• 한국응용곤충학회지
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• 제35권1호
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• pp.66-73
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• 1996

Bacillus thuringiensis subsp. morrisoni PG-14의 cryIVD 유전자를 포함하고 있는 발현벡터 pCYASK5-1을 제작하여 Synechocystis PCCC6803에 형질전환시킨 후, 학질모기(Anopheles sinensis)유충에 대한 독성을 검정하였다. Kanamycin이 포함된 BG-11배지에서 선발된 형질전환체의 cryIVD 유전자 발현은 SDS-PAGE와 West-ern blot분석으로 확인하였다. 형질전환체는 A. sinensis 유충에 대해 높은 독성을 나타내었으며, 성장은 야생주인 Synechocystis Pccc6803과 유사하였다. 또 수심에 따른 형질전환체의 분포도 조사에서 전체적으로 살충농도의 세포수로 분포함을 확인하였다. 이러한 결과들은 B. thuringiensis subsp. morrisoni PG-14의 cryIVD 유전자로 형질전환된 Synechocystis PCCC6803이 모기유충 방제에 효율적으로 이용될 수 있음을 나타내었다.

• 농약과학회지
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• 제15권2호
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• pp.166-176
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• 2011

제주도의 녹차 밭에 서식하는 딱정벌레목인 청동풍뎅이 (Anomala albopilosa)의 사체와 녹차 밭 토양에서 분리한 Bacillus thuringiensis CAB530 균주의 생물효과를 검토하였다. 이 균주는 몇 종류의 해충에 대한 살충활성에서 난방제 농업해충 가운데 하나인 파밤나방에 높은 효과를 나타냈다. 파밤나방 2령 유충에 대한 살충활성 검정에서 CAB530 균주는 $LC_{50}$값이 $1.49{\times}10^4$(cfu/$m{\ell}$)으로 고활성을 보였다. 이 균주가 생산하는 살충성 독소단백질의 SDS-PAGE에서는 파밤나방에 살충활성이 있는 기존의 B. thuringiensis subsp. kurstaki와 비슷한 130kDa의 밴드를 나타내었다. 또한 파밤나방 중장액으로 반응을 시킨 후에 약 65kDa의 활성 독성단백질을 확인할 수 있었다 PCR수행에서 CAB530 균주는 cry1Aa, cry1Ab, cry1C, cry1D, cry1F 그리고 cry1I등 6 개의 유전자가 존재하는 것으로 밝혀졌으며, B. thuringiensis subsp. kurstala기준 균주와 차이가 있었다. 딱정벌레목에서 분리 선발한 B. thuringiensis CAB530균주는 crystal의 형태와 SDS-PAGE의 결과는 B. thuringiensis subsp. kurstaki와 유사하게 나타났지만, 살충활성 검정과 PCR product 전기영동 결과는 B thuringiensis subsp. aizawai와 유사하게 나타났다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제15권6호
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• pp.425-429
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• 1987

B. thuringiensis subsp. israelensis 균주가 생성하는 $\delta$-endotoxin의 alkali 용해에서 생성되는 hemolysin fragment 와 extra-cellular hemolysin 의 상관관계를 조사하기 위한 기초자료로서 extra-cellular hemolysin을 분리 정제하여 그 성질을 조사하였다. 균체 배양액에 유안을 염석 및 투석시킨 후, Sephadex G-200 gel filtration 과 DEAE-cellulose column chromatography를 행하여 균체외 homely-sin을 정제하였다. 정제된 extra-cellular hemolysin 은 SDS-polyacrylamide gel 전기영동에서 47,000 dalton의 분자량을 가진 단일 단백질 band를 얻었다. 또한 정제된 hemolysin은 thiol agents에 의해 그 활성이 증가되었으나, cholesterol 및 protease 처리 또는 금속이온 즉, FeSO$_4$나 CuSO$_4$에 의해 그 활성 이 감소되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권1호
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• pp.110-117
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• 1995

This study was carried out to immunologically characterize Bacillus thuringiensis (B.t) antigens. Protein patterns of ultrasonicated- antigens of B. thuringiensis subspecies using SDS- PAGE revealed marked similarities among all the strains analyzed except for the difference between quantative variations of bands and some protein antigens. The comparison of the protein patterns showed that the protein antigen of 45 kilodalton (kd) was common in 11 strains and that the difference between B. thuringiensis subsp. canadensis and galleriae was noticed in quantative variations of bands despite of ambiguous serogrouping, suggesting a useful method for identification. All strains examined showed similar antigenic patterns in SDS-PAGE, while immunodominant bands differed in antigenic reactivity in western blot using polyclonal antibodies. Polyclonal antibody to B. thuringiensis subsp. thuringiensis and israelensis in indirect immunofluorescence assay reacted with flagella and cell surface antigens. The present study indicates that SDS-PAGE and western blot analysis may be used as tools for differentiation and identification of B. thuringiensis subspecies.

• 한국응용곤충학회지
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• 제47권4호
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• pp.457-465
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• 2008

본 연구는 모기에 활성을 나타내는 Bacillus thuringiensis subsp. tohokuensis CAB167균주에서 생산된 내독소결정단백질의 특성을 조사하였다. B. thuringiensis subsp. tohokuensis CAB167균주는 위상차 현미경과 주사전자현미경으로 관찰하여 일반적으로 모기에 활성을 나타내는 spherical type의 내독소결정 성단백질을 형성하는 것으로 나타났다. 국내에서 서식하는 지하집모기(Culex pipiens molestus), 빨간집모기(Culex pipiens pallens), 이집트숲모기(Aedes aegyti)에 대한 이 균주의 살충활성검정은 각각 173, 190, 580 ng/ml의 $LC_{50}$ 값으로 각각 활성을 보였다. B. thuringiensis subsp. tohokuensis CAB167균주에서 생산된 내독소결정성단백질의 SDS-PAGE를 통해 135, 80, 49와 28-kDa의 주요한 4개의 밴드를 나타냈다. 내독소결정성단백질의 소화에 영향을 미치는 곤충중장액과 유사한 trypsin효소를 처리하여 72와 63-kDa의 단백질이 새롭게 생성하였다. 파리목 위생해충인 모기에 활성을 나타내는 다른 7개의 B. thuringiensis 균주들의 내독소 결정성단백질과 혈청학적인 비교실험에서 독소단백질이 차이가 있는 것을 확인하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제6권5호
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• pp.326-330
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• 1996

