Purpose Renin is a proteolytic enzyme synthesized and secreted from epidermal(juxtaglomerular) cells in kidney. Renin acts on the renin substrate angiotensinogen to produce angiotensin I, and then angiotensin II is produced by the action of angiotensin converting enzyme. This causes the adrenal glands to boost blood pressure (vasoconstriction) and promote aldosterone secretion. While Plasma renin activity (PRA) is to test angiotensin I, the active renin concentration (ARC) is a renin test directly. They have different test methods and their own substrates. However, these two methods are sometimes interpreted as the same as a result. The purpose of this study was to evaluate the usefulness of the ARC test by comparing the results between PRA and ARC. Materials and Methods For the diversity of the experiment, 26 samples were requested to test with PRA(TFB company) and ARC(Cisbio company) to other institution. We compared and analyzed PRA(Immunotech company) and ARC(Cisbio company) tests using 28 samples from September $15^{th}$ to October $13^{th}$ in 2017. The statistical analysis method for PRA/ARC evaluated the usefulness using Microsoft Excel program by verifying a correlation analysis of Aldosterone/PRA ratio and a correlation analysis of Aldosterone/ARC ratio and conducting T-test. Results The regression equation of the PRA(Immunotech company)/ARC(Cisbio company), which was tested in the department, was y = 0.0619x + 0.4615 and the correlation coefficient was 0.73. The regression equation of the PRA(TFB company)/ARC(Cisbio company), which was tested in the other institution, was y = 0.0888x + 0.3316 and the correlation coefficient was 0.91. In addition, The regression equation of Aldosterone / PRA ratio and Aldosterone / ARC ratio was y = 0.875x - 11.688 and the correlation coefficient was 0.87. Plus T - test showed no significant difference (P>0.05). Conclusion Both tests showed a strong positive correlation, but this only represents the strength and direction of the relationship between the two tests. Furthermore, the actual results showed somewhat differences. It is presumed that the measured value was influenced by the endogenous renin group mass in the plasma, the condition of the enzyme reaction and the kind of the inhibitor. When the active renin concentration (ARC) test is performed, it is useful to distinguish between the two tests as they are complementary.
본 연구는 구기자 요구르트의 생리활성 기능을 확인하기 위하여 항산화 활성, ACE 저해효과, $\alpha$-glucosidase 저해 활성을 조사하였고, 실험동물을 이용한 혈중 콜레스테롤 및 혈중 면역글로블린 함량도 조사하였다. 구기자 추출액 첨가 요구르트의 항산화 활성은 물 추출물보다 methanol 추출물에서 더 높은 항산화 활성능을 보였으며, 특히 구기엽 추출액 첨가 요구르트에서 83.85%의 높은 활성능을 보였다. ACE 저해효과는 구기자 추출액 첨가 요구르트의 경우 물 추출물과 methanol 추출물 모두가 ACE 저해능이 높은 것으로 나타났다. $\alpha$-glucosidase 저해 활성은 구기자, 구기엽 및 지골피 추출액 4% 첨가 요구르트에서 methanol 추출물의 경우 각각 8.6%, 7.3%, 8.8%의 $\alpha$-glucosidase 저해능을 나타냈다. 구기자 추출액 4% 첨가 요구르트 및 지골피 추출액 4% 첨가 요구르트를 섭취한 rat의 혈중 콜레스테롤 농도 측정 결과는 일반 요구르트 섭취군, 구기자 추출액 첨가 요구르트 섭취군 및 지골피 추출액 첨가 요구르트 섭취군은 대조구인 요구르트 무섭취군 혈중 콜레스테롤 농도보다 약 25% 정도 줄어 들었으나, 일반 요구르트 섭취군, 구기자 추출액 첨가 요구르트 섭취군 및 지골피 추출액 첨가 요구르트 간의 콜레스테롤 농도는 거의 변화가 없었다. 혈중 면역글로블린(IgG) 측정결과는 지골피 추출액 첨가 요구르트 섭취군은 무첨가 요구르트 섭취군과 구기자 추출액 첨가 요구르트 섭취군 보다 일정한 수준으로 30일간 혈중 면역글로블린 수치가 다소 높은 것으로 나타났다.
