The present study was performed to identify pathogenic factors of Chlamydia trachomatis, which invade the host cell membrane. We prepared monoclonal antibody against C. trachomatis and searched for pathogenic factors using this antibody, and subsequently identified the surface components of the elementary body of C. trachomatis, i.e., major outer membrane protein (MOMP), lipopolysaccharide (LPS), and two other surface exposure proteins. These proteins are believed to be important in the pathogenesis of host cell chlamydial infection. Additionally, to identify factors related to the host cell and C. trachomatis, we prepared C. trachomatis infected and non-infected McCoy cell extracts, and reacted these with anti-chlamydial LPS monoclonal antibody. We found that anti-chlamydial LPS monoclonal antibody reacted with a 116 kDa proteinaceous McCoy cell membrane component.
Objectives : Socheongryong-Tang(小靑龍湯, SCRT), a herbal remedy, has been widely used to treat respiratory disease such as cough and asthma in Oriental countries. Recent years SCRT was known as anti-allergic agent. However, its therapeutic mechanisms including immunoglobuline such as IgE, IgG1, IgG2a productions are unclear. Methods : We investigated the effects of SCRT on levels of antigen specific total antibody, IgE, IgG1, IgG2a using ELISA method in serum from allergen-induced asthma mice. Results : SCRT decreased level of antigen specific IgE significantly. And SCRT treated mice showed downward tendency of IgG1, a Th1 relative antibody, level. But, SCRT did not affect levels of antigen specific total antibody and IgG2a, a Th1 relative antibody. Conclusions : we demonstrated the strong possibility of SCRT as a complementary or alternative drug to western drug also demonstrated that regulation of Th1/Th2 imbalance may be one of mechanism contributed to treatment for respiratory disease by SCRT.
Purpose: Rabies is a fatal but preventable disease with proper pre-exposure anti-rabies vaccination (ARV). Dogs, as household pets and strays, are the reservoir and vector of the disease, and dog bites have been associated with human rabies cases in Sri Lanka over the past few years. However, other susceptible species having frequent contact with humans may be a source of infection. One such species is sheep and immunity following ARV has never been tested in sheep reared in Sri Lanka. Materials and Methods: We have tested serum samples from sheep reared in the Animal Centre, Medical Research Institute of Sri Lanka for the presence of anti-rabies antibodies following ARV. Sheep serum samples were tested with Bio-Pro Rabies enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) antibody kits used for the first time in Sri Lanka and our results were verified by a seroneutralization method on cells (fluorescent antibody virus neutralization, FAVN test) currently recommended by World Organization for Animal Health and World Health Organization. Results: Sheep received annual ARV and maintained high neutralizing antibody titers in their serum. No maternal antibodies were detected in lamb around 6 months of age. Agreement between the ELISA and FAVN test, i.e., coefficient concordance was 83.87%. Conclusion: Annual vaccination in sheep has an effect on maintaining adequate protection against rabies by measurements of anti-rabies antibody response. Lambs need to be vaccinated earlier than 6 months of age to achieve protective levels of neutralizing antibodies in their serum. Introducing this ELISA in Sri Lanka will be a good opportunity to determine the level of anti-rabies antibodies in animal serum samples.
Among the various receptor molecules discovered so far the ${\beta}$2-adrenergic receptors have been regarded as excellent model systems for the so called 7 transmembrane helix receptor and have been the focus of extensive studies. For the analysis of receptor structure and function a monoclonal antibody plays a crucial role, thus providing useful tools for the study of receptor. However, because of the minute quantity of receptor molecules which could be obtained from natural sources, the generation of specific monoclonal antibody against receptor molecules from the purified receptors has been regarded as virtually impractical in consideration of cost and experimental times. The purpose of the present study was to generate and characterize a monoclonal antibody against human ${\beta}$2-adrenergic receptor. For the production of antibody, C-terminal regions of the human ${\beta}$2-adrenergic receptor was produced as a fusion protein with Glutathion S-transferase (GST) in E. Coli. The expression of the fusion protein was identified by SDS-PAGE and Western blot using monoclonal anti-GST antibody. The fusion protein was purified to an apparent homogeniety by affinity chromatography with Glutathion Sepharose CL-4B and used as an antigen for the immunization of BALB/C mice. The Production of monoclonal antibody was achieved by fusion of the immunized spleen cells and SP/2-0 myeloma cells. Positive hybridomas were screened by ELISA and were cloned by two consecutive rounds of limiting dilution. The monoclonal antibody produced in this study (mAb${\beta}$C02) was IgM type and purified by immunoaffinity chromatography using anti-mouse IgM agarose as an affinity matrix. MAb${\beta}$C02 showed strong and specific immunoreactivity against both the fusion protein and human ${\beta}$2-adrenergic receptor in ELISA and Western blot. The molecular weight of immunoreactive band was 64 kDa and exactly coincided with the previously reported molecular weight of ${\beta}$2-adrenergic recepters. The results of the present study suggest that mAb${\beta}$C02 may be used for the study of receptor function and regulation in normal or nonphysiological status.
