• 제목/요약/키워드: 7 kDa antigen

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간흡충 현증감염 특이항원 (A Clonorchis sinensis-specific antigen that detects active human clonorchiasis)

  • 김석일
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제36권1호
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    • pp.37-46
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    • 1998
  • 인체 간흡충증의 현증감염 시기에 생산된 특이 IgG 항체와 반응하는 간촘충 특이항원을 규명하였다. 간흡충 성충의 조항원 및 서로 다른 조건에서 회수한 4가지 분비배설항원 (CsE)의 항원성을 면역이적법 소견으로 비교하였다 CsE2의 30. 7 kDa 항원이 간흡충 환자혈청과 강한 면역반응을 보였다. 이 항원들은 프라지콴텔 완치 후 6개월 혈청과는 반응하지 않았으나 투약 후 간흡충 충란이 검출된 환자의 치료 후 혈청과는 반응하여 현증감염의 면역반응과 관련된다고 판단하였다. 그러나. 30 Ka항원은 폐흡충 요코가와흉충 감염혈청과 교차반응하였고. 7 kDa 항원은 반응하지 않았다. 또. 30 kDa 항원은 일부 간흡충 과거 감염자 혈청과 반응하였으나 7 kDa 항원은 반응하지 않아 7 님)a 항원의 특이도가 높았다 간흡충 유행지역에서 7 kDa 항원의 민감도를 파악한 바 간흡충 현증감염자 25명 중 23명 (92%) 간홉충 요코가와흡충 중복감염자 11명 중 10명 (91%)과 반응하였다. 반면 간흡충 과거감염자 15명 중 6명 (40%), 요코가와흡충 감염자 7명 중 3명 (43%)과 반응하였다. 따라서. CsE2의 7 kDa 항원은 인체 간흡충 현증감염의 표식자가 되는 간흡충 특이 항원으로 판단된다.

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SDS-PAGE 및 면역이적법에 의한 호르텐스극구흡충 항원분획과 항체반응 양상 (SDS-PAGE and Immunoblot Patterns of Echinostoma hortense in Experimentally Infected Rats)

  • Yong-Suk Ryang;Yoon-Kyung Jo;Ji-Sook Lee
    • 대한의생명과학회지
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    • 제4권1호
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    • pp.73-76
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    • 1998
  • 저자들은 호르텐스극구흡충의 항원 단백질과 일부 특이 항원을 알아보기 위해 다음과 같이 실험을 실시하였다. 호르텐스극구흡충 충체를 추출하여 제조한 조항원을 재료로 SDS-PAGE를 실시하여 항원 단백질을 분석하였다. 그리고 흰쥐 (rat)에게 호르텐스극구흡충 피낭유충을 감염시켜 얻은 혈청 항체와, 호르텐스극구흡충 조항원과 면역증강보조제를 함께 투여하여 얻은 혈청 항체를 재료로 하여 EITB를 실시하여, 일부 특이 항원을 규명하였으며 성적은 다음과 같다. 즉, 조항원으로 SDS-PAGE를 실시한 결과는 200.2-8.2kDa까지 46개의 분획이 관찰되었고, 이중에서 특히 강하게 관찰된 단백분획은 200.2, 107.9, 86.8, 75, 69.8, 46.8, 43.5, 34.5, 20.9, 13.6, 12.6, 11.7, 8.2 kDa이었다. 그리고 EITB룰 실시하여 분석한 특이 IgG항체는 198-13.7 kDa까지 17개의 분획을 보였고, 특히 면역염색이 강하게 나타난 분획은 198, 123.4, 100.8, 91.1, 88.1, 62.8, 34.2, 32, 29.9, 18, 15.7, 13.7 kDa이었다.

