During 2002-2008 in Korea, 455 extracts from myxobacteria consisting of 318 cellulolytic and 137 bacteriolytic myxobacteria were isolated, which were then screened for antifungal activity against the phytopathogens Botrytis cinerea, Colletotrichum acutatum, Penicillium sp., Pyricularia grisea, and Phytophthora capsici. 204 isolates had antifungal activity, causing both a clear zone due to blocked spore germination and inhibition of mycelial growth; most (199) were from cellulolytic (Sorangium cellulosum) and only five were from bacteriolytic myxobacteria. B. cinerea, the best controlled among the five tested pathogens, had a unique group of antifungal isolates of myxobacterial extracts compared to the other pathogens' groups. Among seventy-nine bioactive myxobacteria, four isolates, KYC 3130, KYC 3247, KYC 3248 and KYC 3270, were selected and all were cellulolytic. Liquid culture filtrates of these four myxobacteria were applied to tomato, cherry tomato, strawberry, and kiwi fruits 5 h before inoculation with gray mold conidia; then the treated fruits were placed in an airtight container and the experiment was repeated six to eight times. Incidence (%) of gray mold on fruit of the infected control treatment was 84-98%, whereas it was only 5-21% after the KYC 3270 treatment. After KYC 3270 treatment of the four fruits, mold control was 79-95%, which was highest among the filtrates and statistically the same as treatment with fludioxonil, a registered chemical against gray mold of stored fruits.
용균성 야생 점액세균 204균주를 국내 토양으로부터 순수분리하였고, 분리균주의 16S rRNA 부분 염기서열을 결정하였다. Ribosomal Database Project(RDP) II를 이용하여 분리균주 각각의 16S rRNA 염기서열을 분석한 결과 전체 분리균주의 65%를 차지하는 132 균주들이 Myxococcus 속에 속할 것으로 예상되었으며, 29%를 차지하는 59 균주들이 Corallococcus 속, 4 균주가 Archangium 속, 그리고 4 균주가 Stigmatella 속에 속할 것으로 분석되었다. 그리고 나머지 5 균주는 알려진 균주와의 유연관계가 멀어 분류가 확실하지 않았다. 한편, 16S rRNA염기서열의 비교분석은 분리균주의 50%가 16S rRNA부분 염기서열상에 적어도 한 염기 이상의 차이를 지니고 있음을 보여주었다. 하지만 동일한 염기서열을 지니는 것으로 분석된 균주에서도 서로 다른 집락모서리를 형성하는 등 다른 균주로 판명되는 것으로 보아 전체 분리균주는 다양성이 81% 이상인 다양한 균주들인 것으로 사료되었다.
In a previous study, the antimicrobial peptides extracted from Lactobacillus plantarum UTNGt2 of wild-type fruits of Theobroma grandiflorum (Amazon) were characterized. This study aimed to investigate the antimicrobial mechanisms of peptides in vitro and its protective effect on fresh tomatoes. The addition of partially purified Gt2 peptides to the E. coli suspension cells at the exponential ($OD_{605}=0.7$) growth phase resulted in a decrease with 1.67 (log10) order of magnitude compared to the control without peptide. A marginal event (< 1 log10 difference) was recorded against Salmonella, while no effect was observed when combined with EDTA, suggesting that the presence of a chelating agent interfered with the antimicrobial activity. The Gt2 peptides disrupted the membrane of E. coli, causing the release of ${\beta}$-galactosidase and leakage of DNA/RNA molecules followed by cell death, revealing a bacteriolytic mode of action. The tomatoes fruits coated with Gt2 peptides showed growth inhibition of the artificially inoculated Salmonella cocktail, demonstrating their preservative potential.
The study was carried out to investigate the change of bacterial growth in vitro according to polarity, current intensity and time, to prepare the basic data for electrotherapy and clinical research. The Gram positive Staphylococcus aureus and Gram negative Escherichia coli 1mm infect wound were cultured in Trypticase Soy Brath and Trypticase Soy Agar. The results were as followings. 1. The current stimulated group was changed in bacterial growth according to polarity, current intensity and time respectively. 2. The bacteriolytic effect revealed in the anode but the inhibitory effect of bacterial growth revealed in the cathode. 3. The lumber of E. coli reduced after 6-hours but the numbers of S. aureus reduced after 2 hours in Trypticase Soy Brath. 4. The anode showed acid reaction and cathode showed alkaline reaction in Trypticase Soy Agar.
토양 시료와 Coli-spot 한천평판 배지를 이용하여 myxobacteria를 분리하였다. 용균 현상이 관찰되는 Coli-spot 한천평판에서 myxobacteria의 swarm및 자실체 형성 여부를 확인하고, 확인된 자실체를 분리하여 VY/2 한천평판 배지에서 순수배양을 실시하였다. 분리 균주의 동정을 위하여 myxobacteria표준 균주 및 토양에서 분리한 균주들의 16S리보좀 DNA를 중합효소 연쇄 반응을 통해 증폭시킨 다음, 제한효소(HaeIII, EcoRI 및 EcoRV)로 절단하여 RFLP 양상을 비교하였다. 그 결과, 토양에서 분리한 균주들이 Family I, II, III의 myxobacteria에 속하는 것을 확인하였다.