Antibody screening and identification tests before blood transfusion are important because unexpected red antibodies can cause acute or delayed hemolytic transfusion reactions. Although a tube method was used for detecting unexpected antibodies, a column agglutination method has recently been used because of its simple procedure and a high detection of warm antibodies. This study investigated the frequency and distribution of unexpected antibodies in transfusion candidates during the recent 5 years, and transfusion characteristics in the identified cases. From January 2005 to December 2009, 46,923 sera of the cases from E hospital were screened and 98 sera were identified by the DiaMed-ID System. 272 cases (0.58%) showed positive results out of all 46,923 cases that underwent unexpected antibodies screening. Among them, unexpected antibodies were identified in 98 cases. The anti-Rh antibodies included in warm antibodies were the most frequently detected in 47 cases (47.96%). Anti-Lewis and anti-MNSs antibodies were detected in 11 cases (11.22%) and 6 cases (6.12%), respectively. Unidentified antibodies were detected in 6 cases (6.12%). Among the patients with unexpected antibodies, 43 cases (43.88%) had a history of previous transfusion. Anti-E was the most frequently detected antibody (4/14 cases, 30.77%) in the cases who had a previous history of transfusion and showed different screening results from negative to positive, This study may provide the basic data for the frequency and characteristics of red cell antibodies.
Edema disease (ED) in pigs is enterotoxemia caused by Shiga toxin type 2e (Stx2e)-producing Escherichia coli (STEC) and frequently occurs in young piglets. Therefore, ED causes enormous economic losses in pig farms. In this study, a modified Stx2e (mStx2e) antigen was expressed and purified using commercial E. coli expression system. Monoclonal antibody was serviced by Ynto Ab Inc., using Phage Display Technique. Anti-Stx2e antibodies in piglets were measured by indirect ELISA using mStx2e antigens. Naive Stx2e in piglets were detected by Sandwich ELISA using Stx2e-monoclonal antibodies and commercial Stx2e-polyclonal antibodies. Among 3,480 piglets, anti-Stx2e antibodies were observed in 2,573 piglets. The 49.4% among 830 piglet serum samples possessed 0.625 ㎍/mL or more of Stx2e proteins. The 18.3% of 830 sera had 0.313 ㎍/mL of Stx2e proteins. The 32.3% of 830 samples held 0.156 ㎍/mL or less of Stx2e proteins. These results show that indirect ELISA using mStx2e antigen and Sandwich ELISA using Stx2e-monoclonal and polyclonal antibodies can be useful to detect ED in piglets.
Background: The anti-programmed death 1 (PD-1) antibody has led to durable clinical responses in a wide variety of human tumors. We have previously developed the caninized anti-canine PD-1 antibody (ca-4F12-E6) and evaluated its therapeutic properties in dogs with advance-staged oral malignant melanoma (OMM), however, their therapeutic effects on other types of canine tumors remain unclear. Objective: The present clinical study was carried out to evaluate the safety profile and clinical efficacy of ca-4F12-E6 in dogs with advanced solid tumors except for OMM. Methods: Thirty-eight dogs with non-OMM solid tumors were enrolled prospectively and treated with ca-4F12-E6 at 3 mg/kg every 2 weeks of each 10-week treatment cycle. Adverse events (AEs) and treatment efficacy were graded based on the criteria established by the Veterinary Cooperative Oncology Group. Results: One dog was withdrawn, and thirty-seven dogs were evaluated for the safety and efficacy of ca-4F12-E6. Treatment-related AEs of any grade occurred in 13 out of 37 cases (35.1%). Two dogs with sterile nodular panniculitis and one with myasthenia gravis and hypothyroidism were suspected of immune-related AEs. In 30 out of 37 dogs that had target tumor lesions, the overall response and clinical benefit rates were 6.9% and 27.6%, respectively. The median progression-free survival and overall survival time were 70 days and 215 days, respectively. Conclusions: The present study demonstrated that ca-4F12-E6 was well-tolerated in non-OMM dogs, with a small number of cases showing objective responses. This provides evidence supporting large-scale clinical trials of anti-PD-1 antibody therapy in dogs.
