Null mutants generated by targeted gene replacement are frequently used to reveal function of the genes in fungi. However, targeted gene deletions may be difficult to obtain or it may not be applicable, such as in the case of redundant or lethal genes. Constitutive expression system could be an alternative to avoid these difficulties and to provide new platform in fungal functional genomics research. Here we developed a novel platform for functional analysis genes in Magnaporthe oryzae by constitutive expression under a strong promoter. Employing a binary vector (pGOF1), carrying $EF1{\beta}$ promoter, we generated a total of 4,432 transformants by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation. We have analyzed a subset of 54 transformants that have the vector inserted in the promoter region of individual genes, at distances ranging from 44 to 1,479 bp. These transformants showed increased transcript levels of the genes that are found immediately adjacent to the vector, compared to those of wild type. Ten transformants showed higher levels of expression relative to the wild type not only in mycelial stage but also during infection-related development. Two transformants that T-DNA was inserted in the promotor regions of putative lethal genes, MoRPT4 and MoDBP5, showed decreased conidiation and pathogenicity, respectively. We also characterized two transformants that T-DNA was inserted in functionally redundant genes encoding alpha-glucosidase and alpha-mannosidase. These transformants also showed decreased mycelial growth and pathogenicity, implying successful application of this platform in functional analysis of the genes. Our data also demonstrated that comparative phenotypic analysis under over-expression and suppression of gene expression could prove a highly efficient system for functional analysis of the genes. Our over-expressed transformants library would be a valuable resource for functional characterization of the redundant or lethal genes in M. oryzae and this system may be applicable in other fungi.
The cautious blasting works had been used with emulsion explosion electric M/S delay caps. Drill depth was from 3m to 6m with Crawler Drill ${\phi}70mm$ on the calcalious sand stone (soft -modelate -semi hard Rock). The total numbers of test blast were 88. Scale distance were induced 15.52-60.32. It was applied to propagation Law in blasting vibration as follows. Propagtion Law in Blasting Vibration $V=K(\frac{D}{W^b})^n$ were V : Peak partical velocity(cm/sec) D : Distance between explosion and recording sites(m) W : Maximum charge per delay-period of eight milliseconds or more (kg) K : Ground transmission constant, empirically determind on the Rocks, Explosive and drilling pattern ets. b : Charge exponents n : Reduced exponents where the quantity $\frac{D}{W^b}$ is known as the scale distance. Above equation is worked by the U.S Bureau of Mines to determine peak particle velocity. The propagation Law can be catagorized in three groups. Cubic root Scaling charge per delay Square root Scaling of charge per delay Site-specific Scaling of charge Per delay Plots of peak particle velocity versus distoance were made on log-log coordinates. The data are grouped by test and P.P.V. The linear grouping of the data permits their representation by an equation of the form ; $V=K(\frac{D}{W^{\frac{1}{3}})^{-n}$ The value of K(41 or 124) and n(1.41 or 1.66) were determined for each set of data by the method of least squores. Statistical tests showed that a common slope, n, could be used for all data of a given components. Charge and reduction exponents carried out by multiple regressional analysis. It's divided into under loom over loom distance because the frequency is verified by the distance from blast site. Empirical equation of cautious blasting vibration is as follows. Over 30m ------- under l00m ${\cdots\cdots\cdots}{\;}41(D/sqrt[2]{W})^{-1.41}{\;}{\cdots\cdots\cdots\cdots\cdots}{\;}A$ Over 100m ${\cdots\cdots\cdots\cdots\cdots}{\;}121(D/sqrt[3]{W})^{-1.66}{\;}{\cdots\cdots\cdots\cdots\cdots}{\;}B$ where ; V is peak particle velocity In cm / sec D is distance in m and W, maximLlm charge weight per day in kg K value on the above equation has to be more specified for further understaring about the effect of explosives, Rock strength. And Drilling pattern on the vibration levels, it is necessary to carry out more tests.
