Bradyrhizobium japonicum 은 콩과 식물의 뿌리에 감염하여 뿌리흑을 형성 질소를 고정하는 독특한 능력을 갖는 토양 세균이며 미생물 비료제로 사용되고 있다. 본 연구에서는 저온에서 전처리한 B . japonicum 균주를 여러 가지 환경스트레스 조건에 노출하였을 때 생균수의 변화를 확인하였다. 저온 전처리는 16시간 동안 $4^{\circ}C$의 조건을 유지했다. 다양한 스트레스(알콜, 과산화수소, 고온, 건조)에 노출하였을 때, 저온 전처리한 것이 그렇지 않는 것보다 10~1,000배 정도 높은 생균수를 유지하였다. 이러한 내성중진 현상에 전처리 동안 새로운 단백질 합성이 수반되는 것을 단백질 합성 저해제 인 chloramphenicol을 전처리 과정에 포함하여 확인하였다. 저온 스트레스 내성에 관여하는 유전자를 B. japonicum genome 으로부터 중폭하였고 염기서열 분석을 실시하였다. 실험에서 확인된 B . japonicum의 CSP (Cold shock protein) 단백질의 부분적 아미노산 서열은 이미 확인된 다른 균주의 Csp 단백질과 유사함을 확인하였다.
Transposon Tn5 was used to induce random insertional mutations in Bradyrhizobium japonicum, a soybean endosymbiont. By genomic Southern blot analysis, transposition events were found to have occurred randomly throughout the B. japonicum genome. After screening 3, 626 mutants by auxotrophy test, a histidine auxotroph was isolated. Upon plant infection test, the His mutant showed a 3~4 day delay in nodule formation.
근류균과 두과작물의 공생에서 숙주결합성을 조사하기 위하여 대두 종자 및 및 유근으로부터 분리한 lectin과 근류균의 표피다당과의 결합성을 확인한 결과는 다음과 같다. 팔달, 백운 및 황금으로부터 분리한 종자선을 형성하였다. 대두 종자 lectin 및 뿌리추출물은 R. japonicum및 B. japonicum과 결합하였고 R. viceae와는 결합 하지 않았으며 완두의 lectin은 R. viceae와 결합하였으나 R. japonicum및 B. japonicum과는 결합 하지 않았다. B. japonicum과 R. viceae로 부터 분리한 세포표피 다당의 겔 여과한 결과 두개의 분획으로 각각 나타났다. B. japonicum으로 부터 분리한 표피다당은 대두의 종자 lectin과 결합하였으나 R. viceae로 부터 분리한 표피다당은 대두 lectin과 결합하지 않았다. 이상의 결과로 부터 근류균이 숙주세포와 결합할 때 숙주를 인식하는 초기 단계에서 lectin이 관여함을 추론할 수 있고 이것이 상호접종군을 형성하는데 매개역할을 하는 것으로 추정할 수 있었다.
콩 재배시(栽培時) 조속생육형(早速生育型)인 Sinorhizobium fredii의 접종제(接種劑) 이용가능성(利用可能性)을 검토코자 TAL 1781 등 9종의 S. fredii를 우리나라 재배콩 11품종(品種)에 접종시험(接種試驗)한 결과는 다음과 같았다. 시험(試驗)된 S. fredii는 모두가 광교에서 근류형성력(根瘤形成力)을 보였으나 단엽콩에서는 근류(根瘤)를 형성하지 못하였다. S. fredii TAL 1781과 TAL 1840, TAL 1899의 콩 건물생산량(乾物生産量)은 B. Japonicum YCK 213 및 USDA 110에 비해서 평균 53% 수준(水準)이었으며, S. fredii 균주(菌株) 중에서는 TAL 1781이 가장 우수하였다. 그리고 S. fredii는 B. japonicum USDA 110과 혼합접종(混合接種)했을 때 보다 YCK 213과 혼합접종(混合接種)했을 때에 더 많은 건물생산력(乾物生産力)을 보였다. S. fredii의 B. japonicum 대비(對比) 근류점유율(根瘤占有率)은 B. japonicum YCK 213과 혼합접종(混合接種)했을 때(8.3~26.7%) 보다 B. japonicum USDA 110과 혼합접종(混合接種)했을 때(10.0~30.0%) 더 높았다. 그러므로 S. fredii는 콩 건물생산력(乾物生産力) 및 근류형성(根瘤形成) 경합력(競合力) 면에서 B. japonicum보다 불량한 접종반응(接種反應)을 보여 콩의 근류균접종제(根瘤菌接種劑)로서의 실용성(實用性)이 낮음을 알 수 있었다.