Sinichengpaeum has been widely used in the oriental medical treatment of nasal diseases. These studies were performed done to investigate the effect of Sinicheng- paeum on the anti-allergic action We studied the vascular permeability response induced by the histamine and serotonin injection(allergy Ⅰ type), homologous PCA provoked by the IgE-like antibody against EWA(allergy Ⅳ type), contact dermatitis induced by picryl chloride(allergy Ⅳ type), delayed type hypersensitivity response to SRBC (allergy Ⅳ type), and the amount of eosinophil and IgE. The results were as follows: 1. The effect of Sinichengpaeum on vascular permeability responses to intradermal histamine and serotonin were significant. 2. In the homologous PCA provoked by the IgE-like antibody against white egg albumin, Sinichengpaeum showed a significant effect. 3. In the delayed type hypersensitivity responses to picryl chloride, Sini-chengpaeum provoked a significant effect. 4. After reaction provoked by picryl chloride, Sinichengpaeum showed an insignficant effect on amount of eosinophil, but a significant effect in IgE amount. 5. In the delayed type hypersensitivity responses to SRBC, Sinichengpaeum provoked a significant effect. 6. After reaction provoked by SRBC, Sinichengpaeum showed a significant effect on amount of cosinophil, but an insignificant effect in IgE amount.
Since the role of CD40 on the interleukin-4(IL-4) -induced B cell activation has been strongly implicated in the agumentation of IgE production and response, we have investigated the intracelluar signaling pathways utilized by IL-4 and CD40 for type II IgE receptor (CD23) expression. IL-4 and anti-CD40 antibody treatment of human B cells, independently caused a rapid induction of CD23 gene activation within 2 h. There was a noticeable synergism between the action of the two agents inducing CD23 expression: the addition of anti-CD40 to the IL-4-treated culture significantly agumented the IL-4-induced CD23 on both mRNA and surface protein levels, and the inclusion of IL-4 in the anti-CD40-treated cells caused a further increase of CD23 expression far above the maximal level induced by anti-CD40. Protein tyrosine kinase (PTK) inhibitors effectively suppressed the both IL-4- and anti -CD40-induced CD23 expression. whereas protein kinase C (PKC) inhibitors had no effects. Electrophoretic mobility shift assays (EMSA) have shown that IL-4 and anti-CD40 induce the activation of NF-IL-4 and $NF-_{K}B$, respectively, binding to the CD23 promoter, both in a PKC-independent and PTK-dependent manner. These data suggest that the synergistic activation of CD23 gene expression by IL-4 and anti-CD40 is mediated by co-operative action of distinct nuclear factors. each of which is rapidly activated via PKC-independent and PTK-dependent process.
배경: 대부분의 임상검사가 자동화되는 추세이나 혈액은행 검사는 여전히 수작업에 의존하고 있다. 여러 자동화장비가 개발되어 활용되고 있으며 최근 면역혈액검사를 위한 자동화장비인 IH-1000 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)이 소개되었다. 이번 연구에서는 IH-1000 장비의 ABO 및 Rh 혈액형 검사와 비예기항체 선별검사에 대한 성능을 평가하려고 한다. 방법: 2011년 10월에 의뢰된 373건의 ABO 및 RhD 혈액형 검사와 303건의 비예기항체 선별검사를 대상으로 하였다. ABO 및 RhD 혈액형 검사는 슬라이드법과 시험관법을 사용하였고 비예기항체검사는 미세원주응집법(DiaMed-ID system)을 사용하여 IH-1000의 결과와 비교하였다. 결과: ABO 및 RhD 혈액형 검사에서는 두 방법 간 100%의 높은 일치율을 보였고 비예기항체 선별검사에서는 두 방법에서 모두 양성을 보인 검체가 10건(anti-E+c 4건, anti-E 3건, anti-D 1건, anti-M 1건, anti-Xg 1건)이었고 모두 음성을 보인 검체는 289건으로 98.7%의 일치율을 보였다. IH-1000의 민감도 및 특이도는 각각 90.9%였다. 결론: IH-1000은 기존에 사용하던 수기법과 비교하여 ABO 및 Rh 혈액형 검사와 비예기항체 선별검사에서 높은 일치도를 보였다. 따라서 혈액은행에서의 수혈 전 일상검사에 자동화 장비인 IH-1000을 사용할 수 있을 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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