Gray leaf spot (GLS) is a serious fungal disease caused by Pyricularia oryzae Cavara, recently reported on the important turf and forage species, perennial ryegrass (Lolium perenneL.). This fungus also causes rice blast, which is usually controlled by host resistance, but durability of resistance is a problem. Few instances of GLS resistance have been reported in perennial ryegrass. However, two major QTL for GLS resistance have been detected on linkage groups 3 and 6 in an Italian x perennial ryegrass mapping population. To confirm that those QTL are still detectable in the next generation and can function in a different genetic background, a resistant segregant from this population has been crossed with an unrelated susceptible perennial clone, to form a new mapping population segregating for GLS resistance. QTL analysis has been performed in the new population, using two different ryegrass field isolates and RAPD, RFLP, and SSR marker-based linkage maps for each parent. Results indicate the previously identified QTL on linkage group 3 is still significant in the new population, with LOD and percent of phenotypic variance explained ranging from 2.0 to 3.5 and 5% to 10%, respectively. Also two QTL were detected in the susceptible parent, with similar LOD and phenotypic variance explained. Although the linkage group 6 QTL was not detected, the major QTL on linkage group 3 appears to beconfirmed. These results will add to our understanding of the genetic architecture of GLS resistance in ryegrass, which will facilitate its use in perennial ryegrass breeding programs.
This study discussed the influence of mixtures and curing conditions on the development of strength and microstructure of RPC using ternary pozzolanic materials. Through pilot experiment, various RPC was manufactured by adding single or mixed ternary pozzolanic materials such as silica fume, blast furnace slag and fly ash by mass of cement, up to 0~65%, and cured by using 4 types of method which are water and air-dried curing at $20^{\circ}C$, steam and hot-water curing at $90^{\circ}C$. The results show that the use of ternary pozzolanic materials and a suitable curing method are an effective method for improving development of strength and microstructure of RPC. The unit volume of cement was greatly reduced in RPC with ternary pozzolanic materials and unlike hydration reaction in cement, the pozzolanic reaction noticeably contributes to a reduction in hydration heat and dry shrinkage. A considerable improvement was found in the flexural strength of RPC using ternary pozzolanic materials, and then the utilization of a structural member subjected to bending was expected. The X-ray diffractometer (XRD) analysis and Scanning Electronic Microscope (SEM) revealed that the microstructure of RPC was denser by using the ternary pozzolanic materials than the original RPC containing silica fume only.
Journal of the Korea Institute of Building Construction
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v.12
no.1
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pp.54-63
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2012
The purpose of this study is to examine the potential for reducing the environmental load and $CO_2$ gas when cement is produced by using cement substitutes. These substitutes consisted of blast furnace slag, red mud and silica fume, which were industrial by-products. The most optimum mix was derived when alkali accelerator was added to low carbon inorganic composite mixed with industrial by-product at room temperature. It is determined that hardened properties and the results of compressive strength tests changed based on CaO content, Si/Al, the mixing ratio and the amount of alkali accelerator, curing conditions and W/B. The results of test analysis suggest that the optimum mix of low carbon inorganic composite is CaO content 30%, Si/Al 4, the mixed ratio of alkali accelerator $(NaOH:Na_2SiO_3)$ 50g:50g, the amount of alkali accelerator 100g and W/B 31%. In addition, if contraction is complemented, low carbon inorganic composite with superior performance could be developed.
Since strength and diffusion coefficient of concrete, representative concrete properties that in change with age, the time effect must be considered in the analysis of chloride penetration. In this study, an evaluation of correlation between accelerated diffusion coefficient, apparent diffusion coefficient, and compressive strength in high performance concrete with various mineral admixtures such as ground granulated blast furnace slag, fly ash, and silica fume was performed. For this work, thirty mix proportions were prepared. Accelerated diffusion coefficients at the age of 28, 91, 180, and 270 days were evaluated. For apparent diffusion coefficient, submerging test for 6 months was performed. For evaluation of compressive strength with ages, the compressive strength test was carried out at an age of 7, 28, 91, 180 days. The results of accelerated diffusion coefficient, apparent diffusion coefficient, and strength were compared, and the correlation was analyzed considering time dependency. From this study, linear relationship between accelerated diffusion and apparent diffusion coefficient were obtained regardless of concrete age. The linear relations were also observed in strength-accelerated diffusion coefficient and strength-apparent diffusion coefficient regardless of concrete age.
