본 연구에서 짚신나물(A. pilosa)의 뿌리부분에 대한 다양한 생리활성을 조사하여 기능성소재 응용가능성을 검토하였다. 짚신나물 뿌리 추출물은 멜라노마 세포에 대하여 낮은 세포독성을 나타냈다. 세포독성이 거의 없는 농도에서 짚신나물 뿌리 추출물 처리 시 항산화($ID_{50}$, 20.70 mg/L) 및 항균활성이 매우 우수하게 나타났으며 특히 그람양성세균에 대한 항균활성이 높았다. 또한, 짚신나물 뿌리 추출물 처리시 높은 tyrosinase 활성저해($ID_{50}$, 90.18 mg/L) 및 멜라닌 함량 저하를 보여주었다. 이는 짚신나물 추출물이 세포내 tyrosinase 발현을 억제시킴으로서 멜라닌 합성을 저해하는 것으로 판단된다. 이와 같은 결과로 미루어 볼 때 짚신나무 뿌리 추출물은 피부미백 소재 등 피부개선 효과를 비롯한 기능성 화장품에 활용하기 위한 매우 효과적인 재료가 될 수 있다고 판단된다.
In this work, the antioxidant activity and total phenolic compound content of 6 fractions of Smallanthus sonchifolius, Agrimonia pilosa, and Lithospermum erythrorhizon extract were investigated. The highest total phenolic compound contents of each plant extracts were obtained from n-butanol ($13.75{\pm}0.21%$) and methylene chloride ($12.89{\pm}1.10%$) fractions (S. sonchifolius), ethyl acetate ($19.69{\pm}1.02%$) and water ($18.72{\pm}0.76%$) fractions (A. pilosa), and n-butanol ($36.26{\pm}1.26%$) and ethyl acetate ($17.66{\pm}0.94%$) fractions (L. erythrorhizon), respectively. As a result of DPPH radical scavenging activity in 10 mg/mL condition, the highest activity were obtained from n-butanol fraction of S. sonchifolius (81.06%), ethyl acetate fraction of A. pilosa (86.32%), and n-butanol fraction of L. erythrorhizon (82.6%), respectively. Also, the highest reducing power was obtained same fractions as well as DPPH adical scavenging activity. Overall, antioxidant activity has relatively closely connected with contents of total phenolic compounds in S. sonchifolius and L. erythrorhizon extracts.
선학초 추출물을 기능성 화장품 소재로 활용하기 위하여 미백효과를 검증하였다. 세포 내 tyrosinase 저해활성 측정결과 선학초 에탄올 추출물 $500{\mu}g/mL$에서 42%의 저해활성을 나타내었다. 이는 선학초 추출물이 세포 내 tyrosinase 발현을 억제시킴으로서 멜라닌 합성 또한 저해 하는 것임을 확인 할 수 있었다. 선학초 추출물의 단백질 발현과 mRNA 발현 억제효과를 검토한 결과 선학초 열수 및 에탄올 추출물을 처리한 B16F10군에서는 tyrosinase protein의 발현이 처리하지 않은 군보다 감소함을 확인할 수 있었다. 결과적으로 선학초 추출물의 미백효능을 확인할 수 있었으며, 식품 및 화장품의 기능성 소재로 이용이 가능할 것으로 판단된다.