Renal compensatory adaptation caused by ablation of a part of renal mass has long been known in the field of the compensatory renal hypertrophy or hyperplasia. Many reports were found on the chronic mechanisms on the compensatory renal hyperfunction after exclusion of the contralateral kidney. However the mechanism(s) of the acute compensatory hyperfunction after contralateral exclusion has not yet been clarified. In the present experiment, we have tried to prove the possibility of the involvement of the renin-angiotensin system and/or prostaglandin system in the control mechanism of the acute compensatory renal hyperfunction after contralateral kidney exclusion. There were found different responses of the renal hyperfunction by contralateral renal pedicle or ureteral occlusion. Contralateral renal pedicle or ureteral occlusion caused a sustained increases of the urinary volume, sodium and potassium excretion, while the magnitude of the changes was different quantitatively by the maneuvers. Blood collection affected on the acute compensatory renal responses after ureteral as well as renal pedicle occlusion. Plasma prostaglandin $E_2$ level was not changed by the contralateral renal pedicle or ureteral occlusion. Urinary excretion of Prostaglandin $E_2$, the indices of renal prostaglandin biosynthesis, was not changed by the contralateral renal pedicle occlusion, but increased without significance by the contralateral ureteral occlusion. Acute renal compensatory responses after contralateral renal pedicle occlusion were blocked by the pretreatment of indomethacin. Plasma renin activity increased after contralateral ureteral occlusion, but the pattern of the increases was the same as in the time-control group. Plasma renin activity after contralateral renal pedicle occlusion did not change by the time sequence. SQ 20,881, an angiotensin I converting enzyme inhibitor, blunted the contralateral renal responses after the renal pedicle occlusion. Bilateral renal denervation abolished the contralateral renal responses after the renal pedicle occlusion. The above data suggest that there is no direct evidence to support the involvement of the renin-angiotensin system and/or prostaglandin system for the acute compensatory renal hyperfunction after contralateral kidney exclusion, and that the functional changes of the intact kidney may be caused by a humoral substances, or other mechanisms by afferent renal nerve activity originating from the treated kidney.
단메밀과 콩 등으로부터 생리기능성 물질을 추출하여 건강식품을 개발하고자 먼저 물과 에탄올을 사용하여 extracts를 추출한 후 엔지오텐신 전환효소 (ACE) 저해활성과 항산화활성 및 SOD-유사활성 등을 측정하였다. 단메밀의 ACE저해 활성과 tyrosinase 저해 활성은 물 추출물에서 각각 53%와 58%로 에탄을 추출물보다 더 높았고 전자공여능은 에탄을 추출물에서 제일 높은 72%를 보였다. 검정종 1호와 태광콩의 ACE 저해 활성과 전자공여능은 물 추출물에서 높았으나 SOD-유사활성은 에탄을 추출물에서 가장 높았다. 단메밀 중의 ACE 저해물질과 tyrosinase 저해 물질들은 20배의 증류수로 35$^{\circ}C$에서 각각 24시간, 36시간 처리했을 때 가장 많이 추출되었고 전자공여능을 나타내는 항산화물질은 5$0^{\circ}C$에서 18시간 처리했을 때 가장 많이 추출되었다. 또한 검정콩 1호의 ACE 저해물질은 2$0^{\circ}C$, 24시간에서 가장 많이 추출되었으나 그 밖의 기능성 물질들은 2$0^{\circ}C$에서 18시간 추출하였을 때 가장 많이 추출되었다.
키토산 올리고당이 ACE 저해활성과 SHR의 혈압에 미치는 영향을 검토하였다. 키토산 올리고당은 모두 ACE 저해활성을 나타내었다. ACE 저해활성$(IC_{50})$은 3량체가 $0.9\;{\mu}mole$로 가장 우수하였고 2량체의 경우에는 $2.4\;{\mu}mole$, 그 외의 올리고당은 모두 $>100\;{\mu}mole$였다. 강력한 ACE 저해제인 Captopril(2-D-mercaptopropanoyl-L-proline)의 인체 투여량을 기준으로 3량체 키토산 올리고당 2.14 mg/kg을 SHR에 강제 경구투여한 바, 4시간 경에 8주령 및 21주령 SHR모두 최저혈압을 보였고 이 때의 혈압 강하는 8주령 SHR $27{\pm}4.8\;mmHg$, 21주령 SHR $36{\pm}4.3\;mmHg$로 나타났다. 따라서 3량체 키토산 올리고당은 2량체 키토산 올리고당과 함께 향후 고혈압 치료제로서 응용가능함이 시사되었다.
