A simple, high-frequency and reproducible protocol for induction of adventitious shoot buds and plant regeneration from leaf-disc cultures of Jatropha curcas L. has been developed. Adventitious shoot buds were induced from very young leaf explants of in vitro germinated seedlings as well as mature field-grown plants cultured on Murashige and Skoog's (MS) medium supplemented with thidiazuron (TDZ) ($2.27{\mu}M$), 6-benzylaminopurine (BA) ($2.22{\mu}M$) and indole-3-butyric acid (IBA) ($0.49{\mu}M$). The presence of TDZ in the induction medium has greater influence on the induction of adventitious shoot buds, whereas BA in the absence of TDZ promoted callus induction rather than shoot buds. Induced shoot buds were multiplied and elongated into shoots following transfer to the MS medium supplemented with BA ($4.44{\mu}M$), kinetin (Kn) ($2.33{\mu}M$), indole-3-acetic acid (IAA) ($1.43{\mu}M$), and gibberellic acid ($GA_3$) ($0.72{\mu}M$). Well-developed shoots were rooted on MS medium supplemented with IBA ($0.5{\mu}M$) after 30 days. Regenerated plants after 2 months of acclimatization were successfully transferred to the field without visible morphological variation. This protocol might find use in mass production of true-to-type plants and in production of transgenic plants through Agrobacterium/biolistic-mediated transformation.
Kim, Young Hoe;Park, So Hyeon;Kim, Gyeong Hee;Jeong, Byoung Ryong
Journal of Plant Biotechnology
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제6권1호
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pp.51-54
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2004
This study was conducted to examine differences in shoot regeneration among chrysanthemum cultivars. Leaf explants of chrysanthemum cultivars 'Sulhwa', 'Puma', 'Geummokseo' and 'Sulpoong' were used. Explants cultured on the medium for 2 weeks formed calli at the cut surfaces. Shoots regenerated on MS basal medium supplemented with various concentration combinations of NAA and BAP. Explants were cultured under cool-white fluorescent lamps with a light intensity of $40\mu{Mm}^{-2}$.$s^{-1}$ for 16 $hday^{-1}$, at $25^{\circ}c$ and 70-80% relative humidity. 'Geummokseo' and 'Sulpoong' were the most responsive cultivars in shoot regeneration. Most effective medium for 'Sulhwa' and 'Puma' was MS basal medium supplemented with 10.0 $\mu{M}$ NAA and 5.0 $\mu{M}$ BAP and for 'Geummokseo' MS supplemented with 10.0$\mu{M}$ NAA and 20.0$\mu{M}$ BAP. Regeneration of multiple shoots was observed on MS basal medium supplemented with 1.0$\mu{M}$ or 10.0 $\mu{M}$ NAA and 5.0$\mu{M}$ BAP. High frequency regeneration of adventitious shoots from leaf explants and efficient induction of root from these regenerated shoots were obtained.
녹두 유식물체 줄기를 조직배양하여 캘러스조직을 형성하였고 이로부터 부정아 형성을 유도한 다음, 캘러스 조직과 부정아 분화에 대한 기원을 조직해부학적으로 연구하였다. 녹두 줄기절편으로부터 캘러스조직의 유도는 0.5 mg/L 2,4-D와 1.0 mg/L kinetin이 첨가된 MS배지가 효과적이었고, 캘러스로부터의 부정아 분화에는 0.75 mg/L NAA와 1.5 mg/L kinetin이 첨가된 MS배지가 매우 효과적이어서 약 21%의 기관형성율을 나타내었다. 캘러스 조직을 조직 학적으로 관찰한 결과, 캘러스조직은 유관속 형성층 외측에 새롭게 형성된 분열능력이 있는 캘러스 형성층환인_바깥쪽으로 생장을 함으로써 유도되었다. 부정아는 캘러스 조직의 외부 표면부위에서 기원된 부정아 정단분열조직으로부터 발생되었다. 부정아 정단분열조직은 엽원기를 형성하여 나중에 잎이 발생되었다.
Min Sung-Ran;Kim Young-Hoe;Jeong Won-Joong;Han Su-Kyung;In Don-Su;Liu Jang R.