본 연구는 우리나라의 야산이나 길가, 들판 등에 흔히 자라는 여러해살이 풀이며, 오래 전부터 민간요법 및 한방에 유용 한 약재로 사용되어 지고 있는 선학초(Agrimonia pilosa Ledeb.)를 이용하여 여드름 유발균에 대한 항균활성을 평가하고, 이를 토대로 항여드름 관련 화장품 소재를 개발하는데 그 목적이 있다. 선학초를 methanol로 추출한 후, 이 추출물을 여드름 유발균주인 P. acne를 이용하여 minimum inhibitory concentration (MIC) 및 paper disk diffusion assay로 항균 효과를 측정하였으며, 추출물에 대한 온도 및 pH 변화에 따른 안정성을 평가하였다. 추출물을 이용하여 P. acne에 대한 MIC 값은 0.005 mg/mL로 측정되었으며, 이는 대조군으로 사용한 항생제인 triclosan의 MIC 값(0.004 mg/mL)과 비교했을 때 시료가 선학초 전초에 대한 crude extract임을 고려하면 매우 항균활성이 높은 것으로 평가되었다. 추출물에 대한 paper disk diffusion assay를 수행한 결과, 대조군으로 사용한 triclosan 처럼 높은 활성을 나타내는 것으로 측정되었으며, Staphylococcus aureus를 비롯한 여러 종의 호기성 균주에도 선학초추출물은 항균활성이 우수한 것으로 평가되었다. 선학초 추출물의 온도, pH 안정성을 평가한 결과, 70, 80, 90, 100, $121^{\circ}C$ 등 다양한 온도 조건과 $pH 2{\sim}pH 11$의 변화에 있어서도 그 효능이 변하지 않고 안정된 상태로 유지되는 것으로 관찰되었다.
Microglial cells constitute the first line of defense against infection and injury in the brain. This study was conducted to evaluate the protective mechanisms of Agrimonia pilosa (AP) on LPS-induced activation of BV-2 microglial cells. The effects of AP on gene expression profiles in activated BV-2 microglial cells were evaluated using microarray analysis. BV-2 microglial cells were cultured in a 100 mm dish ($1{\times}10^7/mL$) for 24 hr and then pretreated with 1 g/mL AP or left untreated for 30 min. Next, 1 g/mL LPS was added to the samples and the cells were reincubated at $37^{\circ}C$ for 30 min, 3 hr and 6 hr. The gene expression profiles of the BV-2 microglial cells varied depending on the AP. The microarray analysis revealed that MAPK signaling pathway-related genes were down-regulated and IL10 gene was up-regulated in AP-treated BV-2 microglial cells. AP can affect the inflammatory response and MAPK pathway in BV-2 microglial cells.
우리 나라 자생 짚신나물(Agrimonia pilosa Ledeb.) 수집종의 분포, 자생지의 환경 및 자생지에서의 형태적 특성조사를 실시하고, 자생종 짚신나물와 도입 짚신나물 간의 형태적 특성 및 유연관계를 연구한 결과는 다음과 같다. 1. 수집된 종 중에서 하동지역의 화개면 쌍계사와 청암면 청학동에서 수집된 2종은 다른 수집종에 비하여 유전적 거리지수가 가장 가까운 수치에서 나타나 근연관계로 나타났으며, 충북 영동읍 비탄재와 경기도 강화읍 수집종간에는 유전적 거리지수는 최대값이 같은 것으로 보아 유연관계가 있는 것으로 판단된다. 2. 경남거제에서 수집(No. 7)된 것과 충북 보은에서 수집(No. 21)된 2종이 유전적으로 가장 가깝게 나타나 지역적 차이에 의한 진화에도 다양함을 보이고 있어 수집지역의 확대와 이에 따른 체계적인 선발을 통해서 우량종의 선발도 가능할 것으로 판단된다 3.증폭된 DNA band pattern에 있어서 절편크기는 300∼21000p로 PCR로 증폭된 종 상호간의 1-F값은 평균 0.624였고, 최소값 0.365, 최대값 0.827이었으며, 2개 군으로 분리되어 유전적으로 상당한 차이가 있는 것으로 나타났다.
Objectives : The aim of this study was to experiment the antitumor activity of Agrimonia pilosa Ledebour (APL) in human stomach cancer (AGS) cell lines (in vitro) and male C57BL/6J mouse (in vivo). Methods : The effects of the ethanol extract from the plant on several transplantable rodent tumors were investigated in vitro by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxy phenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt (MTS) assay. DNA content analysis and Western blot analysis. Agrimonia pilosa Ledebour (APL) was given to rats with Lewis Lung Carcinoma (LLC) cells. The experimental rats were divided into 3 groups in vivo. Saline was injected into the abdominal cavity in the first group, 50 mg/kg APL was injected into the abdominal cavity in the second group and 100 mg/kg was injected into the abdominal cavity in the third group. After that, we checked their tumor volume periodically. Results : At first, human gastric cancer (AGS) cell lines (in vitro) showed decreased cell viability, and increased $sub-G_1$ contents. When we experimented rat intestinal epithelial (RIE)l as same condition, this result didn't show. With this, compared to normal cells, Agrimonia pilosa Ledebour (APL) led selectively to the extinction of cells only in human gastric cancer. Moreover, we showed that the traditional herbal medicine APL induced caspase-dependent apoptosis in AGS cells. Next, APL inhibited the growth of LLC-bearing mouse tumor. However, we could not verify APL induced caspase-dependent apoptosis in LLC-bearing mouse tumor. Conclusions : The roots of Agrimonia pilosa Ledebour (APL) contain some antitumor constituents.
