The baculovirus expression vector system (BEVS) is one of the powerful heterologous protein expression systems using insect cells. As a result this has become a hot issue in the fleld of biotechnology. The advantage of the BEVS is that the large-scale production of heterologous proteins, which undergo posttranslational modification in the endoplasmic reticulum (ER), can be accomplished. Altrough posttranslational modification of heterologous proteins in insect cells is more similar to mammalian cells than yeast, it is not always identical. Therefore, aggregation and degradation can sometimes occur in the ER. To produce a high level of bioactive heterologous proteins using BEVS in insect cells, the prerequisite is to completely understand the posttranslational conditions that determine how newly synthesized polypeptides are folded and assembling with ER chaperones in the ER lumen. Here, we provide information on current BEVS problems and the possibility of successful heterologous protein production from mammalian cells.
국내 순수전기차 시장은 초기 시장형성 단계이므로 보급확대를 위해서는 고객의 순수전기차에 대한 인식과 구매 의사에 관한 연구가 필요하다. 본 논문은 고객세분화를 위한 이론적 프레임을 전기차 사용 경험 전후에 고객의 전기차 구매 의사를 기반으로 도출하였다. 특히 순수전기차 사용 경험이 있는 서울 및 제주지역 응답자만을 대상으로 한 설문조사를 통해 고객의 구매 의사와 우려 요인들을 실증분석하였다. 로지스틱 회귀모델의 분석 결과, 경험 고객이 차내 냉난방기기에 대한 우려가 클수록 고객의 구매 의사는 감소하고, 고객의 전기차의 일일 주행거리가 길수록 구매 의사는 증가한다. 또한 순차형 프로빗 모델의 분석 결과, 경험 고객의 전기차의 주행거리, 사고 시 A/S, 경사로 주행에 대한 우려가 클수록 고객이 냉난방기기에 대해 우려가 증가했다. 본 논문은 정책입안자 및 기업에게 전기차 관련 고객세분화, 연구개발, 마케팅 전략, 지원정책 수립과 관련하여 시사점을 제공할 수 있다.
Park, Seung-Won;Goo, Tae-Won;Kim, Seong Ryul;Choi, Kwang-Ho
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제32권2호
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pp.49-53
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2016
Bone morphogenetic proteins (BMPs) are essential growth factors for bone formation, skeletal development and bone regeneration. The BMP-2/7 heterodimer is known to have remarkable effects on osteogenic induction that are even stronger than the BMP-2 or BMP-7 homodimers. We designed a recombinant human BMP-2/7 (rhBMP-2/7) heterodimer protein with four glycine residues between BMP-2 and BMP-7 protein to facilitate free bond rotation of domains. The Baculovirus Expression Vector System (BEVS) is routinely used to produce recombinant proteins in the milligram scale. In this study, the BEVS was used to express the rhBMP-2/7 protein whrer the recombinant baculovirus was recovered in the host Sf9 cells. To confirm the biological activity of rhBMP-2/7 protein secreted from the BEVS as an osteogenic differentiation and induction factor, we measured the BMP-induced ALP activity. rhBMP-2/7 could be used as an alternative to BMPs to overcome limitations like short half-life and requirement for high concentrations. Furthermore, rhBMP-2/7 may be an efficient tool for various application studies such as bone regeneration and skeletal development.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제26권2호
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pp.119-123
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2013
The insect baculovirus expression vector system (BEVS) is useful for producing biologically active recombinant proteins. However, the overexpression of heterologous proteins using this system often results in misfolded proteins and the formation of protein aggregates. To overcome this limitation, we developed a versatile baculovirus expression and secretion system using Bombyx mori protein disulfide isomerase (bPDI) as a fusion partner. bPDI gene fusion was found to improve the secretions and antibacterial activities of recombinant nuecin and enbocin proteins. Thus, we conclude that bPDI gene fusion is a useful addition to BEVS for the large-scale production of bioactive recombinant proteins.