His-His-Leu (HHL), a tripeptide derived from a Korean soybean paste, is an angiotensin-I-converting enzyme (ACE) inhibitor. We report here a method of producing this tripeptide efficiently by expressing tandem multimers of the codons encoding the peptide in E. coli and purifying the HHL after hydrolysis of the peptide multimers. The HHL gene, tandemly multimerized to a 40-mer, was ligated with ubiquitin as a fusion gene (UH40). UH40 was inserted into vector pET29b; the UH40 fusion protein was then produced in E. coli BL21. The recombinant UH40 protein was purified by cation-exchange chromatography with a yield of 17.3mg/l and analyzed by matrixassisted laser desorption ionization (MALDI) time-of-flight (TOF) mass spectrometry and protein N-terminal sequencing. Leucine aminopeptidase was used to cleave a 405-Da HHL monomer from the UH40 fusion protein and the peptide was purified using reverse-phase high-performance liquid chromatography (HPLC) on a C18 HPLC column, with a final yield of 6.2mg/l. The resulting peptide was confirmed to be HHL with the aid of MALDI-TOF mass spectrometry, glutamine-TOF mass spectrometry, N-terminal sequencing, and measurement of ACE inhibiting activity. These results suggest that our production method is useful for obtaining a large quantity of recombinant HHL for functional antihypertensive peptide studies.
This study aimed to determine the degree of hydrolysis and angiotensin-I-converting enzyme (ACE)-inhibitory activity of Giant Jellyfish Nemopilema nomurai (jellyfish) hydrolysates. The degree of hydrolysis using six proteolytic enzymes (Alcalase, Flavozyme, Neutrase, papain, Protamex, and trypsin) ranged from 13.1-36.8% and the inhibitory activities from 20.46-79.58%. Using papain hydrolysate, we newly isolated and characterized ACE-inhibitory peptides with a molecular weight of 3,000-5,000 Da that originated from jellyfish collagen. The purified peptide (FII-b) was predicted to be produced from an alpha-2 fragment of the type IV collagen of jellyfish. The N-terminal sequence of FII-b was Asp-Pro-Gly-Leu-Glu-Gly-Ala-His-Gly- and showed 87% identity to the collagen type IV alpha-2 fragment of Rattus norvegicus and a predicted protein from Nematostella vectensis, indicating that the ACE-inhibitory peptide originated from the collagen hydrolysate and had an $IC_{50}$ value of 3.8 ${\mu}g$/mL. The primary structure of the fragment is now being studied; this peptide represents an interesting new type of ACE inhibitor and will provide knowledge of the potential applications of jellyfish components as therapies for hypertension.
버섯으로부터 생리 기능성이 우수한 건강 소재나 대체의약을 개발하기 위하여 백색 느티만가닥버섯의 자실체의 물추출물과 에탄올추출물을 제조한 후 이들의 생리기능성을 측정하였다. 시료 버섯 자실체의 물 추출물의 ACE 저해활성이 60.5%로 에탄올 추출물의 저해활성 보다 높았다. 또한 SOD 유사활성과 Xanthine oxidase 저해 활성도 물추출물에서 각각 24.1%와 23.0%을 보였다. 백색 느티만가닥버섯 자실체에 함유되어있는 ACE 저해 물질은 자실체 분말을 물에 1 : 40으로 현탁 시킨 후 $50^{\circ}C$에서 12시간 추출했을 때 가장 많이 추출되었고 이때 ACE 저해활성은 80.5% 이었다.