Journal of Plant Biotechnology
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제5권4호
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pp.221-224
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2003
Leaf explants of Ixeris sonchifolia produced adventitious shoots at a frequency of 100% when cultured on MS medium supplemented with combinations of various concentrations of 6-benzyladenine (BA) (0.44, 4.44, or 8.87 ${\mu}M$) and 0.54 ${\mu}M$ NAA, or MS medium supplemented with 22.19 ${\mu}M$ BA and 2.69 ${\mu}M\;\alpha$-naphthaleneacetic acid (NAA) after four weeks of culture. Each explants (approximately $3{\times}6mm$) produced greater than 70 shoots at a combination of 0.44 ${\mu}M$ BA and 0.54 ${\mu}M$ NAA. Leaf explants produced shoots at a frequency of greater than 80% even at as low as 0.13 ${\mu}M$ BA as the sole growth regulator. Upon transfer to one-third strength MS with 0.54 ${\mu}M$ NAA, excised adventitious shoots were rooted at a frequency of 100%. Regenerated plantlets were transplanted to potting soil and grown to maturity in a greenhouse. The competence of I. sonchifolia for plant regeneration via organogenesis appears to be greater than the competence of tobacco, currently the best model plant for organogenesis.
Martin, Kottackal Poulose;Zhang, Chun-Lai;Hembrom, Manoj Emanuel;Slater, Adrian;Madassery, Joseph
Plant Biotechnology Reports
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제2권2호
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pp.163-169
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2008
Roots of Ophiorrhiza prostrata D. Don serve as a rich source of camptothecin (CPT), an anticancer drug. Because of the large-scale collection of its roots, the plant has become a threatened species. The present study accomplishes the induction of adventitious roots as a means for the production of CPT as well as for the large-scale propagation of this anticancer drug plant using leaf and internode explants. The biomass yield and CPT content of adventitious roots induced from different explants were compared to roots developed on ex vitro rooted stem cuttings. Adventitious roots were produced on half-strength Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with $10.74{\mu}M$${\alpha}-naphthaleneacetic$ acid and $2.32{\mu}M$ kinetin at mean fresh weights of 0.753, 0.739 and 0.748 g roots from leaf, internode and shoot, respectively. CPT yield from in vitro derived roots after 50, 80 and 120 days of incubation (0.028, 0.06 and 0.1% dry weight, respectively) was not significantly different from those harvested at the same age from ex vitro rooted (0.03, 0.06 and 0.13%, respectively) stem cuttings. CPT from subcultured roots derived from solid (0.08%) medium was lower than from suspension culture medium (0.12%). Subsequent cultures of the adventitious roots showed a stable production of CPT (0.16%). The yield of CPT from 360-day-old plant-derived roots was 0.19%. Elicitation using methyl jasmonate and acetyl salicylic acid exhibited no enhancement in CPT yield. In vitro propagation through direct shoot regeneration was achieved from the adventitious roots upon transfer to MS medium with $8.87{\mu}M$$N^6-benzyladenine$ (BA) and $2.46{\mu}M$ indole-3-butyric acid (IBA) with a mean of 21.2 shoots per culture in 50 days. The shoots upon subculture on medium having the same level of BA and IBA underwent rapid proliferation. The shoots transferred to field conditions after in vitro rooting exhibited 95% survival. Adventitious root induction, from leaf and internode explants, enables the feasible production of CPT as well as the large-scale rapid propagation of this species which can safeguard it from extinction.
