라임병의 원인균인 Borrelia burgdorferi에 대하여 각 균종의 표준균주와 진드기에서 추출한 DNA를 template로 PCR을 실시한 후 그 증폭산물을 Alu I으로 처리한 restriction fragment length polymorphism (RFLP) 방법으로 각 균종의 연관성을 조사하고자 하였다. 표준균주로 RFLP를 실시한 결과 B. burgdorferi sensu stricto와 B. garinii의 RFLP 형태 (50 bp, 70 bp, 150 bp)가 유사하였으며 B. afzelii에서는 다른 RFLP 형태 (50 bp,110 bp,150 bp)를 관찰하였다. 그 중 B. afzelii KK-1과 B. garinii HPI은 새로운 RFLP형태를 보여 B. afzelii자 B. garinii는 각각 2 type의 subgroup으로 분류할 수 있었다. 진드기 DNA에서는B. afzelii를 포함한 각 균종에 대하여 모두 유사한 RFLP형태를 보였는데, 진드기 DNA에서 확인된 B. afzelii는 KK-1과 같은 군에 속하는 것으로 사료되었다.
This study was conducted to survey of Ehrlichia (E.) canis and Borrelia (B.) burgdorferi antibodies among clinically healthy German shepherd dogs (116 females and 120 males) using a ELISA kit (SNAP 3Dx; IDEXX Laboratories, USA) in Korea. Whole blood samples are collected from the 236 dogs and are tested to detect E. canis and B. burgdorferi antibodies by using ELISA kit (SNAP 3Dx; IDEXX Laboratories, USA). Confidence interval comparisions revealed that dogs of 4-6 years have higher prevalence with a seropositive result (CI=0.17-0.45) in E. canis than the other age groups but there are no differences among age groups in B. burgdorferi. Also, no differences with a seropositive result were found among different regions in E. canis and B. burgdorferi antibodies. In conclusion, this study was the first large scale survey of canine E. canis and B. burgdorferi antibodies in Korea and provide an useful reference for clinicians.
현재 라임병을 진단을 위해 국내에서 이루어지고 있는 연구 방법은 원인균인 B. burgdoferi 항원에 대한 항체를 검출하는 혈청학적인 방법이다. 하지만 대부분의 경우 항원으로 사용되는 균주가 다른 나라에서 분양받은 균주이므로 이때 얻어진 결과를 유추 해석하는데 어려움이 수반되고 있다. 본 실험에서는 국내 분리균주에 대한 항체를 검출하는 조건을 확립하고, 이를 토대로 하여 불명열 환자의 항체가 항원에 반응하는 양상을 파악함으로써 국내 분리균주를 이용한 혈청학적인 분석방법으로 국내 라임병 진단에 보다 적합한 조건을 제시하고자 하였다. 본 실험 결과 병원에 의뢰된 불명열 환자의 혈청이 B. burgdoferi sensu lato 중 3가지 균종의 항원에 대해 평균 약 8% 정도의 양성 반응을 보이는 것으로 미루어 볼 때 이 들 중 B. burgdorferi에 의한 열성 질환 감염증이 존재할 것으로 사료된다. 특히 국내 분리균주 중 가장 많이 분리된 바 있는 B. afzelii에 대한 양성반응이 14.3%나 나타난 것으로 미루어 아직 밝혀지지 않은 국내 발생 라임병의 원인균은 주로 B. afzelii일 가능성이 가장 크다고 할 수 있을 것이다. 또한 효소결합면역 측정법 (ELISA)을 이용하여 양성으로 판별된 혈청에 대해 immunoblotting법을 실시한 결과 주로 41kDa (ftagellin), 27kDa, 31kDa (OspA), 34kDa (OspB)에서 band가 나타났다. 본 실험의 결과 국내 열성질환 환자들 중 라임병균에 의한 감염증이 있을 것으로 사료되므로 국내 분리균주를 항원으로 사용한 효소결합면역 측정법 (ELISA), immunoblotting법과 같은 혈청 학적 진단이 이루어져야 한다고 사료된다.
