본 연구는 위염, 위궤양, 위림프종 및 위암과 같은 소화기 질환의 원인균으로 알려진 H. pylori균을 항원으로 하여 젖소에 면역시킨 후 생산된 우유의 항원 항체의 특이성, H. pylori균 응집력, 항체의 산과 알칼리 및 열에 대한 안정성에 대해 조사하였다. Anti-H, pylori항체의 SDS-PAGE에 의한 분자량측정 결과 heavy chain은 50 kDa 정도, light chain은 24 kDa 정도로 확인되었다. H. pylori 항원 단백질의 분자량을 측정 한 결과 12개의 band가 확인되었고, anti-H, pylori의 항원 특이성을 알아보기 위해 western blotting을 한 결과 혈청, 혈청정제, 유청, 유청정제 모두 7개의 항원성 물질을 확인할 수 있었다. 그리고 주 항원성 물질은 분자량이 97, 66, 34 kDa이었다. 유청내 anti-H. pylori 특이 항체의 항균작용에 대해 알아보기 위해 실시한 균응집 반응결과 H. pylori 균에 대해 1/10의 높은 응집가를 나타내었다. 우유 및 유제품 생산시 발생할 수 있는 산${\cdot}$알칼리 및 열에 대한 anti-H, pylori항체의 안정성 실험결과 $pH5\~10$범위에서 안정한 상태로 $100\%$의 활성을 나타내었다. Anti-H, pylori 항체의 열에 대한 안정성 실험에서는 $60^{\circ}C$에서 60분간 안정한 상태를 보였고, $70^{\circ}C$에서도 비교적 안정한 상태였으나 60분 경과 후 $40\%$정도 활성이 감소하였다. $80^{\circ}C$에서는 4분간 처리 했을 때 $77\%$의 활성을 유지하였고, $100^{\circ}C$에서도 1분간은 비교적 안정한 상태였다.
Kim et at.(1986)은 유구낭미충 낭액을 감작시켜 만든 단세포군 항체를 CNBr활성화 Sepharose 4B에 연결시켜 친화성 크로마토그래피를 실시하고 낭액에서 A-항원을 분리한 바 있다. 이 연구는 그 항원 단백질의 생화학적 성상을 관찰한 것이다. Disc-PAGE에 의해 4.5~10% 폴리아크릴아마이드 젤에서 나타내는 Rf간을 기초로 분자량을 측정한 결과 A 항원의 분자량은 150,000 dalton이었다. A-항원은 SDS-PAGE에서 15,000, 10,000, 7,000 dalton에 해당하는 polypeptide로 분획이 구별되었다. 10% 2-mcrcaptoethanol로 처리하지 않거나 $95^{\circ}C$에서 5분간 처리하지 않은 A-항원의 SDS-PAGE에서는 7,000 dalton의 polypeptide가 분리되지 않았다. A-항원의 등전점(PI)은 pH6.8이었다. 낭액항원의 각 분획에 반응하는 항체를 갖는 환자혈청으로 A-항원을 SDS-PAGE/EITB한 바 환자혈청은 15,000, 10,000, 7,000 dalton에 해당하는 부위에서만 반응하였다. 낭액 단백질의 약70%를 차지하는 A-항원은 면역학적으로 내열성을 가졌으며 포충(hydatid cyst) 낭액 항원중 Oriol et at.(1971)의 "Antigen B"와 생화학적 성상이 비슷한 단백질이었다.
Park, Hyun-Young;Lee, Soo-Ung;Chae, Seong-Wan;Huh, Sun;Yu, Jae-Ran;Kim, Jin;Hong, Sung-Tae
Parasites, Hosts and Diseases
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제37권2호
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pp.109-115
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1999
The present study observed the variation of antigenicity of Pneumocystis carinii and serum IgG antibody reastion to the antigens from different localtities in Korea. Antigens of rat P,carinii and sera of inhabitants were collected at Chunchon, Chungju, Kwangju and Seoul during 1995-1996. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay and immunoblot were used for immune reaction. Absorbance of 1,294 human sera ranged between 0.01and 0.93. Sera from Chunchon showed higher absorbances than those from other areas. Immunoblotting revealed IgG antibody reactions to 116,100, and 45-55 kDa antigenic bands of rat P.carinii, but the frequencies of positive reaction to individual bands were variable by localities. Total 62.6% reacted to 100kDa band and 32.0% to 45-55 kDa bands. For the reaction to 116kda, the reaction rate was 60.0% of the sera showed the reaction to 116kda band while 37.7% reacted to 100kda, the reaction rate was 60.0% to 82.6% by localities. It is found that the reaction rates of the human sera to rat P.carinii antigen are variable according to the localities. Also, the high molecular antigen of 116kDa of rat P.carinii is the most frequent antigenic band reaction to human sera.