To illustrate whether a hemolysin in $\delta$-endotoxins of Bacillus thuringiensis strain 73E10-2 and subsp. israelensis had immunological identity, a cyt gene of the strain 73E10-2 which encodes a hemolysin was cloned to B. subtilis (transformant 2753). The transformant 2753 containing cyt gene produced the hemolysin which lysed sheep erythrocytes after treatment of proteinase K. The hemolysin was proved also to be toxic against mosquito larvae (Aedes aegypti). The molecular weight of the hemolysin produced from the transformant 2753 was determined to be about 25 kDa by SDS-PAGE and immunoblot. The hemolysin in $\delta$-endotoxin of subsp. israelensis and subsp. kyushensis did not react on immunoblot using polyclonal anti-$\delta$-endotoxin of the strain 73E10-2, but 70-140 kDa mosquitocidal toxins in $\delta$-endotoxin of subsp. kyushuensis reacted.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권3호
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• pp.308-312
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• 1991

B.thuringiensis subsp. darmstadiensis 73E10-2의 내독소에 대한 화학적 처리에서 고농도의 중성염(4M NaBr), 유기용매(50% acetone), 변성제(4M urea) 및 중성 계면활성제(10% triton X-100)로 내독소를 처리하였을 때 모기유충에 대한 독력의 소실이 거의 나타나지 않았으나, guanidine HCL이나 $CCl_4$ 또는 양이온 및 음이온 계면활성제로 처리함으로써 그 독력이 크게 소실되었다. 또한, 내독소의 sulfhydryl기의 변형은 모기유충에 대한 독력에 영향을 나타내지 못하였으나, lysine기 변형으로 내독소의 독력이 거의 완전히 소실되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제22권6호
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• pp.679-684
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• 1994

For a biological control of root-knot nematode (Meloidogyne incognita) in tomato, efficiency of Bacillus thuringiensis subsp. indiana strain TH109 (BtTH109) on the nematode control was investigated. After the mixture of strain BtTH109 and wheat bran was treated into rhizosphere of the tomato plants with nematode eggs, the stem height and root growth of plants increased. And the juveniles and eggs of nematode are not found in both roots of tomatoes and pot soil after cultured broth of the strain BtTH109 treated 4 times at 3 day-interval into rhizosphere of the infected tomatoes.

• 농약과학회지
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• 제13권4호
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• pp.315-324
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• 2009

배추좀나방(Plutella xylostella L.)의 효과적인 방제를 위해서 현재 상용화되고 있는 친환경 농자재인 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki($30{\times}10^8\;cfu/mg$)와 Neem oil(0.5% azadirachtin)을 사용하였다. 두 약제를 추천농도로 처리했을 때 배추좀나방 1. 2령 유충에서 B. thuringiensis는 2일만에 100%의 사충률을 보였으며, Azadirachtin은 7일까지 지효적 효과를 보였다. 배추좀나방 1, 2, 3, 4령 유충에 대한 B. thuringiensis의 $LC_{50}$ 값은 각각 $2.8{\times}10^4$, $3.1{\times}10^4$, $3.4{\times}10^4$, $1.5{\times}10^5\;cfu/ml$이였으며, Azadirachtin은 2.7, 3.9, 4.7, 7.1 ppm이였다. B. thuringiensis와 Azadirachtin를 배추좀나방 성충에 처리하였을 경우에 산란수는 무처리와 비교하여 Azadirachtin 25 ppm에서 57.5개의 감소를 보였다. 또한 알의 부화율은 무처리와 비교하여 B. thuringiensis는 큰 차이가 없었고, Azadirachtin 50 ppm에서 45.4%의 부화율 감소를 나타냈다. 배추좀나방은 B. thuringiensis와 Azadirachtin을 혼합처리할 경우, 각각의 처리구에서 각각을 단독으로 처리하였을 때보다 높은 방제효과를 나타내었다. 포트시험의 경우에서도 B. thuringiensis와 Neem oil의 혼합처리 사용은 배추좀나방 알, 유충, 번데기, 성충의 친환경적인 방제에 효과를 나타냈다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제49권2호
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• pp.151-158
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• 2010

토양에서 분리한 구형의 내독소단백질을 가지는 18개의 균주 중, 이집트숲모기와 지하집모기에 90%이상의 살충활성을 보이는 Bacillus thuringiensis subsp. israelensis CAB199 균주를 선발하였다. 이 균주는 습지에 발생한 이나도미집모기에도 높은 살충효과를 나타내었다. 모기유충의 행동패턴은 주로 호흡을 위해 수면에서 주로 활동하고 있어, Bti 균주를 유효성분으로 하는 제제가 수면 위에 장시간 부유 할 수 있는 제형을 선발하고자 하였다. 수화제와 액상수화제의 두 가지 형태의 제형을 만들어 실내에서의 살충효과 및 습지에서의 방제효과를 확인한 결과, 실내에서의 경우에는 액상수화제 제형이 실험한 3종의 모기유충에 대해 속효적이며 높은 살충율을 보여주었고, 습지에서도 이나도미집모기에 대하여 가장 좋은 활성을 나타내었다.