Aminoalcoholphosphotransferase catalyzes the synthesis of phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine from diacylglycerol plus a CDP-aminoalcohol such as CDP-choline or CDP-ethanolamine. Previously we suggested the presence of possible isoforms of this enzyme from Chinese cabbage roots and now report the cDNA cloning and expression analysis of AAPT3 encoding a third isoform of aminoalcoholphosphotransferase (AAPT3). AAPT3 contains an open reading frame of 1,176 bp coding for a protein of 392 amino acids. It shares 96 and 95% identity with Chinese cabbage AAPT1 and AAPT2, respectively, at the deduced amino acid level. The results from reverse transcriptase-polymerase chain reaction analysis indicate that expression of AAPT3 is up-regulated by low temperature as well as AAPT1 and AAPT2.
지방산 TAG 분자의 sn-1,3 위치에서 특이적으로 반응하는 Lipozyme RM IM(from Rhizomucor meihei)을 촉매로 이용, 비용매계(solvent-free system)조건에서 glycerolysis를 통하여 조류유(from Schizochytrium sp.)와 대두유로부터 DAG, MAG 함유 기능성 유지를 합성하였다. 합성된 유지는 DHA(16.0mol%)와 linoleic acid(32.4mol%), palmitic acid(18.2 mol%), oleic acid (14.0mol%), EPA(6.7mol%) 및 myristic acid(4.9mol%) 등을 함유하고 있었으며, 유지 내 TAG 분자의 sn-2 위치에는 DHA(21.0 mol%)와 linoleic acid(29.2 mol%)가 높은 분포로 함유되어 있었다. 48시간의 효소 반응 후 DAG의 지방산 조성은 DHA(13.3mol%)와 linoleic acid(34.3 mol%), palmitic acid(20.0 mol%), oleic acid(13.2mol%), myristic acid(5.8mol%) 및 EPA(5.5 mol%) 등으로 조사되었고, MAG의 경우는 DHA(8.6mol%)와 linoleic acid(34.0mol%), palmitic acid(23.9mol%), oleic acid (15.1mol%) 및 EPA(4.1mol%) 등으로 분석되었다. 효소적 glycerolysis 반응 완료(48hr) 후 총 지질 내 약 60%의 DAG 및 MAG 함유하는 기능성 유지는 19.2area%의 1,3-DAG와 22.2 area%의 1,2-DAG, 16.0area%의 MAG 및 TAG(42.3area%), FFA(0.2area%)와 같은 중성 지질로 구성되어 있었다. 이러한 기능성 유지의 요오드가는 208.8, 비누화가는 179.6으로 측정되었으며, 산가(조류유, 대두유; <0.3)는 3.4이하를 나타내어 합성 중 생성, 잔류 가능한 유리 지방산 제거(산가 저하)를 위한 정제 과정이 필요할 것으로 사료된다. 또한, 기능성 유지는 Hunter $L^*(+/-,\;lightness/darkness;\;77.9),\;a^*(+/-,\;redness/greenness;\;15.9)$ 및 $b^*(+/-,\;yellowness/blueness;\;54.6)$와 같은 색도를 나타내었다.
Dietary orotic acid is known to induce the fatty liver. Fatty acid profiles in the lipid fraction of the liver and the serum in rats fed with or with orotic acid diet were analyzed. In all the hepatic lipid fraction of rats fed on the supplemented orotic acid diet, there was a significant increased in linoleic acid. In addition, linoleic acid was also increased in the triacylglycerol fraction of hepatic endoplasmic reticulum and the triacylglycerol and diacylglycerol fractions of hepatic Golgi apparatus of the orotic acid-feeding rats. In the time course study of the fatty acid profile in the hepatic triacylglycerol and diacylgycerol fractions, an increase of linoleic acid was observed similarly in the initial stages of orotic acid intake in the both fractions. However, linoleic acid in the serum triacylglycerol fraction of orotic acid-feeding rats increased from day 1, but it began to decrease the increment from day 2, resulting in the lower level of linoleic acid in the serum triacylglycerol fraction of orotic acid-feeding rats than that of rat fed a orotic acid-free diet after 10 days. Oleic acid (18:1) was increased in the only cholesteryl ester fraction of helpatic. However, oleic acid level in other fractions was not changed. The compositions of 14:0, 16:0 and 18:0 was reduced in the hepatic triacylogylcerol, diacylglycerol and cholesteryl ester fractions by orotic acid-feeding. However, these saturated fatty acids were significantly increased in the serum triacylglycerol fractions. The orotic acid indcued changes in linoleic acid level in hepatic triacylglycerol may be explained by the impaired fatty acid metabolism and limited excretion of this fatty acid from liver to serum.
