Green fluorescent protein (GFP), a very important biological agent that involves shifting the color of bioluminescence from blue to green in luminous coelenterates and to increase the quantum yield of light emission. GFP discovered in medusa, Aequorea victoria is a key factor of various biotechnological and cell biological applications. Beside these applications, GFP of A. victoria is generally stable, which does not require co-factors for activity and can be functionally expressed in different bacterial species. This property of GFPs from A. victoria permits them to be a unique tool to monitor gene expression and protein localization in different organisms. The present review brings out the past milestones and future perspectives on GFPs, with an elaborative reviewing on its applications.
본 연구는 5가지의 발광성 미생물을 이용하여 유해 방사선으로 알려져 있는 ${\gamma}-rays$가 여러가지 cellular stresses 중, 특히 유전자 손상과 생물막 손상을 유발하였는데, 이들의 손상 정도가 총 방사선량과 상관관계가 있음을 발생하는 bioluminescence 로써 확인하였다. 뿐만 아니라, 선량률의 변화를 통하여 방사선으로 인한 유전자 손상 및 일반적인 독성 효과가 큰 영향을 받는 것을 확인하였는데, 선량률 증가에 따라 이들 손상정도가 증가하는 것으로 보아 선량률이 genetic 및 radioprotecion에 심각한 영향을 미치는 것을 확인하였다.
A new assay method of ${\alpha}-Oxidase$ (fatty acid : oxygen dioxygenase, 1-decarboxylating) was developed using a bioluminescence reaction system of marine luminous bacterium, Photobacterium phosphoreum. ${\alpha}$-Oxidase was isolated from a cucumber (Cucumis sativus). Pentadecanoic acid was used as a substrate, and the product, tetradecanal, was analyzed with a bacterial luciferase-coupled reaction. Initial light intensity was directly related to the concentration of tetradecanal in the range of 1 nM to 10 ${\mu}M$. Optimal pH and temperature were 7.5 and $25^{\circ}C$, respectively. Optimal pentadecanoic acid concentration in a standard assay of ${\alpha}$-oxidase was 0.1 mM. The Km value of pentedecanoic acid was $85{\mu}M$. This method is straightforward, rapid, convenient, and easy. Its needs no treatment or extraction of reaction mixture.
Quorum sensing (QS) is a cell density-dependent communication mechanism between bacteria through small signaling molecules. When the number of QS signaling molecules reaches a threshold, they are transported back into the cells or recognized by membrane-bound receptors, triggering gene expression which affects various phenotypes including bioluminescence, virulence, adhesion, and biofilm formation. These phenotypes are beneficial for bacterial survival in harsh environments. This review summarizes the application of QS inhibitors for control of biofilm formation and virulence expression of periodontal pathogens.
Kim, Yeon-Hee;Lee, Jae-Gun;Park, Sung-Hoon;Kim, Jung-Sun
대한약학회:학술대회논문집
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대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2-2
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pp.174.2-174.2
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2003
Quorum sensing, a gene expression in response to population density, is regulated by chemical signals, most of which are acylated homoserine lactones (AHLs). The AHL derivatives have been reported to regulate bioluminescence, virulence factors and / or swarming motility in bacteria. It is hypothesized that higher organisms may have evolved specific means to interfere with bacterial communication as exemplified in the AHL-antagonistic activity of halogenated furanones isolated from the Australian macroalga Delisea pulchra. (omitted)
Kanojiya, Poonam;Banerji, Rajashri;Saroj, Sunil D.
한국미생물·생명공학회지
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제50권1호
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pp.1-14
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2022
Bacteria communicate with each other through an intricate communication mechanism known as quorum sensing (QS). QS regulates different behavioral aspects in bacteria, such as biofilm formation, sporulation, virulence gene expression, antibiotic production, and bioluminescence. Several different chemical signals and signal detection systems play vital roles in promoting highly efficient intra- and interspecies communication. Gram-negative bacteria coordinate gene regulation through the production of acyl homoserine lactones (AHLs). Gram-positive bacteria do not code for AHL production, while some gram-negative bacteria have an incomplete AHL-QS system. Despite this fact, these microbes can detect AHLs owing to the presence of LuxR solo receptors. Various studies have reported the role of AHLs in interspecies signaling. Moreover, as bacteria live in a polymicrobial community, the production of extracellular compounds to compete for resources is imperative. Thus, AHL-mediated signaling and inhibition are considered to affect virulence in bacteria. In the current review, we focus on the synthesis and regulation mechanisms of AHLs and highlight their role in interspecies bacterial signaling. Exploring interspecies bacterial signaling will further help us understand host-pathogen interactions, thereby contributing to the development of therapeutic strategies intended to target chronic polymicrobial infections.
Because of the need for new antimicrobial substances with novel mechanisms of action, we report here the use of an Acinetobacter reporter system for high-throughput screening of active antimicrobial agents. The bioreporter Acinetobacter strain DF4/PUTK2 carrying luciferase genes luxCDABE was chosen because of its ecological importance and it is widespread in nature. This bioreporter is genetically engineered to emit light constitutively that can be measured in real time by luminometry. Hence, this reporter system was employed to determine the bacteriostatic actions of spent-culture supernatants derived from twelve bacterial isolates. Out of the results, the strongest bioluminescence inhibitory effect of the supernatants was recorded with Bacillus cereus strain BAC (S5). Subsequently, ethyl acetate extracts of extracellular products of strain BAC (S5) were separated by a thin-layer chromatography (TLC). Based on the bioluminescence inhibitory assay, three fractions were found to have antimicrobial activity. One fraction (C) having the strongest antimicrobial activity was further purified using TLC and characterized by IR, $^1H$ NMR, mass spectrometry, SDS-PAGE, and amino acid composition analysis. The results predicted the presence of 2-pyrrolidone-S-carboxylic acid (PCA) and the octadeconic-acid-like fatty acid. Fraction C also demonstrated a broad inhibitory activity on several Gram-negative and Gram-positive bacteria. In conclusion, the Acinetobacter reporter system shows great potential to be a reliable, sensitive, and real-time indicator of the bacteriostatic actions of the antimicrobial agents.