콩 근류균(根瘤菌) B. japonicum의 취락형태(聚落形態)에 따라 항생제반응(抗生劑反應)과 혈청형(血淸型) 및 단백질(蛋白質) 전기영동(電氣泳動) 유형(類型)에 차이가 있을지 여부를 구명(究明)코자 우리나라 남부지방에 분포한 토착근류균(土着根瘤菌)을 대상으로 시험한 결과는 다음과 같았다. 1. 분리(分離)한 B. japonicum 120균주(菌株) 취락형태별(聚落形態別) 분포(分布)는 "Dry"형이 47%, "Wet"형이 41%, "Dry/Wet"형이 12%였다. 2. 항생제(抗生劑) 반응(反應)에 있어서 "Dry"형의 균주(菌株)는 chlorampenicole(200ug/ml)과 kanamycin(20ug/ml)에 대하여. "Wet"형은 erythromycin(100ug/ml)과 nalidixic acid(20ug/ml), spectinomycin sulphate(100ug/ml), streptomycin sulphate(10ug/ml), tetracycline(100ug/ml)에 대하여 각각(各各) 높은 내성(耐性)을 보였다. 3. B. japonicum의 취락형태별(聚落形態別)로는 혈청형(血淸型)의 구분(區分)을 보이지 않았으나, 각 혈청형(血淸型)에 속하는 균주중(菌株中)에는 혈청모균주(血淸母菌株)와 동일한 취락형태(聚落形態)를 가진 것이 많았다. 4. B. japonicum의 혈청학적(血淸學的) 분류결과(分類結果)는 단백질전기영동상(蛋白質電氣泳動上)의 밴드유형과 같았으며 특히, 복잡성(複雜性)에 있어서는 가장 복잡하였던 항생제반응(抗生劑反應) 유형(類型)과 지나치게 단순하였던 취락형태적(聚落形態的) 구분이 중간정도(中間程度)를 나타내어 실용성(實用性)을 보였다. 5. B. japonicum의 취락형태별(聚落形態別) 특성은 항생제반응(抗生劑反應)에서는 특이적(特異的)이었으나 혈청학적(血淸學的) 특성(特性) 및 단백질(蛋白質) 전기영동(電氣泳動) 유형(類型)에서는 다양(多樣)한 경향이었다.
차풀(Cassia nomame)의 뿌리혹 공생세균인 Bradyrhizobium sp.(Cassia) CN9135의 nodD1 유전자를 중합효소 연쇄반응을 통해 크로닝하여 그 염기서열을 조사하였다. 염기서열로부터 유추된 NodD1 단백질은 Bradyrhizobium elkanii와 가장 높은 95%의 상동성을 나타내었다. 뿐만 아니라 nodD2 사이의 intergenic space 부위의 염기서열도 B. japonicum을 포함하는 다른 bradyrhizobia와는 상동성이 거의 없었으나 B. elkanii와는 88%의 높은 상동성을 나타내었다. 우리의 실험 결과는 Bradyrhizobium sp.(Cassia)가 B. elkanii와 매우 근연한 관계임을 보여 주고 있다.
콩으로부터 분리한 140균주의 근류균은 25균주(17.9%)가 Rhizobium fredii로 115 균주(82.1%)가 Brady-rhizobium japonicum으로 동정되었다. R. fredii에 속하는 분리 균주의 생존 pH 범위는 4..5∼9.0이었고 B. japonicum의 생육 pH 범위는 5.5∼8.0로 비교적 좁게 나타났다. B. japonicum에 속하는 98균주 중에서는 53균주(54%)가 IAA를 생산하지 않는 GT I group으로, 45균주(46%)는 IAA를 생산하는 GT II group으로 명확하게 구분되었으며, 항생물질에 대한 내성 유무에 의해 10개의 group으로 구분되었다.
A lipopolysaccharide (LPS) defective mutant of Bradyrhizobium japonicum was characterized in terms of its cell surface hydrophobicity (CSH). By monitoring the kinetics of adhesion to hexadecane the LPS mutant was found to be far more hydrophobic than the wild type strain; the removal coefficients were 4.65 $min^{-1}$ for the mutant, as compared with only 2.40 $min^{-1}$ for the wild type. The possible role of cell surface hydrophobicity of B. japonicum in nodulation process is discussed.
Study on effectiveness of Bradyrhizobium japonicum on soybean [Glycine max (L.) Merr.], local cultivar 'Sathiya' were carried out in the garden soil of Trib-huvan University. Different parameters like nodulation, chlorophyll content in fresh leaves and growth of plant in inoculated and uninoculated plant was studied. Pot experiment was conducted in the green house to evaluate the effectiveness of B. japonicum on soybean. It was observed that B. japonicum inoculation increased the number of nodules, shoot length of plant and total chlorophyll content in fresh leaves of soybean plant. However, root length was decreased in all inoculated plants.
우리나라 밭토양에서 콩의 공중질소 이용량을 증대시킬 수 있는 기초자료를 얻고자 수원, 익산, 밀양, 고성, 남제주 지역 토착 B. japonicum의 콩 친화성과 혈청형을 조사하였다. 단원콩 등 8품종의 콩에서 B. japonicum의 공생적 친화성은 균주의 분포지역별로 큰 차이를 보였다. 지역별 B. Japonicum의 숙주 친화성은 고성 > 밀양 > 수원토양의 균주순으로 우수한 편이었다. 익산과 남제주토양 균주들츤 대체로 불량하였는데 특히, 단원콩과 장경콩, 은하콩 등에서 심한 경향이었다. 그러나, 근류무게와 콩 건물생산량 사이의 회귀식에서 본 결정계수값($R^2$)은 고성토양(0.51)에서 가장 높았고, 다음으로는 밀양토양(0.45), 익산토양(0.38), 남제주토양(0.28), 수원토양(0.24) 순이었다. B. japonicum의 혈청형은 YCK 117형(34.1%), YCK 141형 (6.5%), YCK 321형 (6.5%), YCK 445형 (4.7%), YCK 338형 (2.9%), YCK 150형 (1.2%). YCK 258형(0.6%) 등 7종 이상이었다. 그리고, YCK 117혈청형은 남제주토양에서 51.9%, 고성토양에서 45.8%, 익산토양에서 41.7%, 수원토양에서 34.2%, 밀양토양에서는 11.1%의 비율로 분포하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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