Objective: The aim of the study was to evaluate the influence of gene polymorphisms and nongenetic factors on the somatic cell score (SCS) in the milk of Holstein (n = 148) and Simmental (n = 73) cows and their crosses (n = 6). Methods: The SCS was calculated by the formula SCS = log2(SCC/100,000)+3, where SCC is the somatic cell count. Polymorphisms in the casein alpha S1 (CSN1S1), beta-casein (CSN2), kappa-casein (CSN3), beta-lactoglobulin (LGB), acyl-CoA diacylglycerol transferase 1 (DGAT1), leptin (LEP), fatty acid synthase (FASN), stearoyl CoA desaturase 1 (SCD1), and 1-acylglycerol-3-phosphate O-acyltransferase 6 (AGPAT6) genes were genotyped, and association analysis to the SCS in the cow's milk was performed. Further, the impact of breed, farm, year, month of the year, lactation stage and parity on the SCS were analysed. Phenotype correlations among SCS and milk constituents were computed by Pearson correlation coefficients. Results: Only CSN2 genotypes A1/A2 were found to have significant association with the SCS (p<0.05), and alleles of CSN1S1 and DGAT1 genes (p<0.05). Other polymorphisms were not found to be significant. SCS had significant association with the combined effect of farm and year, lactation stage and month of the year. Lactation parity and breed had not significant association with SCS. The phenotypic correlation of SCS to lactose content was negative and significant, while the correlation to protein content was positive and significant. The correlations of SCS to fat, casein, nonfat solids, urea, citric acid, acetone and ketones contents were very low and not significant. Conclusion: Only CSN2 genotypes, CSN1S1 and DGAT1 alleles did show an obvious association to the SCS. The results confirmed the importance of general quality management of farms on the microbial milk quality, and effects of lactation stage and month of the year. The lactose content in milk reflects the health status of the udder.
Journal of the Korean Data and Information Science Society
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제26권6호
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pp.1249-1258
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2015
젖소의 유생산 형질에 가장 큰 영향을 미치는 유전자들 중 하나로 알려진 DGAT1 유전자의 효과를 국내 젖소 종축의 고밀도 유전체 정보를 이용하여 검증하기 위하여 본 연구를 수행하였다. 국내 젖소 씨수소로 구성된 353두의 고밀도 유전체 정보, 혈통, 추정 육종가 및 신뢰도 정보를 수집하였으며, 단일염기다형성 효과를 추정하기 위한 종속변량으로 가장 정확한 유전체 육종가를 예측할 수 있는 DeRegressed EBV를 산출하여 분석에 이용하였다. BovineSNP50 v2 패널을 이용하여 구명한 고밀도 유전자형 정보 중 유효성검증 과정을 통하여 41,051개 SNP을 선정하였으며, 각 단일 염기다형성의 실제적 유전체 육종가 기여도를 확인하기 위하여 유전체 선발방법 중 하나인 베이즈B (pi=0.99) 방법을 이용하여 SNP 효과를 추정하였다. 1메가 베이스페어의 구간으로 구성된 유전체 전장의 2,516개 윈도우 별 유전분산 설명력을 계산한 결과 상위 1, 3 윈도우가 DGAT1유전자 주변에서 발견되었으며, 이 두 윈도우의 유전분산 설명력은 각각 0.51% 및 0.48%인 것으로 나타났다. DGAT1유전자는 유전체 선발에 상업적으로 이용되는 50k SNP chip에 포함되어있지 않기 때문에 직접적인 유전자의 효과가 명확하게 드러나지는 않지만 DGAT1 유전자에 인접한 단일염기다형성들간의 연관불평형에 의하여 주변 윈도우에서 가장 높은 유전분산 설명력을 보이는 것으로 사료된다.
