The isolation and culture of protoplasts from hypocotyl-derived calluses of Glycine max (L.) Merr. cv. Jangyeop were obtained by digestion for 6 hrs in an enzyme solution containing 3.5% cellulase, 1.5% macerozyme, 10% sorbitol and 0.1% CaCl2.2H2O at pH 5.8. Newly formed cell wall of protoplasts cultured in MS agar medium containing 10 $\mu$M $\alpha$-naphthaleneacetic acid (NAA) and 32 $\mu$M N6-benzylaminopurine (BAP) could be observed after 24 hrs culture. The first cell division of the protoplasts was observed after 3 days of culture; cell clusters after 2 weeks of culture. When transferred to solid media, the protoplasts formed cell clusters gave rise to proliferating calluses.
The effects of various plant growth regulators, both auxins and cytokinins, on cell growth and berberine production were investigated in cell suspension cultures of Thafictrum rugosum. Indole-%-acetic acid (IAA) was found to be the best for berberine production among five examined plant growth regulators and the optimum concentration of IAA was 1 $\mu \textrm M$. The enhancement compared to control 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid (2, 4-D) was more than 60%. Simultaneous addition of cytokinins such as kinetin and 6-benzylamiroyurine (BA) was inhibitory.
Adventitious multiple shoots were developed from leaf, petiole and internode explants of Geophila reniformis D. Don. on MS medium supplemented with various concentrations of $N^6$-benzylaminopurine (BAP) or Kinetin (KIN) alone or in combination with indole-3-acetic acid (IAA). Leaf showed maximum organogenetic potential, followed by petiole and internode. Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 22.22 $\mu{M}$ BAP and 4.57 $\mu{M}$ IAA induced maximum shoot buds from leaf explants. Internodal segments showed low potential of direct organogenesis. The regenerated shoots rooted the best in presence of 10.75 - 13.44 $\mu{M}$$\alpha$-naphthalene acetic acid (NAA) along with 2.22 $\mu{M}$ BAP, and were successfully established in the field with a survival rate of 89.11%.
The optimum conditions for the submerged mycelial culture of Lentinus edodes SR-1 were elucidated to be incubation temperature of 25C, initial pH 4.0, agitation of 300 rpm, inoculation of 10.0%(v/v), and aeration of 1.0 v/v/m in TGY medium. The optimum c/n ratio and economic yield coeffcient for the submerged mycelial culture were 13.1:1 and 0.45 respectively. As the plant growth hormones test, SCM medium containing 0.5ppm of 2,4-dicholorophenoxyacetic acid increased mycelial yield in 1.1%, but 6-benzylaminopurine was not effective.
The optimal culture conditions for root organogenesis from the callus of peonies (Paeonia lactiflora Pall.) were investigated. Root explants with vascular bundles were cultured in Murashige and Skoog (MS) medium combined with 0.5-4.0 mg/L auxins (indole acetic acid [IAA], naphthalene acetic acid [NAA], indolebutyric acid [IBA], and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid [2,4-D]) and 0.0-2.0 mg/L cytokinins (kinetin, zeatin, and benzylaminopurine [BAP]) to induce callus formation. The callus was then cultured in MS medium combined with three concentrations (0.1, 0.5, and 1.0 mg/L) of IAA, NAA, IBA, kinetin, zeatin, and BAP in the dark for 6 weeks. Based on the results, the effects of dark and light conditions on the callus cultured in MS medium with combinations of 0.1-1.0 mg/L IBA and zeatin for 6 weeks were studied. Callus formation was most effective (>+++) in the medium with a combination of 1.0 mg/L NAA and 1.0 mg/L zeatin. A high number of long adventitious roots were observed in the mediums with 0.1 mg/L IBA (6.66 and 4.82 cm) and 0.5 mg/L zeatin (2.32 and 0.72 cm) among auxins and cytokinins, respectively. The highest number (14.06) of adventitious roots were formed from the callus cultured in light in the MS medium combined with 0.1 mg/L IBA and 0.5 mg/L zeatin. This same medium induced the formation of the longest adventitious root (5.45 cm) in the dark. Thus, optimization of in vitro culture conditions may be possible for the mass propagation of adventitious roots in peonies.
Leaf explants of the cucumber (Cucumis sativus L.) were cultured on Murashige and Skoog's (MS) medium supplemented with various concentrations of $\alpha$-naphthalene acetic acid (NAA) and 6-benzylaminopurine (BAP). Direct shoot orgnogenesis as well as callus formation with somatic embryos and multiple shoots was observed from leaf explants of cvs. Shinhukjinju and Chungjang. The highest frequency of shoot formation 80% was observed on MS medium supplemented with NAA/BAP (5.0 ${\mu}{\textrm}{m}$/2.5 ${\mu}{\textrm}{m}$), with explants forming 3-7 shoots. Shoots formation occured within 3 to 4 weeks. Only one subculture of calli was required for plant regeneration on normal growth regulator-free medium. Plantlets transferred to soil developed into plants of normal appearance, which flowered and set fruits.