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Organ-specific antigens of Clonorchis sinensis

  • Li, Shun-Yu;Chung, Byung-Suk;Choi, Min-Ho;Hong, Sung-Tae
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제42권4호
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    • pp.169-174
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    • 2004
  • This study was carried out to find out specific proteins from different organs of Clonorchis sinensis. Crude extract, organ-specific and excretory-secretory (ES) proteins were analyzed by immunoblot with infected human sera. The bands of 7- and 17 -kDa were main component of intestinal fluid and ES protein and commonly found in all organ-specific proteins. The 17-kDa protein was observed from ES antigen, intestinal fluid, eggs and sperms, 26- and 28-kDa proteins were from the uterus, vitellaria, and ovary, and 34-, 37-, 43- and 50-kDa proteins were mainly from the testis and sperms. Serum of mice immunized with sperms reacted to the 50-kDa protein by immunoblotting and immunohistochemical staining showed a positive reaction at the seminal receptacle and seminiferous tubule. The present results show that the 7-kDa protein is a common antigen of every part or organ of C. sinensis, but different organs express their specific antigenic protein bands.

결핵균 단백항원 자극에 의한 대식세포의 TNF-${\alpha}$ 및 IL-6 생성과 ERK 활성화 (Production of TNF-${\alpha}$ and IL-6 in Macrophages by Mycobacterial Protein Antigens)

  • 안혜정;조상래;백태현;이정림;최인홍
    • IMMUNE NETWORK
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    • 제7권1호
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    • pp.26-30
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    • 2007
  • Background: Mycobacterial antigens released as PIM, LM, LAM, lipoproteins and other cellular factors may contribute to macrophage and dendritic cell activation through pattern recognition receptors such as TLRs. In this study, we assessed cytokine production and ERK activation with stimulation of several major mycobacterial antigens. Methods: Purified mycobacterial antigens (10, 22, 30, 38kDa) and recombinant antigens (6, 16, 19, 38kDa, Ag85A antigen) were studied. The production of cytokines (TNF-${\alpha}$, IL-12, IL-6) was measured by ELISA. The ERK activation was detected by western blotting. The expression of TLR2 or TLR4 was measured by flow cytometry. Results: Among purified antigens only 30kDa antigen induced production of IL-6 or TNF-${\alpha}$ in THP-1 macrophage cells. When THP-1 macrophage cells were treated with 30kDa antigen, phosphorylation of ERK was detected. ERK activation also occurred in TLR2 transfectant HEK293 cells with 30kDa antigen stimulation. Conclusion: 30kDa antigen is one of the major mycobacterial antigens inducing cytokine production and MAP kinases phosphorylation in macrophages.

Characterization of partially purified 8 kDa antigenic protein of Clonorchis sinensis

  • Chung, Young-Bae;Lee, Me-Jeong;Yang, Hyun-Jong;Chung, Byung-Suk;Lee, Shun-Yu;Choi, Min-Ho;Hong, Sung-Tae
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제40권2호
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    • pp.83-88
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    • 2002
  • The 8 kDa antigenic protein of Clonorchis sinensis was partially purified by ammonium sulfate precipitation and subsequently by a column chromatographic steps. The purified protein was separated into 7 and 8 kDa protein bands through SDS-tricine gel electrophoresis, while the protein was fecund to migrate to a 8 kDa band in 7.5-15% SDS-PAGE. The molecular weight of the antigen was estimated to be 110 kDa by Superose 6 HR 10/30 gel filtration. The purified antigen strongly reacted with the human sera of clonorchiasis. The hyperimmune sera of BALB/c mice immunized against the 8 kDa protein were reacted with both the crude extract and the excretory-secretory product of adult worms, but not with the metacercarial extract. Immunohistochemical staining demonstrated that the protein was distributed to the tegument and subtegumental cells and also to the seminal receptacle. The present findings suggest that the 8 kDa protein is a partition of the multicomplek protein originating from various organs of adult C. sinenis, and that it is composed of several 7 and 8 kDa proteins.