우리나라에서 재배 수확한 6쪽 및 여러쪽 마늘을 클로로포름-메탄올-물(1.0 : 2.0 : 0.8)의 용매로 추출한 지방질의 조성을 분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 시료 마늘중의 총지방질의 함량은 신선물 100g 중 $310{\sim}342mg$였으며, 이중 중성지질은 $36.4{\sim}43.5%$, 당지질은 $20.3{\sim}24.3%$, 인지질은 $36.2{\sim}39.3%$이였다. 2. 중성지질중에는 TG가 가장 함량이 많았고(중성지질의 $80.5{\sim}83.6%$), 그 외에 SE, FS, FFA와 잠정적으로 동정한 1,3-DGA, 1,2-DGA, CA가 부성분으로 존재하였다. 3. 당지질중에는 ESG와 SG가 전체 당지질의 70%을 차지하는 주요성분이었고, 그 외에 DGDG, MGDG, CB, SL가 부성분으로 존재하였다. 4. 인지질중에는 PC와 PS 및 PE가 전체 인지질의 85%을 차지하는 주요성분이었고 그 외에 PI, PA가 부성분으로 존재하였다. 5. 총지방질 및 각 지방질 획분의 지방산 조성은 다같이 리놀레산, 팔미트산, 올레산, 리놀렌산이였다. 그러나 당지질 획분은 중성지질 및 인지질 획분보다 리놀레산의 함량이 적고, 중성지질 획분보다 팔미트산의 함량이 많으며 중성지질 및 인지질 획분은 당지질 획분보다 리놀렌산의 함량이 적었다.
세포막의 정보전달기전중 phosphoinositide system은 정보가 전달될때 phospholipase C 효소의 작용으로 phosphatidyl inositol bisphosphate로부터 inositol triphosphate($IP_3$)와 diacylglycerol이 생성되며 $IP_3$는 다시 $IP_3$kinase에 의해 inositol tetrakisphosphate($IP_4$)로 되어 이차전령 물로서 작용한다. 본 연구는 $IP_3$kinase효소가 $Ca^{2+}$와 calmodulin에 의해 활성화되는 성질을 이용하여 calmodulin을 정제하고 $IP_3$kinase효소와의 친화도를 비교 관찰하였다. Calmodulin정제는 phenyl-Sepharose resin을 이용하여 column chromatography를 시행하여 정제확인하였으며 분자량이 17,000임을 SDS-polyacrylamide gel 전기영동으로 확인하였다. 정제된 calmodulin을 affigel column에 결합시킨 gel에 소의 뇌로부터 분리한 $IP_3$kinase효소가 담긴 시료를 calmodulin-affigel column에 적용하여 결합 및 유출정도를 비교하였으며 $Ca^{2+}$이 든 buffer에서 친화도가 가장 컸으며 유출은 EGTA용액에서 일부 유출되었으며 calmodulin/$Ca^{2+}$이 든 buffer에선 강한 유출정도를 관찰하였다. 그러나 calmodulin/$Ca^{2+}$는 $IP_3$kinase효소의 활성을 증가시키며 calmodulin이 단백질이어서 정제면에서 효소와의 분리가 쉽지않아 여러 다른 detergent를 적용하였으나 0.2% chaps buffer에서 집중된 유출을 관찰하였다.
We previously reported that some components of ginsenosides decreased mediator releases evoked by the activation of mast cells with specific antigen-antibody reactions. This study aimed to assess the effects of ginsenosides ($Rb_2$, Re) on the mechanism of histamine release in the mast cell activation. We partially purified guinea pig lung mast cells by using enzyme digestion, the rough and the discontinuous percoll density gradient method. Mast cells were sensitized with $IgG_1$ and challenged with ovalbumin (OA). Histamine was assayed by fluorometric analyzer, leukotrienes by radioimmunoassay. Phospholipase D (PLD) activity was assessed more directly by the production of $[^3H]phosphatidylbutanol$ (PBut) which was produced by PLD-mediated transphosphatidylation in the presence of butanol. The amount of 1,2- diacylglycerol (DAG) were measured by the $[^3H]DAG$ labeled with $[^3H]palmitic$ acid or $[^3H]myristic$ acid. Pretreatment of $Rb_2$ ($300\;{\mu}g$) significantly decreased histamine release by 60%, but Re ($300\;{\mu}g$) increased histamine release by 34%. Leukotrienes release in $Rb_2$ was decreased by 40%, Re was not affected in the leukotrienes release during mast cell activations. An increasing PLD activity during mast cell activation was decreased by the dose-dependent manner in the pretreatment of $Rb_2$, but Re pretreatment facilitated the increased PLD activity during mast cell activation. The amount of DAG produced by phospholipase C (PLC) activity was decreased by $Rb_2$ pretreatment, but Re pretreatment was not affected. The amount of mass DAG was decreased by $Rb_2$ and Re pretreatment during mast cell activation. The data suggest that $Rb_2$ purified from Korean Red Ginseng Radix inhibits the DAG which is produced by the activation of mast cells with antigen-antibody reactions via both phosphatidylinositide-PLC and phosphatidylcholine-PLD systems, and then followed by the inhibition of histamine release. However, Re increases histamine release by stimulation of DAG production, which is mediated by phosphatidylcholine-PLD system rather than by phosphatidylinositide-PLC system, but inhibits the mass DAG production. Thus, it could be inferred that other mechanisms play a role in the increase of histamine release during mast cell activation.