The effect of carbenicillin on the dedifferentiation and the regeneration efficiency of plant tissues of horseradish(Armoracia rusticana) was evaluated, Inhibition effect for callus initiation was observed when leaf blade, root and petiole segments were grown on MS medium containing 500 mg/L to 2000 mg/L carbenicillin and 0.5 mg/L 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D). The regeneration of horseradish shoots from leaf blade, root and petiole explants were decreased as the addition of carbenicillin increased from 1000 mg/L to 2000 mg/L in MS medium containing 0.5 mg/L of 6-benzylaminopurine (BAP) or kinetin. Especially, 500 mg/L carbenicillin treatment significantly inhibited shoot induction when leaf blade explants were grown on hormone-free MS medium. It was suggested that the toxic effects of combinations of carbenicillin and 2,4-D may be due to high auxin activity levels.
In the present study, the effects of plant growth regulators on adventitious shoot and root formation of various explants of $in$$vitro$ seedlings of $Solanum$$nigrum$ L. were investigated to determine the optimum conditions for the high-efficiency plant regeneration of this species. The formation of adventitious shoots was higher in leaf explants than in cotyledon, hypocotyl, or epicotyl explants at low concentrations (0.5~2.0 mg $L^{-1}$ ) of 6-benzylaminopurine (BAP). The number of adventitious shoots and the shoot length were also higher in both leaf and cotyledon explants. In particular, 2.0 mg $L^{-1}$ BAP was most effective for stimulating the induction and multiplication of adventitious shoots. In terms of root formation and root development from shoots that were separated from multiple shoots, indole butyric acid (IBA) and indole acetic acid (IAA) were more effective than ${\alpha}$-naphthalene acetic acid (NAA). The percentage of rooting as well as the number of roots per shoot (4.0), root length (7.82 cm), and shoot length (8.76 cm) was highest on MS media supplemented with 0.05 mg $L^{-1}$ IAA. Furthermore, 100% of the regenerated plantlets survived when transplanted to compost soil. These results suggest that leaf explants are the best source for the high-efficiency regeneration of $S.$$nigrum$ L., and that 2.0 mg $L^{-1}$ BAP and 0.05 mg $L^{-1}$ IAA are the best conditions for shoot and root induction, respectively.
In vitro mass multiplication of Vanilla planifolia was investigated using node as explant. Multiple shoots were developed in MS medium supplemented with $2.0mgl^{-1}$ 6-benzylaminopurine and $1.0mgl^{-1}$$\alpha$-naphthalene acetic acid. Multiple shoots were maintained for 6-T weeks with regular subculturing at the end of $3^{rd}$ week onto fresh medium. The maximum number of shoots at the rate of 12.8 per node segment was achieved over a period of four weeks. The elongated shoots were separated from the shoot clusters and were transferred onto half strength MS medium supplemented with indole-3-acetic acid ($1.0mgl^{-1}$) over a period of 28 days for induction of roots. The development of roots was observed on $7^{th}$ day of incubation. The in vitro raised plantlets were transferred to poly-cups, covered with polyethylene sheets and maintained under shade net for 25 days for hardening. Finally these plants were transferred to field and recorded that 85 % of tissue cultured plants were survived. From the present study, a simple and efficient micropropagation protocol was developed for Vanilla planifolia using single node segments as explants.
Allium hookeri L. (Alliaceae family) is an important ethnomedicinal plant native to the Himalayan region of Asia. The aim of this research was to establish a high-frequency plant regeneration system for in vitro propagation of A. hookeri. Among the tissue types examined, receptacle explants derived from immature flower buds showed the highest regeneration rate of shoots ($93.33{\pm}4.63%$), roots ($76.67{\pm}7.85%$), and calli ($80.00{\pm}7.43%$) when cultured on Gamborg B5 (B5) medium containing $10{\mu}M$ 6-benzylaminopurine (BA) + $1{\mu}M$ naphthalene acetic acid (NAA), $0.5{\mu}M$ BA + $5{\mu}M$ NAA, and $1{\mu}M$ BA + $10{\mu}M$ NAA, respectively. Shoot multiplication was superior when cultured in liquid rather than on solid medium and relatively high concentrations of BA, ranging from 5 to $10{\mu}M$. Efficient bulblet formation following root induction from shoot clumps was achieved with culture in liquid B5 medium containing 7% (w/v) sucrose. Regenerated bulblets were successfully acclimatized to ex vitro conditions with a greater than 95% survival rate. By this method, a maximum of 62 plantlets per receptacle could be propagated within 9 weeks of initial culture. The in vitro propagation system established in this study will promote A. hookeri biotechnology, including large-scale production of healthy and aseptic clones, preserving parental genotypes with desirable traits, and genetic manipulation to enhance medicinal value.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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