전기자극이 흰쥐 창상 표피세포의 핵소체형성부위에 미치는 영향을 규명할 목적으로 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐 24마리의 등애 15mm의 절개창을 만들고 봉합한 후 각각 4일 7일 대조군 및 전기자극에 각각 6마리씩 무작위로 배치하고 전기자극군 흰쥐의 에 전극을 부착한 후 맥동빈도 0.5pps, 전류량 $500{\mu}A$로 60분간 전기자극하였으며 대조군은 전극만 부착하고 전류를 통전시키지 않았다. 전자자극 후 등의 피부를 적출하여 포르말린에 고정한 후 파라핀 포매 절편을 제작하여 silver colliod염색을 하였다. 이 표본을 400배율 현미경하에서 관찰하여 핵당 AgNOR으 수를 계측한 후 핵당 AgNOR의 분포와 핵당 평균 AgNOR수를 산출하여 통계분석한 결과 창상유발 4일과 7일째의 전기자극군의 평균 AgNOR수가 대조군보다 통계학적으로 유의하게 높게 나타났다. 이러한 결과는 전기자극이 흰쥐 피부 창상연 표피세포에서 AgNOR 발현을 증가시켰음을 확인할 수 있었으며 이는 미세맥동전류자극이 창상연의 표피세포를 증식시키고 있음을 시사하고 있다.
To distinguish reactive mesothelial cells from malignant cells in body fluid, we applied silver staining of nucleolar organizer regions(AgNORs) to ethanol fixed cytologic preparations. Fifty aspirated samples of benign(22 cases) and malignant(26 cases) body fluids were studied using the one step silver staining method. Two cytologically atypical samples were also included in the study. In malignant cases the mean AgNOR count was $3.56{\pm}0.81$, while in benign cases the mean AgNOR count was $2.02{\pm}0.33$. The difference of AgNOR counts between these two groups were statistically significant(p<0.001). The mean of atypical cases was 2.91. Both were diagnosed as malignant in follow-up cytology. In malignant effusions, there is statistically significant difference in AgNOR counts between cells forming complex papillae or clusters and singly scattered cells(p<0.05), $3.29{\pm}0.95\;and\;3.83{\pm}0.55$, respectively. We concluded that AgNOR count appears to be useful as a diagnostic tool especially when the cytologic differentiation is difficult.
A technique to improve the analysis of micronuclei(MN) in lymphocytes as a cytogenetic indicator is reported. For the purpose of diminishing the variation of the result from individual reader and making it easier to distinguish accurately a cytokinesis blicked(CB) lymphocyte and micronuclei, we tried a modified one-step silver staining technique as a method for detection of the argyrophilic nucleolar organizer region(AgNOR) with or without conventional Giemsa stain in the slide from CB method. Compared with the conventional Giemsa stain, the preparation processed with this method are especially useful for the accurate analysis of MN of cultured lymphocyte with cytochalasin B. This method will be a useful technique for automated calculation of MN.
연구배경: 세포의 증식능력을 반영한다고 알려진 NORs를 간편한 은염색으로 발현시켜서 AgNORs 수가 정상조직과 종양조직의 비교감별과 종양의 증식능력판단에 유용한지를 알기위하여 파라핀 포매된 편평세포폐암 조직을 이용하여 본 연구를 시행하였다. 방법: 수술로써 절제한 파라핀 포매된 편평세포폐암 조직 36예를 Mourad 등의 방법으로 은염색하였다. 1,000 배 배율하에서 종양조직과 정상조직에서 임의로 100 개씩 세포를 선정해서 핵당 평균 AgNORs수를 구하였다. 결과: 종양조직에서 TNM병기에 따른 핵당 평균 AgNORs수는 유의한 차이가 없었으나 정상조직과 종양조직을 비교허여 정상조직에서는 $1.74{\pm}0.25$, 종양 조직에서는 $4.05{\pm}0.80$으로 종양조직의 핵당 평균 AgNORs수가 정상조직에 비해서 유의하게 높았다(p<0.001). 결론: TNM분류에 따른 각 병기별 종양조직과 인접 정상조직의 핵당 평균 AgNORs수를 비교하여도 각 병기에서 종양조직의 평균 AgNORs수가 정상조직에 비하여 유의하게 높았다(p<0.005).
Gundog, Mete;Yildiz, Oguz G;Imamoglu, Nalan;Aslan, Dicle;Aytekin, Aynur;Soyuer, Isin;Soyuer, Serdar
Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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제16권18호
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pp.8155-8161
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2016
The prognostic significance of AgNOR proteins in stage II-III rectal cancers treated with chemoradiotherapy was evaluated. Silver staining was applied to the $3{\mu}m$ sections of parafin blocked tissues from 30 rectal cancer patients who received 5-FU based chemoradiotherapy from May 2003 to June 2006. The microscopic displays of the cells were transferred into the computer via a video camera. AgNOR area (nucleolus organizer region area) and nucleus area values were determined as a nucleolus organizer regions area/total nucleus area (NORa/TNa). The mean NORa/TNa value was found to be $9.02{\pm}3.68$. The overall survival and disease free survival in the high NORa/TNa (>9.02) patients were 52.2 months and 39.4 months respectively, as compared to 100.7 months and 98.4 months in the low NORa/TNa (<9.02) cases. (p<0.001 and p<0.001 respectively). In addition, the prognosis in the high NORa/TNa patients was worse than low NORa/TNa patients (p<0.05). In terms of overall survival and disease-free survival, a statistically significant negative correlation was found with the value of NORa/TNa in the correlations tests. Cox regression analyses demostrated that overall survival and disease-free survival were associated with lymph node status (negative or positive) and the NORa/TNa value. We suggest that two-dimensional AgNOR evaluation may be a safe and usable parameter for prognosis and an indicator of cell proliferation instead of AgNOR dots.