Background: CM1 (centrocyte/-blast marker 1) was defined by a mAb against concavabalin-A (ConA) activated PBMC. It is expressed in germinal center of human tonsil and on the surface of activated PBMC as well as cancer cells. Recently, increased productions of pro-inflammatory mediators were detected from activated PBMC by CM1 ligation. Methods: However, there is a limitation to explain the exact role of CM1 on inflammation and its related mechanisms, since the identity of CM1 is still not clarified. In our previous study, we have already confirmed that soluble form of CM1 was produced by Raji. Therefore, we performed Q-TOF analysis after immunoprecipitation of concentrated Raji culture supernatant using anti-CM1 mAbs. Results: As a result, we found that CM1 is identical to enolase-1(ENO1), a glycolytic enzyme, and we confirmed that results by silencing ENO1 using siRNA. It was also confirmed through competition assay between anti-CM1 and anti-ENO1 mAbs. Finally, we investigated the possible role of CM1 in inflammatory response and cancer. The ligation of CM1 on Raji cells with anti-CM1 mAbs induces the extensive production of prostaglandin $E_2(PGE_2)$. In addition, the increased activity of matrix metalloproteinase (MMP)-2/9 was shown in NCI-N87, stomach cancer cell line by CM1 stimulation. Conclusion: CM1 is identical to ENO1 and it might be an important role in the regulation of inflammatory responses.
102 ESTs (Expressed Sequence Tags) were obtained by sequencing clones from a library of rainbow trout kidney cDNAs. Of the sequences generated, 55.8% of the ESTs were represented by 37 known genes. The 45 clones of unknown gene products potentially represent 40 novel genes. The genes involved in structural function (14.5%) and transcription/translation (11.6%) account for the major gene expression activities in the kidney Microarray experiment was conducted to compare gene expression of the unique ESTs in young and adult rainbow trout kidneys. While mitochondrion, cytochrome b, rho G, spastin protein, and three unknown genes were down-regulated in the mature fish kidney, calponin 1, calcium binding protein, histone deacetylase 1, and an unknown gene were up-regulated in the mature fish kidney. This research demonstrates the feasibility and power of functional genomics in rainbow trout.
Background: CM1 (centrocyte/-blast marker 1) is originally defined as a germinal center B cell marker. It is known that CM1 plays a critical role on B cell development in germinal center. In addition, we have found that CM1 is expressed on lymphoma cell lines, such as Raji, Ramos and IM-9. This means that CM1 might be served as a tumor marker as well. In the present study, we examined the expression of CM1 on the surface of the other tumors and the possibility of the development of tumor screening ELISA kit by using CM1. Methods: First, we have examined the expression of CM1 on stomach cancer and hepatoma, which are predominantly (discovered) occurred in Korean, by flow cytometry analysis. After purifying of CM1 antigen from Raji and Ramos, the optimal ELISA condition was determined. And then we compared the level of CM1 between normal individuals and cancer patients by ELISA. To decrease the non-specific binding of anti-CM1 mAb with serum components except CM1 and to enhance the diagnostic accuracy, albumin depletion spin column was used. Results: CM1 was highly expressed on stomach cancer and hepatoma cell lines. In addition, we have also confirmed the increased CM1 expression on cancer patients. The difference of CM1 expression between normal individuals and cancer patients were more clearly observed, after deletion of serum albumin by using albumin depletion spin column. Conclusion: Based on the results from this study, CM1 might be a useful molecule for the early diagnosis of cancer. In addition, further studies for the increase of ELISA sensitivity and appropriate albumin depletion methods should be needed.
The goal of this study was to isolate wild yeasts from reed fields in the Seocheon-gun county in Chungcheongnam-do, South Korea. Molecular analysis of the D1/D2 domain of the 26S rDNA of the yeasts isolated from soil samples was performed using Basic Local Alignment Search Tool (BLAST). In total, 20 yeast strains from 11 species were isolated from 20 different soil samples. Candida species were observed to be the most common yeasts. Of these 20 strains, Candida subhashii (6 strains), Candida tropicalis (3 strains), Candida boleticola MS008, and Lachancea thermotolerans (2 strains) were identified as alcohol-fermenting yeasts. Further, Bullera japonica YJ10-1, Candida subhashii J7-1, Kluyveromyces yarrowii YJ11-1, and Ustilago shanxiensis Y10-1 were newly recorded yeast strains in Korea, and therefore, their microbiological characteristics were investigated further. All of these unrecorded yeast strains had oval cells; only Candida subhashii J7-1 formed ascospores and pseudomycelia. Kluyveromyces yarrowii YJ11-1 grew in vitamin-free medium, and all of these strains, except Candida subhashii J7-1, grew in 5% NaCl-containing YPD broth.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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