국내에서 채집한 진드기의 라임병 및 ehrlichiosis 원인체 보균 상태를 조사하기 위하여 총 516마리 (Ixodes spp. 22마리 , Haemaphysalis spp. 494마리)의 ixodid 진드기를 봄과 가을에 걸쳐 강원도 고산지대 일원에서 채집하였다. 수집한 진드기에서 DNA를 추출·정제한 후 추출한 DNA를 template로 이용하여, Borrelia burgdorferi sensu lato 및 Ehrlichia spp.에 특이하게 반응하도록 제작한 primer를 이용한 중합효소연쇄반응 (polymerase chain reaction, PCR)을 실시하였으며, 이 결과를 oligonucleotide probe를 사용한 southern blotting을 통하여 다시 확인하였다. 총 516마리의 진드기중 B. burgdorferi sensu lato DNA 양성인 진드기는 68 (13.2%)마리 (B. burgdorferi sensu stricto, 2; B. afzelii, 1; B. garinii, 33; B. tanukii, 8; B. turdae, 4)로 나타났으며 이 중 37 (7.2%)마리의 진드기는 southern blot analysis에서도 양성으로 확인되었다. 또한 101 (19.2%)마리의 진드기가 Ehrlichia spp.에 대한 PCR에서 양성이었으나, 이들 중 25 (4.8%)마리만이 southern blot analysis에서 양성으로 확인되었다. 그러나 사람의 병인체로 추정되는 human granulocytic ehrlichiosis (HGE) agent DNA를 보균한 진드기는 확인되지 않았다. 한편 라임병균과 ehrlichiosis원인체를 동시에 보균한 것으로 밝혀진 진드기가 3마리에서 (0.6%) 확인되어, 국내에서도 진드기 교상시 이들 두 가지 열성질환이 동시에 감염될 가능성이 있는 것으로 사료됨으로 진드기 매개성 열성질환에 대한 적절한 진단법 등을 보다 체계적으로 연구하여야 할 것으로 판단된다.
The visceral dissemination of Borrelia burgdorferi in New Zealand White rabbits was evaluated following intradermal inoculation of $1{\times}10^8$ spirochetes. We inoculated Borrelia burgdorferi B31, B garinii KW1 and B afzehlii S13, respectively, and monitored the dissemination in the experimentally infected rabbits for 28 days. In the B burgdorferi B31-challenged group, the spirochetes were completely cleared in rabbits at day 1 and visceral dissemination was not demonstrated. However, B garinii KW1 and B afzelii S13 were found to successfully disseminate in visceral organs of rabbits during the experiment period of 28 days. And experimentally infection-derived immunological responses in rabbits were identified with enzyme-linked immunosorbent assay and immunoblot analysis. Based on these results, the differences in the virulence of Lyme borrelial strains were proved in rabbit model.
Lyme disease is a tick-borne zoonotic infectious disease caused by Borrelia burgdorferi. The present study assessed the infection status of B. burgdorferi among horses reared in Korea using ELISA and PCR. Between 2009 and 2013, blood samples were collected from 727 horses throughout Korea. Data for each animal including age, gender, breed, and region of sample collection were used for epidemiological analysis. Overall, 38 (5.2%; true prevalence: 5.5%) of 727 horses were seropositive by ELISA. There were statistically significant differences according to breed and region (P<0.001) whose differences might be attributed to the ecology of vector ticks and climate conditions. Using 2 nested PCR, none of the samples tested positive for B. burgdorferi. Thus, a positive ELISA result can indicate only that the tested horse was previously exposed to B. burgdorferi, with no certainty over the time of exposure. Since global warming is likely to increase the abundance of ticks in Korea, continuous monitoring of tick-borne diseases in Korean horses is needed.
