The present paper describes partial results of the study on the activities of microbes in the soil of Quercus mongolica forest from July, 1994 to April, 1995. To determine the relationship between structure and function of soil microbial ecosystem, the author investigated the seasonal change of physical environmental factors, microbial population and soil enzyme activities. The changes of pH was not significant and the temperature of surface soil was 2℃ higher than lower soil through out the year. Moisture contents (%) of soil samples ranged from 7.64% to 42.11%. However, soils of site 3 at Mt. Komdan in which vegetation is successional have higher moisture content than the others. The bacterial population increased in summer, but continuously decreased in autumn and winter, and then reincreased again in spring. Bacterial population of surface soil was higher than those of 30 cm depth all the year round. Dehydrogenase activity (DHA) was about two-fold higher throughout in surface soil compared to those of lower soil. And the correlation coefficient between DHA and bacterial population size was 0,713, It was suggested that DHA could be used as a primary index of soil microbial population and activity in soil ecosystem.
6-Phosphogluconolactonase (6PGL) is one of the key enzymes in the ubiquitous pathways of central carbon metabolism, but bacterial 6PGL had been long known as a missing enzyme even after complete bacterial genome sequence information became available. Although recent experimental characterization suggests that there are two types of 6PGLs (DevB and YbhE), their phylogenetic distribution is severely biased. Here we present that proteins in COG group previously described as 3-oarboxymuconate cyclase (COG2706) are actually the YbhE-type 6PGLs, which are widely distributed in Proteobacteria and Fimicutes. This case exemplifies how erroneous functional description of a member in the reference database commonly used in transitive genome annotation cause systematic problem in the prediction of genes even with universal cellular functions.
An Antarctic bacterial isolate displaying extracellular ${\alpha}$-galactosidic activity was named Paenibacillus sp. LX-20 based on 16S rRNA gene sequence analysis. Optimal activity for the LX-20 ${\alpha}$-galactosidase occurred at pH 6.0-6.5 and $45^{\circ}C$. The enzyme immobilized on the smart polymer Eudragit L-100 retained 70% of its original activity after incubation for 30 min at $50^{\circ}C$, while the free enzyme retained 58% of activity. The enzyme had relatively high specificity for ${\alpha}$-D-galactosides such as p-nitrophenyl-${\alpha}$-galactopyranoside, melibiose, raffinose and stachyose, and was resistant to some proteases such as trypsin, pancreatin and pronase. Enzyme activity was almost completely inhibited by $Ag^+$, $Hg^{2+}$, $Cu^{2+}$, and sodium dodecyl sulfate, but activity was not affected by ${\beta}$-mercaptoethanol or EDTA. LX-20 ${\alpha}$-galactosidase may be potentially useful as an additive for soybean processing in the feed industry.
Screening microorganisms that can produce glucan hydrolases for industrial, environmental, and biomedical applications is important. Herein, we describe a novel approach to perform glucan hydrolase screening-based on analysis of matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry (MALDI-MS) spectra-which involves degradation of the oligo- and polysaccharides. As a proof-of-concept study, glucan hydrolases that could break down glucans made of several glucose units were used to demonstrate the MALDI-MS-based enzyme assay. First, the enzyme activities of ${\alpha}$-amylase and cellulase on a mixture of glucan oligosaccharides were successfully discriminated, where changes of the MALDI-MS profiles directly reflected the glucan hydrolase activities. Next, we validated that this MALDI-MS-based enzyme assay could be applied to glucan polysaccharides (i.e., pullulan, lichenan, and schizophyllan). Finally, the bacterial glucan hydrolase activities were screened on 96-well plate-based platforms, using cell lysates or samples of secreted enzyme. Our results demonstrated that the MALDI-MS-based enzyme assay system would be useful for investigating bacterial glucoside hydrolases in a high-throughput manner.
In the present study, we isolated a new bacterial strain producing invertase (EC 3.2.1.26) and determined optimized culture condition in flask culture. The strain was identified as Bacilus flexus determined by the 16S rDNA sequencing method. The invertase was produced only in the sucrose medium as the sole carbon source. Potassium nitrate was an adequate nitrogen source for enzyme production, whereas meat peptone showed the highest bacterial growth. Enzyme production was increased about 2-fold when $MgSO_4\cdot7H_2O$ was supplemented to the growth media. The optimum temperature was found to be $30^{\circ}C$ for both enzyme production and bacterial growth. Invertase exhibited pH optima in the range 5.0-6.0 and have a temperature optimum at $40^{\circ}C$, similarly to other invertases found from different microbial sources. Several mineral ions (K and Fe) stimulated the invertase activity, whereas some bioelements (Ag, Mg, and Mn) inhibited enzyme activity. Under the optimized culture condition, the maximum enzyme production (over 250 units/mL) was achieved at 20 h. To the best of our knowledge, this is the first time to report on invertase production by Bacilus flexus.