In previous experiment, we reported when the heterologous protein is expressed by using baculovirus expression vector system (BEVS), although the amount of intracellular protein is abundant, the amount of extracellular Protein is poor. As the link in the chain of the research, we investigated the secretory pathway, important in case of the secretory protein, of the protein expressed in insect cells using BEVS. (omitted)
본 연구는 누에신 단백질의 대량발현을 통해 농업용 소재로서 이용하고자 하는 연구의 일환으로 누에 핵다각체병 바이러스 유래의 pBm10po1-Xa 벡터에 누에신 유전자를 도입하여 누에 배양세포(Bm5) 및 누에 생체에서 발현한 결과 누에신 전사체는 바이러스 접종 후 1일째부터 발현되기 시작하여 5일째에 최대로 발현되었음을 확인할 수 있었고, 누에신 단백질은 3일째부터 발현량이 증가하여 5일째까지 계속 지속적으로 발현되었으나 그 발현량은 전사체에서 처럼 많지 않음을 확인할 수 있었으며, 누에신 단백질의 발현량은 누에 세포에 비해 누에 생체에서 기대만큼 그 발현량이 많지 않았다. 또한 누에신의 베큘로바이러스 발현계 (baculovirus expression vector system, BEVS)를 이용하여 세포내 및 번역후 변형과정을 통하여 세포외로 분비된 누에신의 발현양상을 확인한 결과 세포내에 비해 세포외로 분비시 그 발현량이 현저히 줄어들었음을 확인할 수 있었다. 따라서 베큘로바이러스 발현계를 이용하여 외래 단백질을 생산할 경우 정확한 메카니즘은 밝혀지지 않았으나 강력한 프로모터에 의해 세포내 단백질 생산량은 많은데 비해 정확한 단백질 고차구조 형성을 도와주는 foldase 및 chaperon의 양은 한정되어져 있으므로 정확한 고차구조를 형성하여 세포외로 분비되는 생물학적 활성을 띠는 단백질은 매우 적은 양간이 발현됨을 확인할 수 있었다. 그러므로 추후 누에 신 단백질 대량생산을 위해서는 분비 프로세싱의 해명 및 번역 후 변형과정의 개선을 통한 발현계의 개량이 시급히 요구된다.
Environmental sustainability is critical; else, the whole planet would face climatic disasters in the near future. A transportation system based on electric vehicles is assumed to be capable of providing long-term mobility. However, despite several attempts by national and international authorities, a great aim could not be met in India or the rest of the globe. Existing electric cars have a number of limits and obstacles. This report highlighted significant environmental and safety-related constraints that contribute to the low adoption rate of BEVs in India. A SWOT analysis was also carried out to identify the important elements influencing the future of BEV penetration in India.
Bovine enteroviruses (BEVs) were separated into two groups, BEV-1 and BEV-2. BEVs, found in cattle worldwide, usually cause asymptomatic infections and are excreted in the feces of infected animals. Antibodies against BEV have been found in different species including human, cattle, sheep, goats, dogs, horses and monkeys in the world. This study aimed to investigate prevalence of the neutralizing antibodies for BEVs in human and animals in Korea. Antibodies against BEV-1 in humans, cattle, pigs, goats, horses and dogs were shown to be 46.8%, 48.3%, 70.6%, 11.5%, 11.5% and 6.3% respectively. Also, antibodies against BEV-2 were shown to be 98.7%, 68.1%, 89.2%, 59.4%, 9.4% and 96.9% respectively. We found that the neutralizing antibodies against these viruses are common in Korea. The prevalences of antibodies against BEV-1 were lower than those against BEV-2 in humans and in all animals except horses. These results showed that the BEV is considered endemic in cattle in many regions in Korea.
본 연구는 곤충 유전자를 이용한 항세균성 펩타이드 생산 및 농업용 소재로서의 응용에 관한 연구로서 항세균성 단백질 누에신 유전자를 베큘로 바이러스 발현계(BEVS)를 이용하여 곤충세포주에서 발현한 후 누에신 단백질의 농업용 소재로서의 가능성을 모색하기 위해 농작물을 가해하는 감자 고추의 무름병을 일으키는 Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum, 가지 및 고추의 풋마름병을 일으키는 Ralstonia solanacearum, 양송이 버섯의 세균성 갈색 무늬 병을 일으키는 Pseudomonas tolaasii 및 무와 배추의 검은썩음병을 일으키는 Xanthomonas campestris pv. campestris 에 대해서 항세균 활성을 관찰하였다. 그 결과 Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum, Ralstonia solanacearum 및 Pseudomonas tolaasii에 대해 높은 활성을 나타내었으며 Xanthomonas campestris pv. campestris에는 활성을 나타내지 않았다. Ion exchange 및 gel filtration chromatography 를 수행하여 약 20 kDa의 성숙 누에신 단백질을 순수 분리하여 pH 및 온도에 대한 안정성을 조사한 결과, pH 2~12 완충액에서 30분간 처리하였을 때에도 항세균 활성이 그대로 유지되었고 10$0^{\circ}C$에서 2시간 처리시에는 활성이 안정되었으며 4시간 처리시에도 80% 정도로 유지됨을 확인함으로써 누에신 단백질은 pH 및 온도에 대한 안정성이 있음을 확인할 수 있었다.
The insect baculovirus expression vector system (BEVS) is useful for producing biologically active recombinant proteins. However, the overexpressions of foreign proteins using this system often results in misfolded proteins and the formation of protein aggregates. To overcome this limitation, we developed a versatile baculovirus expression and secretion system using Bombyx mori protein disulfide isomerase (bPDI) as a fusion partner. bPDI gene fusion was found to improve the secretions and antibacterial activities of recombinant nuecin proteins. Thus, we conclude that bPDI gene fusion is a useful addition to BEVS for the large-scale production of bioactive recombinant proteins.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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