Nucleolus Organizer Regions(NORs)는 핵인을 형성하는 염색체의 특정 부위로서 rRNA 합성에 관여하는 리보좀 유전자를 함유하고 있으며 이의 활성화가 일어나는 곳이다. 본 연구에서는 한우의 NORs의 양상을 제시하기 위하여 AgNOR 염색법을 이용하여 한우의 NORs 수와 NORs 염색체 및 이의 분포 위치 등을 구명하고 한편으로 소의 품종별, 성별 및 근원이 다른 세포간의 NORs 양상을 비교 분석하였다. 본 분석에 이용된 공시축은 한우 및 홀스타인 암수 44두로서 이들의 혈액배양으로부터 염색체를 분리하였다. 조직간 세포의 NORs 비교를 위하여 귀 조직으로부터 배양된 섬유아세포의 염색체와 백혈구 배양으로부터 분리된 염색체를 분석하였다. 분리된 중기상에 AgNOR 염색 후 G-banding을 한 결과 한우의 NORs는 2번, 3번, 4번, 11번 및 28번 염색체에 존재하고, 이들의 분포 위치는 각 염색체의 말단부에 위치한다. 한우 NORs 수는 세포에 따라 최소 2개에서부터 최대 10개까지 나타나며 평균 5.6개였다. 이러한 다형적 양상은 개체 간뿐만 아니라 동일 개체 내 세포 간에서도 달리 나타나며 발현의 크기 또한 차이가 있다. 품종 간 NORs의 비교 분석에서 한우의 NORs 수가 Holstein (5.4개)에 비해 유의적으로 높게 나타났으며, 근원이 다른 세포간 비교에서는 fibroblasts (5.9개)에서의 NORs 수가 lymphocytes (5.5개)에 비해 높은 빈도를 보였고, 성 간에는 수컷 (5.7개)이 암컷 (5.4개)에 비하여 많은 NORs 수를 나타내었다. 그러나 이들의 염색체상 분포 양상에서는 공히 동일한 염색체에 출현되었으며 염색체 상 출현 빈도에서도 세포들 간에 거의 차이가 없었다.
Silver-binding nucleolar organizer regions (Ag-NORs)염색법을 이용하여 in vivo 및 in vitro에서 발암과정과 관련된 세포증식능을 검토하였다. A/J마우스에 benzo (a) pyrene을 투여하여 유발된 폐선종, 폐선암 및 Sprague-Dawley랫트에 dimethylbenz (a) anthracene투여에 의해 발생된 유선의 선암세포에서 Ag-NORs의 염색상태를 정상 조직과 비교하여 또한 정상마우스 섬유모세포인 NIH3T3에서의 Ag-NORs의 수 및 DNA 증식 억제물질인 caffeine에 의한 변화를 관찰하였다. 은친화성 NOR과련 단백질은 핵내 흑색의 반점으로 나타났으며 정상 폐조직의 세포당 Ag-NORs 수치는 0.87+0.01였으며 양성종양인 폐선종세포 및 악성종양인 폐선암세포에서는 각각 2.33+0.02, 2.56+0.45 정상 유선조직의 세포당 Ag-NORs수치는 1.21+0.16였으며 악성종양인 선암세포는 3.91+0.11로써 종양성 병변에서 유의한 증가를 보였다 (P<0.005).
Inhibitory effect of caffeine on NIH3T3 cell proliferation was studied by using [$^3H$]thymidine incorporation and a modified one-step silver staining technique. The latter technique shows argyrophilic nucleolar organizer region-associated proteins (Ag-NORs), which are seen in nuclei as black dots. The result was compared with the counts of [$^3H$] thymidine incorporation. The results were summarized as follows; 1. The Ag-NORs numbers of NIH3T3 cells were $6.81{\pm}1.38$ at 24 hrs, $7.13{\pm}1.26$ at 48 hrs, $8.50{\pm}2.04$ at 72 hrs after incubation. 2. The numbers of Ag-NORs were significantly decrease in caffeine treated groups (p<0.01). 3. The counts of [$^3H$] thymidine incorporation were similar to the result of using Ag-NORs staining technique. It is concluded that Ag-NOR is a rapid, simple and compatible method to quantitate cell proliferation as compared with [$^3H$]thymidine incorporation.
In the present study, we have evaluated cytotoxic effects of Taraxaci Herba extract in human oral epitheloid carcinoma cells. An antitumor activity was measured by colorimetric assays using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) and sulforhodamine protein B (SRB). The light microscopic study showed morphological changes, Ag-NOR (argyrophylic nucleolar organizer region) number and PAS positive reaction or the treated cells. These results obtained are as follows : MTT and SRB quantities were significantly decreased in cultured KB cells treated with 10$^{-2}$ /mg/ml and 10$^{-3}$ /mg/ml concentrations. The number of Ag-NORs were significantly decreased in cultured KB cells treated with 10$^{-2}$ /mg/ml and 10$^{-3}$ /mg/ml concentrations and the rate of Ag-NORs was shifted to left side (one Ag-Nounucleus was increased and five Ag-NORs/nucleus were decreased) by the high concentration. PAS reaction of cultured KB cells treated with 10$^{-2}$ /mg/ml and 10$^{-3}$ /mg/ml concentrations was negative. These results suggest that Taraxaci Herba retains a potential antitumor activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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