To investigate whether $AT_{1}$ receptor antagonists are acting by increasing endothelium-de-pendent and -independent relaxation of aortas in normotensive rats, $AT_{1}$ receptor antagonists, losartan and KR-30988, and angiotensin converting enzyme inhibitor, captopril, were orally administered for two weeks (50 mg/kg, b.i.d.). THe blood pressure, heart rate and body weight were not significantly changed by losartan, KR-30988 and captopril compared to the control group. In aortic preparations, the $pD_{2}$ of KR-30988 for ACh-induced relaxation was 8.33 $\pm$ 0.16, significantly (p <0.05) lower than that of control group $(7.71 \pm 0.15)$. ACh-induced relaxation was significantly increased on losartan-treated group (p<0.01) at $10^{-6}$ M of ACh, and in captopril-treated group (p<0.05) at the range of $10^{-7}$ -$10^{-5}$ M of ACh. The $pD_{2}$ values for histamine-induced relaxatio of losartan, KR-30988 and captopril were 5.57 $\pm$ 0.10, 5.85 $\pm$ 0.21 and 5.60 $\pm$ 0.01, respectively, with significant differences in all groups (p<0.01) compared to that of control group (5.13 $\pm$ 0.09). ACh-induced relaxations of aortic preparations were not changed by pretreatment of indomethacin ($10_{-5}$ M), and completely bolcked by pretreatment of L-NAME $(10_{-5}M)$ in all groups. Sodium nitroprusside-induced relaxations were not significantly changed by all drugs tested in this experiments. These results suggest that $AT_{1}$ receptor antagonists, losartan and KR-30988, enhance the endothelium-dependent relaxatio on aortic preparations through the release of, or increase sensitivity, to nitric oxide in nor-motensive rats.
연구배경: ACE 억제제는 고혈압 및 신장질환의 치료제로서, 투약 중 발생하는 건성 기침은 이 약제의 사용을 제한하는 부작용으로 알려져 있다. ACE 억제제로 인한 건성 기침의 발생 빈도는 ACE의 활성도가 낮은 사람에서 높고, 그 활성도는 ACE 유전자의 다형성과 관계가 있다는 가설이 있으나, 그간의 국내외 임상 연구들은 그에 대해 각각 상이한 보고를 하고 있다. 이에 본 연구는 국내의 ACE 억제제를 투약 받고 있는 신장 질환 환자들을 대상으로, 건성 기침의 발생 반도와 ACE의 활성도를 결정하는 유전자 다형성과의 관계를 고찰하고자 하였다. 방 법: 1998년 8월 현재, 외래에서 ACE 억제제를 투약 받고 있는 339명의 환자들을 대상으로, 투약 중 건성 기침을 호소하고, 약제 중단 후 기침이 소실된 환자들을 기침 발생군, 기침을 호소하지 않은 환자들을 기침 미발생군으로 하였다. 환자들의 병력, 투약력, 증상 등의 임상적 특성은 의무기획을 이용하여 조사하였고, ACE 유전자 다형성은 환자들의 말초 혈액에서 얻은 DNA 의 종합효소 연쇄반응기법 (PCR) 과 전기영동(electrophoresis)으로 결정하였다. 결 과: 기침 발생군은 37명으로, 빈도는 10.9% 이었고, 미발생군은 302명이었다. 양군간에 연령, 기저 질환, ACE 억제제의 종류 및 용량에 있어서 유의한 차이는 없었으나, 남녀 비는 기침 발생군에서 M : F=24.3% : 75.7%, 미발생군에서는 49.7% : 50.3%로, 기침 발생군에서 여성의 비율이 유의하게 높았다(p=0.004). ACE 유전자 다형성의 유전자형의 비는 기침발생군에서 I:I : I/D : D/D=16.2% : 18.9% : 64.9%, 미발생군에서 18.9% : 18.2% : 62.9%로 양군간에 유의한 차이가 없었으며(p= 0.926), I allele과 D allele의 비도 기침 발생군에서 I : D=25.7% : 74.3%, 미발생군에서 28.0% : 72.0%로 유의한 차이를 보이지 않았다 (p=0.676). 결 론: ACE 억제제를 사용하고 있는 환자에서, 건성 기침의 발생 빈도는 10.9%이었고, 여성에서 유의하게 높았으며, ACE 억제제에 의한 기침과 ACE 유전자 다형성과는 관련성이 없었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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