 때 종 발생이 높아지는 것으로 나타났다. 특히, 외생균근성버섯인 광대버섯과, 그물버섯과 및 끈적버섯과 등 외생균근성버섯은 최고온도 $32^{\circ}C$이상에서 유의성이 낮아지는 것으로 나타나 평균온도, 최저온도, 상대습도 및 강수량 등에 비해 종 발생에 많은 영향을 주는 것으로 나타났다.
주름버섯목(目) 느타리버섯과 민주름버섯목(目) 잔나비걸상버섯과의 이목간(異目間) 원형질체(原形質體)를 polyethylene glycol로 유도하여 융합주(融合株) heterokaryon을 선발하였다. 버섯최소배지에서 극히 균사생장이 느렸으며 버섯완전배지에서 3번 계대배양되면서 다소 생장이 빨라졌다. 융합주 36균주의 75%는 양친의 균사가 혼합된 균총형태였으며 16.7%는 새로운 형태, 8.3%는 느타리버섯 형태이었다. 이들 중 양친의 균총(菌叢)이 혼합된 형태는 3번 계대배양 후 모두 느타리버섯 형태로 변하였다. 균사(菌絲)에는 클램프연결체가 없었고 원기(原基)도 형성하지 않았다. 융합주(融合株)를 전기영동법으로 esterase, malate dehydrogenase, peroxidase의 동위효소(同位酵素) 분석(分析)으로 비교하였는데 잔나비걸상버섯 효소는 뚜렷하지 않았으나 새로운 밴드의 형성으로 보아 두 양친 genome간의 상호작용이 존재하였다.
느타리 Pleurotus ostreatus와 여름느타리 Pleurotus sajor-caju의 영양요구주로부터 분리한 원형질체를 polyethylene glycol로 융합하여 종간 이질핵체 heterokaryon를 획득하였다. 불화합 균주간에는 9 융합조합에서 70개 융합주를 획득하여 7 융합주의 자실체를 유도하였으며 화합 균주간에는 1조합에서 모두 자실체를 형성하였다. 화합 균주간 융합주를 제외하고는 불화합성간 융합체는 꺽쇠연결체 clamp connections가 없었고 한천배지나 액체배지에서는 자실체를 형성하지 않았다. 그러나 활엽수톱밥과 미강이 혼합된 배지에서 균사가 완전히 성장한후 일정한 광과 온도를 처리한 결과 꺽쇠연결체 있는 균사가 다시 성장하였으며 이들 균사에서 버섯자실체가 형성되었다. 버섯자실체는 양친의 중간형태로 갓 색깔도 양친이 혼합된 orange grey-brownish grey로 나타났다. 그러나 다소의 자실체 형질인 자실층 hymenium, 버섯대, 생장습성은 느타리를 닮았는데 특히 여름느타리가 단생 closely scattered인데 비해 느타리는 속생 caespitose으로 느타리와 유사하였다. 자실체는 모두 꺽쇠연결체를 가졌으며 조직배앙한 결과 균사가 모두 꺽쇠연결체를 가져 본래 융합주와는 다른 형태로 변하였다. 6융합조합 8균주의 $F^2$에서의 유전형질 분리와 유전자 재조합을 분석한 결과 원영양형 prototroph이 양친 느타리형, 여름느타리형, 영양요구성 유전자 재조합형에 비해 많이 분리되었으며 3개조합에서 양친에 없는 유전자좌가 나타났다. 자실체가 형성되지 않는 융합주 P188과 사철느타리 ASI 2-3-rib와 균사접합 한 후 임성을 유도하여 유전분석한 결과 원영양형이 적게 분리되었고 여름느타리 양친형이 분리되지 않았으며 3친주 형질이 모두 유전자 재조합형으로 분리되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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