This study was carried out to reveal optimum conditions for in vitro propagation of 3 Korean native azalea species, Rhododendron mucronulatum, R. yedonese var. poukhanense, and R. shlippenbachii, which are useful for landscape proposes. Seeds and meristems from three azalea species were cultured on 1/2MS, Hyponex, and Anderson media containing growth of regulators benzyladenine(BA) and 2-isopentenyadenosine(2ip). The results were as follows. 1. In the culture of R. schlippenbachii and R. mucronulatum seeds, in vitro seedlings germinated and grew well on he 1/2MS and Anderson media, while R. yedoense var. poukhanense on Hyponex media containing 6.0mg/$\ell$ 2ip. 2. When the meristems of R. mucronulatum were cultured on Andeson media containing 9.0mg/$\ell$ 2ip, the survival rate of meristems was 23.0% in 6 weeks after culture, and the survival rate of R. schlippenbachii was 46.0% o nthe same media containing 12.0mg/$\ell$ 2ip. The survial rate of R. yedoense var. poukhanense was 92.0% onHyponex media containing 0.5mg/$\ell$ BA and 9.0mg/$\ell$ 2ip. When the meristems of R. mucronulatum and R. yedoense var. poukhanense were cultured on Hyponex media containing 12.0mg/$\ell$ 2ip, they showed the most excellent growth. R. schlippenbachii grew well on Anderson media containing 9.0mg/$\ell$ 2ip. When in vitro shoots of R. yedoense var. poukhanense were subcultured to solid medium, they grew well in shoot growth on Hyponex media containing 6.0mg/$\ell$ 2ip.
Sunflower (Helianthus annuus L.) protoplasts were isolated from seven-day-old etiolated hypocotyls of 10 A line and four-week-old fully expanded young leaves of PI 441983 line in vitro seedlings using an enzymatic method. Purified protoplasts were collected by filtration and floatation in sucrose solution. Semi-solid protoplast culture was performed using the L4 regeneration protocol with various culture media and plating densities to achieve the highest efficiencies for protoplast culture of hypocotyl and mesophyll protoplasts of 10 A and PI 441983 lines, respectively. The concentrations in liquid L'4M medium and different plating densities were evaluated in two types of cytokinins, the adenine-type 6-benzyladenine (BA) and the phenylurea-type thidiazuron (TDZ). The highest colony formation was achieved in both sunflower lines when 0.5 mgL-1 BA and 0.5 mgL-1 TDZ were applied with a high plating density (3 × 105 protoplasts mL-1). These conditions led to 38.45% and 39.40% colony formation for hypocotyl protoplasts of the 10 A line and mesophyll protoplasts of the PI 441983 line, respectively. Moreover, many hypocotyl protoplast-derived colonies developed into micro-calli. In addition, superior development of both sunflower protoplasts was observed with all plating densities when BA was used in combination with TDZ. This finding will be applicable to future sunflower hybrid production via somatic hybridization.
Zingiber officinale buds from the rhizomes were used to produce in vitro shoots. These explants produced the largest number of multiple shoots, 9.8 shoots per explant, when were cultured on MS (Murashige and Skoog 1962) medium supplemented with 2.0 mg/L benzyladenine (BA) and 2.0 mg/L indole butyric acid (IBA). This medium was also found to be suitable for in vitro propagation of other Zingiberaceae species: Alpinia conchigera, Alpinia galanga, Curcuma domestica, C. zedoaria and Kaempferia galanga. Both C. domestica and C. zedoaria produced more multiple shoots when were cultured in the liquid proliferation medium, MS medium containing 2.0 mg/L BA and 2.0 mg/L IBA. To maintain the in vitro plantlets of Zingiberaceae species, they were required to subculture every four weeks. After executing proper acclimatization protocol, in vitro plantlets of Alpinia galanga, A. conchigera, Curcuma domestica, C. zedoaria, Kaempferia galanga and Zingiber officinale could be successfully planted in the field with high percentage of survival.
본 연구는 배추(Brassica campestris L. ssp. pekinensis)의 자엽 및 하배축 조직으로부터 효율적인 식물체 재분화 체계를 확립하기 위하여 실시하였다. 다양한 조합의 식물생장조절제 NAA와 BA를 조사한 바 자엽은 NAA 2.0mg/L, BA 1.0mg/L와 $AgNO_3$ 16.7mg/L를 첨가한 배지에서 절편당 2.67개의 가장 좋은 신초발생을 보였다. 하배축 절편체로부터는 NAA 1.0mg/L, BA 5.0mg/L와 $AgNO_3$ 16.7mg/L를 첨가하였을 때 절편당 1.87개의 가장 좋은 신초발생을 보였다. 재분화된 신초는 발근배지에서 뿌리를 유기하였으며 식물체는 습도가 유지된 생장상에서 순화를 거처 온실에서 재배하였다. 재분화 개체는 표현형과 염색체수에서는 이상이 없는 것으로 나타났다.