The study was designed to observe the effect of blend fat calculated from the foods consumed in Korean with those of perilla oil, beef tallow and corn oil on colonic mucosal phospholipid fatty acid composition and the levels of TXB2 and diacylglycerol (DAG) which were known as biomarkers for cancer. Male Sprague Dawley rats, at 7 weeks of age, were divided into control and 1, 2-dimethylhydrazine (DMH)-treated group, and each group was subdivided into four groups. The experimental diets contained one of four dietary fats, blend fat (BF), perilla oil(PO), beef tallow (BT) or corn oil (CO), at 15% (w/w) level. At the same time, each rat was injected with saline for control group or DMH twice a week for 6 weeks to give total dose of 180mg/kg body weight. DMH injection, regardless of the type of dietary fats, significantly increased the levels of PGE2 and TXB2 in colonic mucosal layer compared to control (p<0.01). However, the level of eicosanoids was influenced by the types of dietary fats in both control and DMH group. In control groups, colonic mucosal level of TXB2 was higher in beef tallow group, but lower in perilla oil group compared to that of blend fat (p<0.01). In DMH groups, the level of TXB2 was higher in beef tallow and corn oil groups(p<0.05). The level of PGE2 showed the same trends with TXB2 and beef tallow most significantly increased the level of PGE2. DMH treatment did not influence on tissue fatty acid profile, which was directly reflected by dietary fatty acid composition. Proportions of C18 : 2 in colonic mucosal phospholipid well reflected dietary level of C18 : 2 showing the order CO>BF>PO>BT. The precentage of arachidonic acid(AA) in mucosal phospholipid was the highest by CO adn BT groups and the lowest by PO group. The incorporation of $\alpha$-linolenic acid in colonic mucosal phospholipid in perilla oil group was negatively correlated to the content of AA. Dietary level of C18 : 2 might not be the only controlling factor for the production of eicosanoids in colonic mucosa layer and might function with $\omega$3 fatty acids. The level of DAG was significanlty lower in PO group than that of BT group. Therefore, $\omega$3 $\alpha$-linolenic acid rich perilla oil could be very important dietary sourec in controlling eicosanoid production DAG level in cloln and recommenced to use more often in meal preparation to reduce the risk factor against colon cancer.
식이성지방 n-6/n-3비(1 : 2) 및 포화지방산:단순불포화지방산:다가불포화지방산비(1:1:1)를 일정하게 조정한 조건하에서 n-3계 지방산, ${\alpha}-LA(C_{18:3}),\;EPA(C_{20:5}),\;DHA(C_{22:6})$를 함유시킨 식이를 조제하여 성장기 SD-계 흰쥐 수컷에 2주간 급여하여 간장, 혈청의 Triacylglycerol(TG)농도 및 간장 TG 합성에 관여하는 효소 활성에 대하여 검토하였다. 본 실험에 사용한 EPA 및 DHA 는 순도 98%로서 고도로 정제한 ethyl ester 형태로 식이에 첨가하였다. 그 결과, ${\alpha}-LA$군에 비하여 EPA군 및 DHA군에서 간장 및 혈청 TG 농도는 유의적으로 감소하였으나, 총콜레스테롤 농도는 유의차가 인정되지 않았다. 간장의 인지질 농도는 DHA군에서만 유의적으로 증가하였다. 간장 막 결합성 phosphatidate phosphohydrolas(PAP)성은 간장TG 농도와 같은 경향으로서 EPA와 DHA군에서 유의하게 감소하였으며 Diacylglycerol acyltransferase(DGAT) 활성은 각 군간에는 변화가 없었다. 따라서, 간장TG 농도와 간장 막결합성 PAP활성과의 사이에 높은 상관관계(r=0.84)를 나타내어 간장TG 합성억제가 인정되었다. 지방산 합성계 효소의 활성도는 EPA및 DHA군에서 감소하였다. 이상의 결과로부터 n-3계 지방산, EPA 및 DHA에 의한 간장 및 혈청 TG 농도의 감소는 막 결합형 PAE 활성과 저해에 의한 간장TG 합성 및 지방산 합성 저해가 관여하는 것이 시사되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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