효소면역전기영동이적법을 이용한 유조설고충 단세후군항체 및 환기혈청에 대한 항원특리성 분석 (Analysis of antigen specificity using monoclonal and polyclonal antibodies to cysticercus cellulosae by enzyme-linked immunoelectrotransfer blot technique)

  • 조승열;강신영;김석일
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제25권2호
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    • pp.159-167
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    • 1987
  • 기생충질환의 진단에도 이용하는 혈청학적 진단에서는 근록기생충항원과 교우반응이 나타나 특이도를 떨어뜨리는 경우가 있어 문제가 되고 있다. 진단용으로 사용하는 기생충노항원의 단백질 구성성분중 교*반응을 가장 잘 일으키는 것이 어떤 것인지를 알 수 있다면 특이도가 높은 항원을 제작하는 기본정보로 사용할 수 있을 것이다. 최근 SDS-폴리아크릴아마이드젤 전기영동(SDS-PAGE)과 효소면역전기영동이적법(EITB)을 이용하여 항원항체반응을 일으키는 단백질성분을 노항원중에서 구별할 수 있게 되었다. 이 연구에서는 유구낭미충의 낭액, 두절의 생리식염수추출액, 전낭미충추출액과 스파르가눔추출액, 포충낭액, 간질추출액, 간흡충추출액, 폐흡충추출액 등 8종의 항원에 대하여 유약낭미충증 환자 24명의 혈청과 본교실에서 제작한 단세포군항체가 어떻게 반응하는지 관찰하여 항원특이성을 분석하고자 하였다. SDS-폴리아크릴아마이드젤 전기영동은 길이 9cm, 두께 1.5mm인 10~15% linear gradient gel을 사용하였고 시료 $30{mu}l$를 sample buffier와 합께 $95^{\circ}C$에서 5분간 가열한 후 3~4시간 전기영동하였다. 분리된 단백질을 다시 100V에서 2시간 동안 Towbin buffer에서 전기영동하여 nitrocellulose 종이로 이적하였다. 그후 환자혈청(1 : 100), 단세포군항체(1 : 100)과 반응시키고 peroBidase-conjugated antihuman IgG(또는 perozidase-conjugated antimouse IgG), 기질의 순으로 반응시켜 발색하였다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. SDS-폴리아크릴아마이드젤 전기영동후 Coomassie brilliant blue R-250으로 염색한 바 유구낭미충 낭액에는 단백질대가 최소 23개 나타나고 그중 94, 64, 48, 39, 34, 24, 15, 10, 7kDa가 주단백질이었다. 두절추출액에는 단백질대 34개가 보였고 그중 94, 64, 39, 34, 26, 24, 21, 15, 10, 7kDa가 주단백질대이었다. 전낭미충추출액도 두절추출액과 동일한 소견을 보였다. 낭액항원과 충체추출액간에는 단백질 구성성분보다는 구성비의 차이가 심하였다. 스파르가눔 추출액은 28%, 포충낭액은 15%, 간질추출액은 22%, 간흡충추출액은 6개, 폐흡충추출액은 11개의 단백질대를 보였다. 2. 환자혈청 24개를 SDS-PAGE로 분리된 단백질대와 반응시킨 결과, 낭액항원에서는 평균 7.4개와 반응하였는 바 그중 152, 94, 72, 64, 48, 24, 15, 10, 7kDa 단백질이 가장 중요하였다. 두절 추출액과는 평균 6.3개와 반응하였고 그중 94, 64, 52, 39, 34, 15, 10kDa가 중요하였다. 스파르가눔추출액과는 평균 2.7개가 반응하였고 그중 130, 64kDa가 중요하였으며 포충낭액과는 평균 1개가 반응하였고 52, 27kDa가 중요하였다. 간질, 간흡충 및 폐흡충추출액과는 반응대가 관찰되지 않았다. 3. 단세포군항체는 낭미충낭액의 15, 10, 7kDa 및 두절추출액 10kDa와 반응하였다. 이상의 결과에서 유구낭미충의 구성단백질중 15, 10, 7kDa 등 저분자량단백질이 진단특이성이 높은 분획으로 판단하였다.