Allium hookeri L. (Alliaceae family) is an important ethnomedicinal plant native to the Himalayan region of Asia. The aim of this research was to establish a high-frequency plant regeneration system for in vitro propagation of A. hookeri. Among the tissue types examined, receptacle explants derived from immature flower buds showed the highest regeneration rate of shoots ($93.33{\pm}4.63%$), roots ($76.67{\pm}7.85%$), and calli ($80.00{\pm}7.43%$) when cultured on Gamborg B5 (B5) medium containing $10{\mu}M$ 6-benzylaminopurine (BA) + $1{\mu}M$ naphthalene acetic acid (NAA), $0.5{\mu}M$ BA + $5{\mu}M$ NAA, and $1{\mu}M$ BA + $10{\mu}M$ NAA, respectively. Shoot multiplication was superior when cultured in liquid rather than on solid medium and relatively high concentrations of BA, ranging from 5 to $10{\mu}M$. Efficient bulblet formation following root induction from shoot clumps was achieved with culture in liquid B5 medium containing 7% (w/v) sucrose. Regenerated bulblets were successfully acclimatized to ex vitro conditions with a greater than 95% survival rate. By this method, a maximum of 62 plantlets per receptacle could be propagated within 9 weeks of initial culture. The in vitro propagation system established in this study will promote A. hookeri biotechnology, including large-scale production of healthy and aseptic clones, preserving parental genotypes with desirable traits, and genetic manipulation to enhance medicinal value.
번행초(Tetragonia tetragonoides)의 잎 절편으로부터 기내(in vitro) 증식을 유도 하였다. 2 mg/L BA와 0.5 mg/L NAA가 조합 처리된 MS 기본배지에서 잎 절편으로부터 직접 기관형성 과정을 통하여 부정아가 형성 되었다. 유기한 부정아는 절취하여 2 mg/L NAA와 0.5 mg/L BA이 첨가된 MS배지로 옮겨 유묘의 대량 증식을 시도하였으며, 배양 3주 후 신초의 지속적인 성장을 위해 무기염의 농도가 두배로 증가된 2MS배지로 옮겨 배양 하였다. 증식된 신초로부터 발근은 식물성장조절물질이 첨가되지 않은 1/2MS와 MS배지 모두에서 이루어 졌다.
Ginseng zygotic embryos, seedlings, and exised cotyledonary nodes were cultured on Murashinge and Skoog's(MS) medium, supplemented with 6-benzyladenine(BA) and gibberellic acid(GA3) to induce flower buds. As the concenteration of nitrogen compounds in MS medium was reduced to half of its strength, the flowering frequency of zygotic embryos increased up to 90%. The optimum concentration of sucrose in the medium for flowering of seedlings was 30-60 g/1. In all cases flower buds were formed on elongated axillary branches from the cotyledonary nodes, while the apices remained vegetative. When zygotic embryos and excised cotyledonary nodes were cultured on the medium, supplemented with all possible combinations of BA, GA3, and abscisic acid(ABA) of 5 $\mu$M indole-3-acetic acid(IAA) in the above combinations did not affect flowering. These results suggest that cytokinins, gibberellins, and inhibitors play primary, permissive, and preventive roles, respectively, in the induction of flowering of ginseng.
Embryogenic callus (EC) was created from mature embryos of Larix kaempferi. With the mature embryos, keeping the culture in dark conditions throughout the experiment (38.2%) seemed to give better results than exposing them to 16 h light ($25{\mu}Em^{-2}s^{-1}$) for the first week (21.9%). EC was obtained most frequently from Quoirin and Lepoivre (LP) mediums with 1.0 mg/L 4-amino-3,5,6-trichloropicolinic acid (Picloram), plus 1.0 mg/L benzyladenine (BA) (62.8%) or Litvay's medium (LM) containing 1.0 mg/L p-chlorophenoxyacetic acid (pCPA) plus 1.0 mg/L BA (62.8%) treatment. In both cases, best results were obtained when zygotic embryos were cultured in darkness. As for the effective sucrose concentration on initiation of EC, 29.2 mM sucrose (38.6%) gave the best results.
Shoot induction system was developed in the recalcitrant plant species, Brassica rapa ssp. rapifera by using optimum selection of profit organ, phytohormone combination, seedling age and kind of culture container. Out of in vitro cultured leaf segment, petiole, hypocotyl, and cotyledon with petiole, only cotyledon with petiole derived from 4 day-old seedlings induced multiple shoot. The optimum combination of auxin and cytokinin for the multiple shoot induction was MS medium containing 5mg/L BA and 0.5mg/L NAA. The major factors for multiple shoot propagation were part of plant organ, age of seedling, and ratio of auxin and cytokinin. In addition, shoot regeneration was promoted in the 100ml Erlenmeyer flask compared with the $90mm{\times}20mm$ Petri-dish. The induced shoots formed roots easy on MS medium containing 0.1mg/L IBA and the whole plants were successfully cultivated in soil.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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