잡종키위(Actinidia deliciosa${\times}$A. arguta) 엽조직의 캘러스로부터 완전한 식물체를 재분화시킬 수 있었다. 캘러스는 옥신류(2,4-D, NAA: 0.1~0.5 mg/l)와 싸이토키닌류(BA: 0.1~0.2 mg/l)를 조함하여 첨가된 MS배지에 엽절편체를 배양하여 캘러스를 유도하였다. 가장 높은 캘러스 유도율(96.2%)은 0.5 mg/1 2,4-D+0.1 mg/l NAA+0.05 mg/l BA의 처리구에서 나타났다. 신초유도는 1차 신초 유도배지에서 1.0 mg/l BA+0.05 mg/l IBA 혹은 2.0 mg/l BA+0.05 mg/l lBA 첨가구에서만 소수의 신초가 유도되었다. 그러나 캘러스를 1.0, 2.0 혹은 5.0 mg/l zeatin의 단독처리구 혹은 BA, TDZ 혹은 zeatin이 첨가된 2차 신초 유도배지처리구에서 다경유도가 가능하였지만 BA 첨가구에는 그 농도에 관계없이 다경유도는 이루어지지 않아 잡종키위의 캘러스로부터 신초유도시 BA첨가는 별 효과가 없는 것으로 나타났다. 신초로부터 발근은 기내발근 [Standardi (St)+1.0 mg/l IBA]시 가장 높은 발근율(83.3%)를 보였지만 500 mg/l IBA의 수용액에 신초를 1시간동안 침지한 처리구에서 가장 저조한 발근율(40.0%)을 보였다. 줄기와 뿌리가 유도된 완전한 식물체를 재분화가 가능하였고 순화 또한 성공적으로 이루어졌다.
기공이 잎의 앞뒤 양면에 존재하는 생리ㆍ형태적 특징을 가지고 있는 외래 교잡종인 Peace (Populus koreana ${\times}$ P. trichocarpa)포플러의 효율적인 기내증식법을 개발하고자 액아와 엽육 절편을 이용하여 기내배양을 실시하였다. 몇 종류의 배지 시험을 통해 1/2MS배지를 적정배지로 선정할 수 있었고, 이 배지에 TDZ를 처리하여 multiple shoot 및 adventitious shoot유도 효과를 조사하였다. 절간액아 및 엽육을 절편으로 TDZ의 농도별 처리로 배양 2주 후부터 multiple shoot 및 adventitious shoot가 유도되었으며 절편 및 TDZ처리 농도에 따라 차이를 나타냈다. 액아로부터는 TDZ 처리로 절편당 5-7개의 multiple shoot가 유도된 반면 엽육 절편에서는 2-5개의 adventitious shoot가 유도되었다. 한편 부정아로부터 정상적 인 줄기의 성장에 있어서도 절편에 따른 차이를 나타냈다. 이상의 결과는 저농도의 TDZ의 처리로 peace포플러의 액아 혹은 엽육 절편의 기내배양을 통해 대량증식이 가능함을 보여주는 결과이다.
부정아를 유도하기 위하여 발아 7∼10일된 일본 결구상추 2품종과 국내 잎상추 (Lactuca sativa L.)4품종의 하배축 및 자엽절편으로부터 식물체 재분화시스템을 확립하였다. 하배축 및 자엽절편을 BA와 NAA가 조합 처리된 MS 및 SH배지에 치상하여 5주 동안 명배양하였다. 일반적으로 하배축보다는 자엽절편에서, SH 배지보다는 MS 배지에서 배양하였을 때에 부정아 형성률이 높았다. MS배지에 BA는 0.5 ㎎/L, NAA는 0.1∼l ㎎/L로 처리하였을 때에 최고의 부정아 형성률을 보였으며, 품종에 따라 30% ( '만추대청치마')에서 86% 까지의 부정아 형성률을 나타내었다. 형성된 shoot의 95% 이상이 MS 기본배지에서 발근하여 소식물체로 발달하였다.
키위의 엽육조직과 엽병조직을 치상하여 캘러스 및 부정아형성에 미치는 생장조절제의 효과를 조사한 결과 기관분 화성 캘러스형성은 2,4-D와 kinetin을 조합한 배지에서보다 NAA와 BA를 조합한 배지에서 양호하였고, 부정아 형성은 NAA와 BA를 조합한 배지에서만 형성되었으며 엽병조직보다 엽육조직을 배양하였을 때 반응이 양호하였다. 유도된 캘러스와 부정아로부터 신초의 형성은 MS기본배지에 0.1mg/L NAA와 2.0mg/L zeatin을 첨가한 배지에 계대배양하였을 때가 가장 효과적이었다. 신초의 발근은 1.0 mg/L IBA용액에 1시간 신초를 침지한 후 0.5 mg/L IAA와 0.1mg/L BA를 첨가한 배지에 배양하면 IBA용액에 침지처리 하지 않은 것보다 더 효과적이었으며 정상식물체로 발달하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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