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Immunoblot를 이용한 폐흡충 비항원의 특이 항원대의 증명 (Demonstration of species-specific and cross reactive components of Paragonimus tvestermani crude worm antigen by EITB)

  • 주경환;안혁;정명숙;임한종
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제27권1호
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    • pp.9-14
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    • 1989
  • 폐흡충중의 진단은 일반적으로 객담에서 충란을 검출하는 것이 가장 확실한 진단법으로 간주되고 있지만 이소기생의 경우는 물론, 본 기생충의 감염자 및 감염 강도의 감소로 인해 실제 폐에 기생한 경우에 있어서도 객담 검사의 민감도가 매우 낮아져 혈청학적 검사의 필요성이 점차 대두되고 있다. 따라서 식염수 추출액을 항원으로 하여 효소면역 측정법을 실시하는 방법으로 면역 진단을 실시하고 있으나 조항원의 단백 구성이 복잡하여 간흡충을 비롯한 몇몇 흡충류 감염자 혈청에서 교차 반응이 야기되고 있다. 그동안 정제 항원을 만들고자 하는 시도가 많았음에도 불구하고 특이 항원의 분리는 실제로 불가능하였다. 이와 같은 문제점을 보완하기 위하여 폐흡충 조항원을 SDS-PAGE로 전기영동한 다음 EITB를 이용하여 항원대별 항원성 및 특이성을 관찰하여 폐흡충 조항원의 폐흡충증 혈청에 대한 특이 반응대를 확인해 보고자 하였다. 실험에 사용된 항원은 실험적으로 개에 감염시켜 24주만에 얻은 폐흡충 성충의 식염수 추출액이며 3∼20%의 linear gradient gel에서 SDS-PAGE하였다. Silver 염색한 결과 229 kDa∼10kDa 사이에서 26개의 항원대를 구성하고 있었으며 주요 항원대에 대하여 EITB를 실시한 결과 폐흡충 감염자 혈청은 229, 91, 60, 50, 35∼31, 27, 25, 21, 17, 11 및 10kDa의 분자량을 갖는 항원대와 반응하였다. 간흡충 감염자 혈청은 35∼31, 19, 11및 17 kDa의 항원대와 반응하였고 낭미충 감염자 혈청은 229, 31∼31, 27, 25 및 17kDa의 항원대와 반응하였다. 광절열두조충 1예도 17 kDa의 항원대와 반응하였다. 따라서 91, 60, 21 및 10kDa의 항원대 중 일부가 폐흡충 조항원에 있어서 체홉충에 대한 종특이 항원대로 생각되었으며 향후 immunoblot을 이용한 폐흡충중의 면역진단에 이용될 수 있는 항원대로 간주할 수 있었다.

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효소면역 전기영동이적법에 의한 톡소포자충 용해물 및 분비 항원의 분석 (Antigen analysis of Toxoplasma gondii Iysate and excretory-secretory materials by enzyme-linked immunoelectrotransfer blot (EITB))

  • 안명희;손혁진
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제32권4호
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    • pp.249-258
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    • 1994
  • 톡소포자충(Tomplasmngondii)은 세포내에 기생하는 구포자충(Cuidia)의 일종으로 항원은 여러 가지 단백질로 구성되어 있으며 이들 항원의 분석은 면역학적 생화학적인 면에서 시도 해 볼 필요가 있다. 톡소포자충(RH주) tachyzoite의 용해물 및 분비항원을 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)로 단백질 분획을 관찰하고 면역 전기영동이적법 (EITB, enzyme-linked immunelectrohansfer blot)을 시행하여 반응대를 관찰하였다. 토끼 (New Zealand산) 또는 BALB/c마우스를 톡소포자충으로 면역 또는 감염시키고 3주 또는 7주 후에 채혈 하였다. 면역 후 토끼나 마우스 혈청은 간접형광항체법(IFA)으로 항체가 1:1024 또는 1 : 128임을 확인하였다. 톡소포자충 용해물 및 분비항원으로 SDS-PAGE를 시행하였을 때 10 kDa에서 220 kDa까지 광범위한 단백질 분포대를 보였다. 톡소포자충 용해물 항원을 IgG 항혈청과 반응시켰을 때 주요 항원의 분자량은 23에서 35 kDa까지 5개의 반응대를 관찰하였으며 IgG와 IgM의 공동반응 대는 24. 27, 30. 35 kDa에서 관찰되었다. 분비항원을 IgG 항혈청과 반응시켰을 때 감염 마우스 의 복강액을 항원으로 한 경우 33(P30), 45 kDa의 반응대가 주요 항원임을 알 수 있었고 톡소포자 충을 CHL 세포로 in vitro에서 배양시킨 후 배양액의 상청액을 항원으로 EITB를 시행하였을 때 20 kDa. 30 kDa 이하의 분획에서 반응대가 관찰되었다. 이상으로 30 kDa 항원이 톡소포자충 tachyzoite의 용해물 뿐만 아니라 분비물에서도 관찰되는 중요한 항원임을 알 수 있었다.