Bioactivity-guided fractionation by preliminary screening using interleukin-1β production in lipopolysaccharides (LPS)-induced J774A.1 cell line led to the isolation of fourteen structures including chromone, isocoumarins, flavanoids, and triterpenes from the aerial part of Agrimonia pilosa Ledeb. All structures were determined by measuring their spectroscopic data and comparing their spectroscopic data with the literatures. All the isolates were tested for their inhibitory activities against interleukin-1β production in LPS-induced J774A.1 cell. Of the tested compounds, (S)-(+)-5,7-dihydroxy-2-(1-methylpropyl)chromone (1), agrimonolide-6-O-β-D-glucopyranoside (5), agrimonolide-6-O-α-L-arabinofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside (6), and catechin (10) were found to be active. Furthermore, compound 1 suppressed the protein expressions of NLRP3 and NLRC4 in murine macrophage.
The butanol extracts of Agrimonia pilosa (BAP) induced dose-dependent vascular relaxation of phenylephrine-precontracted aorta, which was abolished by removal of functional endothelium. Pretreatment of the endothelium-intact aortic tissues with $N^G$-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) and 1H-[1,2,4]-oxadiazole-[$4,3-{\alpha}$]-quinoxalin-1-one(ODQ) inhibited the relaxation induced by BAP. BAP-induced vascular relaxation was also markedly attenuated by addition of verapamiI, while the relaxant effect of BAP was not blocked by indomethacine, glibenclamide, tetraethylammonium (TEA), atropine, or propranolo. In addition, incubation of endothelium-intact aortic rings with BAP increased the vascular production of cGMP. These results suggest that BAP relaxes vascular smooth muscle via endothelium-dependent nitric oxide/cGMP signaling pathway, which may be causally related with L-type $Ca^{2+}$ channels.
본 연구에서는 3T3-L1 지방전구세포를 이용하여 용아초 에틸아세테이트 추출물의 항비만 활성을 확인하고자 하였다. 용아초 에틸아세테이트 추출물에 의한 지방세포 분화 및 adipogenesis 저해 활성을 확인하기 위해 추출물을 3T3-L1 지방전구세포에 분화를 유도하면서 농도별(50, 100 ${\mu}g/mL$)로 처리하였고, 그 결과 용아초 에틸아세테이트 추출물은 지방세포의 분화를 억제시켰다. 이 같은 활성에 대한 기전을 확인하기 위해 PPAR${\gamma}$ 전사활성과 지방세포 분화에 관여하는 유전자들의 활성을 확인해 보았다. 실험 결과 용아초 에틸아세테이트 추출물은 PPAR${\gamma}$ 전사 활성을 억제시켰고 PPAR${\gamma}$ 및 C/EBP${\alpha}$의 mRNA 발현을 농도 의존적으로 감소시켰으며 지방세포 분화에 관여하는 adipokine들의 발현을 조절하는 것으로 나타났다. 따라서 용아초 에틸아세테이트 추출물의 항비만 효과는 지방 생성의 주요 전사인자인 PPAR${\gamma}$와 C/EBP${\alpha}$의 유전자 발현조절을 통해 지방 분화 억제 및 지방 축적을 효과적으로 감소시키는 것으로 보이며, 효과가 있는 농도가 100 ${\mu}g/mL$로 천연물질로써 비교적 낮은 농도에서 효과가 나타나는 것으로 보아 항비만 소재로의 개발 가능성이 있을 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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