점액세균은 토양에서 식물 병원균의 활성을 억제하는 2차 대사산물들을 분비하는데, 이들은 기존의 길항균들의 항생물질과는 전혀 다른 생리활성물질이므로 생물방제에 활용이 기대되는 미생물이다. 고추 역병 생물학적 방제를 위해 토양 미생물인 점액세균의 길항능력을 기내에서 검정한 후, 자실체 및 액체배양 여액을 엽권과 근권에 처리하여 온실에서 생물 검정하였다. 점액세균 생리활성 물질이 남아있는 PDCY 배지에 역병균을 접종한 결과 점액 세균 Myxococcus spp. 세 균주 중 KYC 1126과 KYC 1136은 균사생장을 완벽히 저해하였다. 토양 내 점액세균 생리활성물질 분비를 극대화하기 위해 기내에서 다량의 자실체 형성을 위해 먹이인 E. coli를 먼저 배양 후 점액세균 KYC 1126을 치상하는 방법을 확립하였다. 이 방법으로 토양에 자실체를 먼저 투입하고 역병을 관주접종한 결과 방제 효과가 없었다. 한편 시험관에서 역병균 유주포자 현탁액과 점액세균 CYE 액체배양여액을 혼합한 후 고추 뿌리에 침지 접종한 결과 역병 발병을 지연시켜 배양여액의 길항능력을 확인하였다. 점액세균 배양여액을 엽권에 살포하거나 근권에 침지한 방제가는 각각 88%와 40%로서 dimethomorph+propineb의 100%와 propamocarb의 44%에 버금가는 결과였다. 배양여액을 기존 처리의 약 2배인 24시간 이상 뿌리에 침지하면 약해가 발생하였는데, 그 증상은 고추 묘에서 줄기가 잘록해지고 잎이 말려 들어가며 점액성의 물질이 뿌리를 덮어 썩는 것이었다. 선발된 점액세균 KYC 1126의 대량 생산 방안이 확보되면, 배양여액을 엽권에 예방적으로 정기 살포함으로써 고추 역병의 생물학적 방제를 달성할 수 있을 것으로 기대된다.
An antimicrobial substance-producing microorganism was isolated from soil samples. Based of the taxonomic characteristics of its morphological, cultural, physiological properties and 16s rRNA sequence alignment, this microorganism was identified as Pseudomonas aeruginosa, and we named Pseudomonas aeruginosa EL-KM. The optimal culture condition for production of antimicrobial substance was 1% mannitol, 0.4% yeast extract, 0.5% Nacl, 0.2% $K_2SO_4$, 100$\mu$M $MgSO_4$.$7H_2O$, 10$\mu$M $CaCl_2$.$2H_2O$, 1$\mu$M $FeSO_4$.$7H_2O$, 1$\mu$M $MnSO_4$.$4-5H_2O$, initial pH 7 and 200 rpm at 3$0^{\circ}C$. The purification of the antimicrbial substance was performed by silica gel column chromatographys, and fraction with TLC $R_f$ 0.77 value represented good antimicrobial activity. The crude antimicrbial substance was stable within a pH range of 3-10 and temperature range of 4$^{\circ}C$-121$^{\circ}C$ autoclaving. This crude antibacterial substance acted as bacteriolytic agent against Vibrio cholerae non-Ol ATCC 25872, and also exhibited excellent properties, when the substance was demonstrated against many other gram-positive, gram-negative bacteria, yeast and fungi.
Wallace, R. John;McEwan, Neil R.;McIntosh, Freda M.;Teferedegne, Belete;Newbold, C. James
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제15권10호
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pp.1458-1468
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2002
There is increasing interest in exploiting natural products as feed additives to solve problems in animal nutrition and livestock production. Essential oils and saponins are two types of plant secondary compounds that hold promise as natural feed additives for ruminants. This paper describes recent advances in research into these additives. The research has generally concentrated on protein metabolism. Dietary essential oils caused rates of NH$_3$ production from amino acids in ruminal fluid taken from sheep and cattle receiving the oils to decrease, yet proteinase and peptidase activities were unchanged. Hyper-ammonia-producing (HAP) bacteria were the most sensitive of ruminal bacteria to essential oils in pure culture. Essential oils also slowed colonisation and digestion of some feedstuffs. Ruminobacter amylophilus may be a key organism in mediating these effects. Saponin-containing plants and their extracts appear to be useful as a means of suppressing the bacteriolytic activity of rumen ciliate protozoa and thereby enhancing total microbial protein flow from the rumen. The effects of some saponins seems to be transient, which may stem from the hydrolysis of saponins to their corresponding sapogenin aglycones, which are much less toxic to protozoa. Saponins also have selective antibacterial effects which may prove useful in, for example, controlling starch digestion. These studies illustrate that plant secondary compounds, of which essential oils and saponins comprise a small proportion, have great potential as 'natural' manipulators of rumen fermentation, to the potential benefit of the farmer and the environment.
A DF01 strain that inhibits tyramine-producing Lactobacillus curvatus KFRI 166 was isolated from Dongchimi, a traditional Korean fermented vegetable, and identified as Lactobacillus brevis by biochemical analysis and reverse transcriptase sequencing of 16S rRNA. The antimicrobial compound produced by L. brevis DF01 was secreted at a maximum level of 640 AU/mL in late exponential phase in MRS broth, and its activity remained constant during stationary phase. The activity of bacteriocin DF01 was totally inactivated by $\alpha$-chymotrypsin, pronase E, proteinase K, trypsin, and $\alpha$-amylase, but not by catalase, which indicates the compound was glycoprotein in nature. The activity was not affected by pH changes ranging from 2 to 12 or heat treatment (60, 80, and $100^{\circ}C$ for 30 min), but was reduced after autoclaving. Bacteriocin DF01 had bacteriolytic activity and a molecular weight of approximately 8.2 kDa, as shown by tricine-SDS-PAGE analysis. Therefore, bacteriocin DF01 can be used in the manufacture of fermented meat products due to its inhibition of tyramine-producing L. curvatus and non-inhibition of L. sake, which is used as a starter culture for meat fermentation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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