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돼지편층의 45kDa 항원단백질에 대한 단클론항체 생산 (Production of monoclonal antibody to 45 kDa somatic protein of Trichuris suis)

  • 이종경;김종태;서흔수;박종열;윤희정
    • 대한수의학회지
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    • 제44권4호
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    • pp.625-635
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    • 2004
  • Trichnuris suis does not excrete eggs during larval stage as well as in particular adult stage, It is impossible to diagnose by use of fecal examination method in those periods. Therefore, serological diagnostic method can be very useful for those stages. In order to produce monoclonal antibody, specific somatic and secretory-excretory (SE) antigens of T. suis were identified and analyzed by SDS-PAGE and Western blot. Monoclonal antibody-producing hybridoma cells were cloned, which were made of popliteal lymph node of BALB/c mice immunized with a 45 kDa somatic antigen of T. suis. Five clones (1B9, 2C4, n2C5, 2D7 and 2D8) showing strong responses to T. suis antigens were selected and the isotype identified. All monoclonal antibodies were IgG1 isotype and the light chains were k chain. Established monoclonal antibodies reacted specifically to somatic and SE antigens of T. suis and did not cross-reacted to antigens of ascaris suum, trichuris vulpis, or Trichinella spiralis. The sensitivity of somatic and SE antigens against these monoclonal antibodies were significant (p<0.01) associated with those of positive and negative sera.

폐흡충 총체표피의 단백질 조성 및 항원성 (Protein composition and antigenicity of the tegument from Paragonimus westermani)

  • 김석일;조승열
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제31권3호
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    • pp.269-276
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    • 1993
  • 폐흡충 성충 표피의 구성 단백질의 분자량을 측정하고. 항원성을 갖는 표피 단백질을 규명하였다. 10개월 성충을 0.1% digitonin용액에 담궈 표피하 기저 막까지 박리하여 회수한 표피층을 초음파 분쇄하여 표피 단백질을 추출하였다. 표피 단백 질 추출액을 SDS-PAGE와 immunoblot으로 분석하였다 폐흡충 표피의 구성 단백질은 분자량이 각각 94. 74 (76-66). 62. 54. 44. 42. 38, 28, 26, 25 24. 17. 15.5. 13.5 IEDa으로 측정되었고. 94 kDa 단백질이 가장 주된 표피단백질이었다. 폐흡충 감염자 혈청을 사용한 immunoblot에서 항원성이 확인된 표피단백질의 분자량은 각각 94. 90. 78. 76. 74. 68. 65. 62. 60, 59. 54 kDa 이었다. 이 표피항원 단백질은 폐흡충증 혈청 10개중 7개에서 immunoblot 양성반응을 나타내었고. 7개 양성반응 혈청 각각에서 표피항원 단백질의 특이 항원성이 모두 관찰되었다. 그러나. 이들 폐홉충 표피항원은 간흡충란 양성자혈청과는 전혀 반응하지 않았다. 이상의 결과로. 폐흡충 표피 단백질중에서 분자량 94-54 kDa 사이의 것들이 폐흡충 특이 항원임을 알 수 있었고. 특히 94 kDa 단백질은 가장 양이 많은 대표적인 표피단백질이면서 아울러 특이항원성도 갖고 있었고. 양이 적은 표피단백질이었던 76. 66 kDa 단백질도 상대적으로 높은 특이 항원성을 보여주고 있음을 확인할 수 있었다.

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