Gitte S. Jensen;Dina Cruickshank;Debby E. Hamilton
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제33권6호
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pp.715-723
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2023
Microbial biofilms are resilient, immune-evasive, often antibiotic-resistant health challenges, and increasingly the target for research into novel therapeutic strategies. We evaluated the effects of a nutraceutical enzyme and botanical blend (NEBB) on established biofilm. Five microbial strains with known implications in chronic human illnesses were tested: Candida albicans, Staphylococcus aureus, Staphylococcus simulans (coagulase-negative, penicillin-resistant), Borrelia burgdorferi, and Pseudomonas aeruginosa. The strains were allowed to form biofilm in vitro. Biofilm cultures were treated with NEBB containing enzymes targeted at lipids, proteins, and sugars, also containing the mucolytic compound N-acetyl cysteine, along with antimicrobial extracts from cranberry, berberine, rosemary, and peppermint. The post-treatment biofilm mass was evaluated by crystal-violet staining, and metabolic activity was measured using the MTT assay. Average biofilm mass and metabolic activity for NEBB-treated biofilms were compared to the average of untreated control cultures. Treatment of established biofilm with NEBB resulted in biofilm-disruption, involving significant reductions in biofilm mass and metabolic activity for Candida and both Staphylococcus species. For B. burgdorferi, we observed reduced biofilm mass, but the remaining residual biofilm showed a mild increase in metabolic activity, suggesting a shift from metabolically quiescent, treatment-resistant persister forms of B. burgdorferi to a more active form, potentially more recognizable by the host immune system. For P. aeruginosa, low doses of NEBB significantly reduced biofilm mass and metabolic activity while higher doses of NEBB increased biofilm mass and metabolic activity. The results suggest that targeted nutraceutical support may help disrupt biofilm communities, offering new facets for integrative combinational treatment strategies.
Background: Emergent and re-emergent canine tick-borne infections are attracting increasing attention worldwide. The rise in pet ownership and the close relationship between dogs and their owners are the most concerning factors because dogs may act as competent reservoirs for human tick-transmitted infectious agents. Objectives: This study contributes to the epidemiological surveillance of canine tick-transmitted infections with zoonotic risk in the Republic of Korea (ROK) by investigating the seroprevalence of the pathogens, Anaplasma spp., Borrelia burgdorferi, and Ehrlichia canis. Methods: Four hundred and thirty whole blood samples from domestic dogs were collected in seven metropolitan cities and nine provinces in the ROK and tested using SensPERT Ab test kits (VetAll Laboratories®) to detect seroreactive animals. Results: The seroprevalence rates identified were 9.8% (42/430) for Anaplasma spp., 2.8% (12/430) for B. burgdorferi, and 1.4% (6/430) for E. canis. The risk factors evaluated in this study that could be associated with the development of a humoral immune response, such as sex, age, and history of tick exposure, were similar. There was only one exception for dogs seroreactive to Anaplasma spp., where the risk factor "tick exposure" was statistically significant (p = 0.047). Conclusions: This serological survey exhibited the widespread presence of Anaplasma spp., B. burgdorferi, and E. canis throughout the ROK. Hence, dogs may play a key role as the sentinel animals of multiple zoonotic infectious agents in the country.
Spirochetes were isolated from the midgut of Ixodes persulcatus ticks captured at Chungju, Korea and identified as Borrelia afzelii strains by polymerase chain reaction. To determine the pathogenicity of the B. afzelii strains isolated in Korea, the microbiological and pathological features of Lyme disease were observed in C3H/He mice after intraperitoneal inoculation of the fresh isolate of B. afzelii strain. The results are summarized as follows 1) The Borrelia were detected in the tissues of heart, spleen, kidney, urinary bladder and knee joint within 7 days after inoculation of infection by dark field microscopic examination. The isolation rate from heart, urinary bladder and joint was significantly higher than the rate from spleen, kidney, and blood samples. 2) The Borrelia was detected in heart muscle by indirect immunofluorescent antibody test. 3) Antibody to the Borrelia was detected as early as one week after inoculation. 4) The marked tropism of the Borrelia was observed in myocardial, urinary tract and joint tissue. The main pathological features are inflammation in tissues of heart, kidney, joint and urinary bladder. From these results, the Borrelia afzelii strain isolated in Korea were determined as pathogenic strain.
본 연구는 대전시와 강원도에서 사육중인 개 252두 (암컷: 127두, 수컷: 125두, 실외견: 147두, 실내견: 105두)를 대상으로 ELISA kit (SNAP 4Dx, IDEXX Lab. USA)를 이용하여 심장사상충증, 아나플라즈마증, 보렐리아증 및 얼리키아증에 대한 혈청학적 방법으로 발생율을 조사하였다. 아나플라즈마증은 암컷에서 실내견보다 실외견에서 유의성 있는 높은 감염율을 나타내었다. 또한 얼리키아증에서는 연령별로 분석한 결과, 실외견에서 실내견보다 4세미만, 4-7세사이, 7세 이상에서 각각 유의성 있는 높은 감염율을 나타내었다. 본 연구는 임상가들에게 유용한 임상자료로 활용될 것으로 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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