According to increase of travel, the cases of imported echinococcosis have been increasing in Korea. The present study was undertaken to develop a serodiagnostic system for echinococcosis in Korea. For diagnosis of echinococcosis, the fluid of Echinococcus granulosus hydatid cysts was collected from naturally infected sheep in Uzbekistan. Also serum samples of infected patients who were surgically confirmed were collected in a hospital in Tashkent, Uzbekistan. According to the absorbance of 59 echinococcosis positive and 39 negative control serum samples, the cut-off value was determined as 0.27. The sensitivity and specificity of ELISA with hydatid fluid antigen were 91.5% and 96%, respectively. The antigen cross-reacted with the serum of some cysticercosis or clonorchiasis patients. However, immunoblot analysis on the cystic fluid recognized antigenic proteins of 7-, 16-, and 24-kDa bands in their dominant protein quantity and strong blotting reactivity. In conclusion, the present ELISA system using hydatid cyst fluid antigen from Uzbekistan sheep is sensitive and specific for diagnosis of echinococcosis cases.
본 연구에서는 유전자 재조합 되지 않은(non-GM) 대두와 유전자 재조합된(GM) 대두가 혼입되어 제조된 두부에서 효소 면역 측정법을 이용하여 non-GM 대두의 혼입량을 추정하고자 하였다. 두부의 SDS-PAGE 실행 결과 non-GM 두부에서만 나타나는 특이 단백질 non-GM 113kDa 밴드와 non-GM과 GM 두부에서 모두 나타나는 non-GM 24kDa 밴드를 선별하고 이들을 토끼에 면역하여 항체생성 여부를 ELISA한 결과 non-GM 113kDa과 non-GM 24kDa 단백질 모두 항체가 형성됨을 확인하였고 $10^{-1}-10^{-6}$의 단백질 희석배수에서 두부를 이들 항체에 대하여 ELISA함으로써 원료대두의 GM여부를 확인할 수 있었다. 이들 중, 보다 감도가 높았던 non-GM 113kDa 단백질을 $10^{-7}-10^{-6}$의 배수로 희석하여 ELISA 흡광도와 non-GM 단백질의 관계를 나타내는 표준곡선을 작성하였고, 임의로 non-GM 대두와 GM 대두를 혼합하여 제조한 두부의 ELISA 흡광도를 이 표준곡선과 비교하여 non-GM 원료와 GM 원료 작물의 혼입율을 측정한 결과, 높은 정확도를 보였다.
Karami, Najmeh;Talebkhan, Yeganeh;Saberi, Samaneh;Esmaeili, Maryam;Oghalaie, Akbar;Abdirad, Afshin;Mostafavi, Ehsan;Hosseini, Mahmoud Eshagh;Mohagheghi, Mohammad Ali;Mohammadi, Marjan
Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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제14권3호
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pp.1813-1817
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2013
Background: Multiple etiologic factors are suspected to cause gastric cancer, the most important of which is infection with virulent types of Helicobacter pylori. Materials and Methods: We have compared 102 gastric cancer patients with 122 non-ulcer, non-cancer dyspeptic patients. Gastric specimens were evaluated for H. pylori infection by tissue-based detection methods. Patient sera underwent antigen-specific ELISA and western blotting using a Helicoblot 2.1 kit and antibody responses to various H. pylori antigens were assessed. Results: The absolute majority (97-100%) of both groups were H. pylori seropositive. Multivariate regression analysis demonstrated serum antibodies to the low molecular weight 35kDa protein to be protective and reduce the risk of gastric cancer by 60% (OR:0.4; 95%CI:0.1-0.9). Conversely, seroreactivity to the 89kDa (VacA) protein was significantly higher in gastric cancer patients (OR:2.7; 95%CI:1.0-7.1). There was a highly significant association (p<0.001) between seroreactivity to the 116kDa (CagA) and 89kDa (VacA) proteins, and double positive subjects were found at nearly five fold (OR:4.9; 95%CI:1.0-24.4) enhanced risk of gastric cancer as compared to double negative subjects. Conclusions: Seroreactivity to H. pylori low (35kDa) and high (116kDa/89kDa) molecular weight antigens were respectively revealed as protective and risk indicators for gastric cancer.
톡소포자충과 네오포자충 (Neospora caninum)의 충체 항원으로 톡소포자충 양성 혈청 및 톡소포자충증 환자의 혈청과 ELISA, western blot 및 면역형광법을 실시하였다. ELISA에서는 172명의 톡소포자충 양성 혈청에서 12명 (6.7%)이 두 항원에 모두 반응하였으며, 톡소포자충 음성인 110명의 혈청에서 1명이 네오포자충과 반응하였다. 교차반응을 보인 12 명의 혈청을 western blot으로 확인하였을 때, 톡소포자충 항원과는 다양한 양상으로 반응하였으나, 30 kDa (SAG1)과 22 kDa (SAG2) 항원과 강하게 반응하였다. 네오포자충과의 반응은 급격히 감소하였으나, 세 경우에서 43 kDa 단백질과 반응하였으며, 음성 혈청군의 1명도 43 kDa 단백질과 반응하였다. 면역형광법에서는 모든 양성 혈청이 톡소포자충의 세포막에 표지되었으나, 네오포자충과의 반응은 세포막, 세포 내 소기관, 혹은 둘 다를 표지하였다. 이로써, 톡소포자충과 네오포자충의 항원적 교차반응과 사람 혈청에서 네오포자충에 대한 항체의 존재를 확인하였으며, 네오포자충에 의한 인체감염 가능성에 대해서는 추후 연구가 필요할 것으로 판단된다. 또, N. caninum의 우리말 이름을 네오포자충으로 제안한다.