Aspergillus sp. HCLF-4가 생성하는 세균 세포벽 분해효소의 특성을 규명하였다. 본 세포벽 분해 효소는 Anabaena cylindrica 세포벽 분해능을 보였다. 이 세포벽 분해 효소는 Aspergillus sp. HCLF-4를 기질성분으로 0.05% heat killed Micrococcus luteus가 포함된 PDB 배지에 키웠을 때 생성되는 inducible enzyme으로 분자량은 약 14.3 kDa 이었다. 본 세포벽 분해효소는 pH 3.0-4.0, 온도 $30^{\circ}C$ 조건에서 최고의 활성을 보였고 $Mg^{2+}$와, $Mn^{2+}$의 2가 이온에서 분해 효소의 활성이 촉진되었다. 반면, 1가 양이온 $Na^{+}$와 $Li^{+}$, 2강 양이온 $Ca^{2+}$와 $Cu^{2+}$, 3가 양이온 $Fe^{3+}$에서는 활성이 억제되었으며 EDTA와 PMSF 또한 분해 효소의 활성을 억제 시켰다. 이 효소는 N-acetylmuramyl-L-amidase 또는 endopeptidase와 같은 활성을 보였다.
본 연구는 시판 건강보조식품 중 효소식품의 성분을 분석하고 그 제조공정을 조사하여 HACCP system에 근거한 품질관리 개선 방안을 수립하고자 하였다. 이를 위하여 시중에서 가장 많이 판매되고 있는 12종류의 효소식품을 대상으로 일반성분, 효소활성도 및 미생물과 아플라톡신의 오염 등을 측정하였다. 실험결과 효소식품의 제품포장에 표시된 일반성분함량과 실험치와 차이가 큰 것으로 나타났다. 효소식품의 가장 큰 유효성으로 알려진 효소활성의 측정결과에서도 ${\alpha}-amylase$의 경우, 최고 $1793\;{\mu}g/min$ g에서 최저 $159\;{\mu}g/min$ g으로 커다란 편차를 보였으며, ${\beta}-amylase$의 경우, 최고 $171\;{\mu}g/min$ g와 최저 $11\;{\mu}g/min$ g, 그리고 protease이 경우 최고 $27.57\;{\mu}g/min$ g와 최저 $0.18\;{\mu}g/min$ g으로 나타나 단지 ${\alpha}-amylase$와 protease의 활성이 양성일 경우 적합판정을 내리는 현 공전상의 규정에 문제가 있음을 알 수 있었다. 또한 규정상 대장균 군에 대하여 음성이여야 함에도 불구하고 효소식품의 반수가 대장균 군에 양성으로 나타났으며 일반세균수에 있어서도 $1.3{\times}10^5-1.2{\times}10^9$로 큰 차이를 보이고 있어 효소활성을 위해 저온살균공정을 거치는 이들 제품의 위생적 관리가 시급함을 알 수 있었다. 이에따라 위해요소 중점 관리기준(HACCP)을 작성하여 효소식품의 품질향상을 위한 관리지침을 수립하였다.
Cellulolytic bacterial strains have been isolated from the faeces of wild (blackbuck, Antilope cervicapra; nilgai, Baselophus tragocamelus chinkara, Gazella gazella spotted deer, Axis axis and hog deer, Cervus porcinus) and rumen liquor of domestic (sheep, Ovis aries) ruminants. Five best cellulose degrading bacterial isolates (Ruminococcus sp.) were used as microbial feed additive along with buffalo rumen liquor as inoculum to study their effect on digestibility of feed and enzyme production in in vitro conditions. The bacterial isolate from chinkara (CHI-2) showed the highest per cent apparent dry matter (DM) digestibility ($35.40{\pm}0.60$), true dry matter digestibility ($40.80{\pm}0.69$) and NDF ($26.38{\pm}0.83$) digestibility (p<0.05) compared to control ($32.73{\pm}0.56$, $36.64{\pm}0.71$ and $21.16{\pm}0.89$, respectively) and other isolates at 24 h of incubation with lignocellulosic feeds (wheat straw and wheat bran, 80:20). The same isolate also exhibited the highest activities of fibre degrading enzymes like carboxymethylcellulase, xylanase, ${\beta}$-glucosidase and acetyl esterase. The bacterial isolate from chinkara (Gazella gazella) appears to have a potential to be used as feed additive in the diet of ruminants for improving utilization of nutrients from lignocellulosic feeds.
In comparison to alternative advanced wastewater treatment technologies, the main problem associated with membrane bioreactor (MBR) technology, which has become prominent in recent years, is biofouling. Within these systems, biofouling is typically the result of a biofilm layer resulting from bacterial gathering. One biological system that can be employed to interrupt the process of bacterial gathering is called 'Quorum Quenching (QQ)'. Existing QQ applications can be classified using three main types: 1) bacterial/whole-cell applications, 2) direct enzyme applications, and 3) natural sourced compounds. The most common and widely recognized applications for membrane fouling control during MBR operation are bacterial and direct enzyme applications. The purpose of this review was to identify and assess biofilm formation mechanism and results, the suggestion of the QQ concept and its potential to control biofilm formation, and the means by which these QQ applications can be applied within the MBR and present QQ MBR studies.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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