발광 박테리아인 Photobacterium 종들의 lux 오페론 하부 영역에서 riboflavin 생합성에 관여하는 유전자들(ribⅠ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ)이 발견되었다. Photobacterium phosphoreum의 lux 유전자와 rib 유전자를 포함하는 intergenic 영역의 단일사슬 DNA가 P. phosphoreum의 mRNA에 의하여 S1 nuclease digestion에서 손상받지 않았으며, ribⅠ에 의하여 암호화되는 P. phosphoreum의 riboflavin synthase의 활성도가 lux-specific한 효소들인 luciferase 혹은 fatty acid reductase 활성도와 같이 bioluminescence intensity의 발현과 함께 대수기 말기에서 증가하는 박테리아 발광반응의 특이한 조절 체계인 'autoinduction' 양상을 보였다. 또한 P. leiognathi의 luxB로부터 ribⅡ까지 포함하는 DNA를 강력한 lux 프로모터와 reporter(chloramphenicol acetyl transferase, CAT) 유전자 사이에 삽입하고 접합(conjugation)의 방법으로 P. leiognathi에 유전자 전이(gene transfer)시켜 CAT reporter 유전자의 발현을 P. leiognathi에서 조사한 바, 그 유전자의 발현 정도에 큰 차이가 없었을 뿐만 아니라 이 구조에서 lux 프로모터를 제거하게 되면 CAT reporter 유전자의 발현이 전혀 나타나지 않았다. 이들 실험 결과들은 lux 유전자와 rib 유전자의 intergenic영역에 lux 오페론의 전사 종결 구조(transcriptional terminator)가 존재하지 않으며 ribflavin 생합성 유전자들이 그들 고유의 프로모터에 의하여 전사되는 것이 아니라 lux 오페론의 프로모터에 의하여 발현됨을 나타내는 것으로, 이는 Photobacterium 종들에서 lux 유전자와 rib 유전자들은 공동의 발현 조절 체계를 갖는 것으로 요약된다.
본 연구에서는 Photobacterium phosphoreum의 배양 및 생체발광을 위한 최적 배지의 개발과 장기저장 후 생체발광능의 회복을 위한 최적의 저장 조건을 확립하고자 하였다. P. phosphoreum을 배양하기 위한 배지로 Luria broth(LB) 배지를 변형한 modified LB(mLB) 배지를 개발하였다. mLB 배지는 Luria broth에 1.5%의 NaCl과 3%의 글리세롤을 보정, 첨가한 배지로, 미생물 생장 및 생체 발광량이 Nutrient broth 배지보다 약 25% 가량 높은 수치를 보여주었으며, 생장 대수기에서 생장 휴지기로 넘어갈 때 생체 발광량이 최고치에 달하였다. 30% 글리세롤을 첨가하여 $-20^{\circ}C$$-70^{\circ}C$ 및 액체질소에 3개월간 보관한 후, 배양하여 생장 및 생체 발광량을 조사한 결과에서는 $-20^{\circ}C$ 보관한 시료가 가장 좋은 결과를 보였다. 항 동결제로 5% adonitol을 첨가하여 동결 건조한 시료는 재 배양 시 adonitol를 첨가하지 않은 시료보다 16시간 이상 짧은 생장 유도기를 보여 주었고, 생체 발광량이 최고조에 달하는 시간도 빠르게 나타났다.
Lee, Wan-Seok;Choi, Minkyu;Hwang, Dong-Woon;Lee, In-Seok;Kim, Sook Yang
Fisheries and Aquatic Sciences
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제15권3호
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pp.241-250
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2012
Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), butyltins (BTs), nonylphenol (NP), and fecal sterols concentrations in sediments were investigated from Gunsan coast of Korea to evaluate organic pollution from anthropogenic activities. Sediment toxicity was also examined by bacterial bioluminescence toxicity test (Vibrio fischeri). The concentrations of 16 PAHs in sediments ranged from 67.9 to 425 ng/g dry wt; BTs ranged from 2.79 to 14.1 ng Sn/g dry wt; NP ranged from 20.7 to 2171 ng/g dry wt; and coprostanol, a fecal sterol, ranged from 7.60 to 245 ng/g dry wt. Effective concentration 50% ($EC_{50}$) of sediments ranged from 0.38 to 23.8 mg/mL. Most of the chemicals were present at levels lower than or comparable to the previously reported values from Korea. However, NP levels in the present study were in the high range of levels reported from the Korean coast, and 40% of the measured samples exceeded screening and ecotoxicological values of NP suggested by the Netherlands and Canada. This suggests that an ongoing source of NP is a serious concern in the Gunsan coast. High levels of contaminants were found in the proximity of potential sources, such as the outfall of a wastewater treatment plant for NP, an anthracite-fired power plant for PAHs, and ports for BTs, fecal sterols, and sediment toxicity. This indicates that Gunsan coast has various potential sources of marine sediment contaminants.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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