Kitkhuandee, Amnat;Munkong, Waranon;Sawanyawisuth, Kittisak;Janwan, Penchom;Maleewong, Wanchai;Intapan, Pewpan M.
Parasites, Hosts and Diseases
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제51권6호
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pp.755-757
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2013
Gnathostoma spinigerum can cause subarachnoid hemorrhage (SAH). The detection of specific antibodies in serum against G. spinigerum antigen is helpful for diagnosis of neurognathostomiasis. There is limited data on the frequency of G. spinigerum infection in non-traumatic SAH. A series of patients diagnosed as non-traumatic SAH at the Srinagarind Hospital, Khon Kaen University, Thailand between January 2011 and January 2013 were studied. CT or MR imaging of the brain was used for diagnosis of SAH. Patients were categorized as aneurysmal subarachnoid hemorrhage (A-SAH) or non-aneurysmal subarachnoid hemorrhage (NA-SAH) according to the results of cerebral angiograms. The presence of specific antibodies in serum against 21- or 24-kDa G. spinigerum antigen was determined using the immunoblot technique. The detection rate of antibodies was compared between the 2 groups. Of the 118 non-traumatic SAH patients for whom cerebral angiogram and immunoblot data were available, 80 (67.8%) patients had A-SAH, whereas 38 (32.2%) had NASAH. Overall, 23.7% were positive for specific antibodies against 21- and /or 24-kDa G. spinigerum antigen. No significant differences were found in the positive rate of specific antibodies against G. spinigerum in both groups (P-value=0.350).
폐홉충의 생리식염수 추출액을 항원으로 효소면역측정 법을 실시하여 특이 IgG항체 황성도를 측정하면 폐홉충중 현증 환자를 민감하고도 특이하게 감별할 수 있다. 진단에 사용하는 생리식염수 추출액은 조항원(조항원)므로 그 구성단백질중 환자 혈청내 특이항체와 반응하는 단백질항원이 어느 것인지에 패해서는 아직도 논란의 대상이 되고 있다. 조항원 중 특이항원을 정확히 판단하면 드물게 나타나는 교차반응의 기전을 이해하는데에도 도움이 될 분만 아니라 종특이 단일 단백질 항원을 제작할 수 있게 하는 데에도 기초가 된다. 이 연구는 폐홉충 성충의 생리식염수 추출액 중 폐홉충중 환자 혈청과 반응하는 단백질 분최을 관찰하기 위하 여 실시하였다. 개에 실험적으로 감염시킨지 13주째에 얻은 폐흡충 성충의 생리 식염수 추출액을 10∼15% linear gradient gel에서 환원조건하의 SDS-PAGE론 실시하였다. Coomassie염색결과 단백질 대(대) 15개를 판별할 수 있었고 그 분자량은 80, 51, 46, 45, 30, 25, 23, 21, 19, 16.5, 15.5, 14.3, 13. 12 및 10 hDa이었다. 그중 23, 16.5, 14.3, 13, 12 및 10 kDa가·진하게 염색되는 주(주) 단백질대이었다. 활동성 폐흡충증으로 확진한 환자 20명의 혈청을 효소면역전기영동이척법(immunoblot)으로 분리된 단백질대 에 반응시켰을 때에 46, 30및 23 kDa단백질에 가장 가장 강하게 반응하였다. 그 중에서도 30 kDa는 가장 많 은 환자 혈청과 반응하였고 가장 강한 반응이 나타났다. 그리고 46 kDa 및 23 kDa에서도 강한 반응이 있었다.
Guk, Sang-Mee;Chai, Jong-Yil;Shin, Yung-Oh;Seo, Min
Parasites, Hosts and Diseases
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제46권2호
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pp.71-75
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2008
The diagnosis of cryptosporidiosis has been carried out using coprologic techniques in the Republic of Korea. However, antibody responses to Cryptosporidium have rarely been studied. Serum antibodies from HIV-positive/oocyst-positive Korean patients recognized significantly 31 and 27 kDa antigens, and HIV-negative/oocyst-positive individuals clearly reacted to 15/17 kDa antigens. Compared with oocyst-positive cases, 18.7% and 75.8% of sera from HIV-positive patients reacted to 31 and 27 kDa antigens. Only 11.1% of HIV-negative individuals reacted to 15/17 kDa. Based on these findings, serum antibody responses were different between HIV-positive and HIV-negative individuals infected with Cryptosporidium, and it is suggested that HIV-positive patients are more frequently exposed to C. parvum compared to HIV-negative individuals.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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