26종 콩과식물 종실의 메탄올 조추출물의 Bifidobacterium adolescentis, B. longun, B. bifidum, Lactobacillus casei에 대한 생육촉진 및 생육억제 활성을 탄소원 배지와 비탄소원 배지를 이용하여 in vitro 혐기조건하에서 각각 분광학적 및 여지확산법으로 검정한 결과 생육반응은 공시세균과 콩의 종류에 따라 달리 나타났다. 콩과식물 종실중, 대두(밝은 청색 종실)와 땅콩 (짙은 갈색 종실) 추출물은 유산균의 생육을 촉진하였는데, 이러한 결과로 부터 이들 콩과식물 종실에 탄소원과 비탄소원의 비피더스 인자의 존재를 알 수 있었다. 공시 유산균 중에서 L. casei에서 가장 현저한 생육측진 반응을 나타내었다. 또한, 모든 콩과식물 종실시료는 상기 유산균의 생육을 저해하지 않았다.
본 연구에서는 당근을 원료로 하여 Bifidobacterium을 배양하여 발효하며 Bifidobacterium의 배양특성을 살펴보았다. Bifidobacterium의 다양한 균주를 $10^6\;CFU/mL$ 수준으로 접종하여 배양하였을 때 B. longum, B. adolescentis, B. infantis 균주들은 $10^8\;CFU/mL$ 이상으로 자랐고 B. bifidum 균주들은 약간 성장이 저조하여 $10^8\;CFU/mL$ 이하 수준으로 자랐다. 당근 이외의 다른 원료로서 포도, 사과, 오렌지, 복숭아, 배추, 오이 등에 배양하였을 때 복숭아, 오렌지 등에서는 배양이 양호하였으나 포도에서는 Bifidobacterium의 성장이 일어나지 않았다. L. acidophilus와 혼합 배양시 Bifidobacterium 단독 배양시보다 균의 증식이 저하되었고 배양 24시간 후부터 Bifidobacterium의 사멸이 현저하게 일어났다. Bifidobacterium 배양에 의하여 당근의 산미가 증가되며 관능성이 개선되는 것으로 나타났다. 따라서 Bifidobacterium을 이용한 당근 발효식품 개발은 Bifidobacterium균주의 증식에 의한 기능성 증가와 당근의 관능성 개선에 도움이 될 것으로 생각된다.
건강한 성인의 분변으로 부터 호기적인 평판배지에서의 생육이 가능한 비피더스균을 선별 분리하는 조건과 상기 분리주의 특성을 규명한 결과는 다음과 같다. 1.5%의 탈섬유소 말혈액을 첨가한 BLB Agar Medium에 인체 분변을 호기적으로 표면 배양하여 내산소성 비피더스균 변이주를 분리하였다. 상기 분리주는 BLB Agar Medium 평판배지에 호기적으로 배양 했을때 $1.1\;{\times}\;10^9$ cfu/ml 이상의 높은 균수를 유지하였다. 2. 상기의 내산소성 비피더스균 분리주를 BLB Agar Medium 에 호기적으로 배양했을때 0.5mm, 연유갈색, 원형, 융기상의 윤택한 집락을 형성하였으며 현미경 검경 결과 Y 자형 분지상과 V자형 만곡간균상, 팽윤상 등의 전형적인 비피더스균 형상으로 나타냈다. 3. 탄수화물 발표실험 결과 상기의 내산소성 비피더스균 분리주는 Bif. adolescentis 로 동정되었으며 F6PPK GKA효소 활성 함께 매우 높은 ${\alpha}$-Galactosidase, $\beta$ - Galactosidase, ${\alpha}$-Galactosidase, 효소 활성을 나타냈다. 한편 아무것도 첨가하지 않은 순수한 우유 중에서의 발효성 및 호기적인 생육능이 매우 양호하였다.
Mugwort was successively fractionated with n-hexane, chloroform, ethyl acetate, n-butanol and water and the fractions were evaluated by their growth-promoting activites for Bifidobacterium sp. in vitro experiments. The growths of Bifidobacterium adolescentis, B. bifidum, B. infantis and B.longum were enhanced with the addition of the water fraction, while the fractions of chloroform and ethylacetate inhibited Clostridium perfringens. When the wate fraction was added to media at a concentration of 0.01-0.5%(w/v), the growhts of Bifidobacterium sp. were increased according to the concentration of water fraction used. The water fraction stimulated also the growth of lactobacillus acidophillus, whereas those of E. coli and Enterococcus faecalis were not affected. The growth-promoting activity of water fraction was stable at the range of pH 2 to pH 10 and kept in thermal treatment at 10$0^{\circ}C$ for 30 minutes.
Park, Jong-Hyun;Han, Nam-Soo;Yoo, Jin-Young;Kwon, Dong-Jin
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제3권4호
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pp.285-291
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1993
Growth responses of some intestinal bacteria such as bifidobacteria and Clostridium perfringens to the extracts of certain foodstuffs were investigated in vitro. Among edible mountain herbs, the extracts of several chui-na-muls (Aster tataricus, Ligularia fischeri and Aster scaber) had an inhibitory activity against C. perfringens on the agar plate and the water extract of Aster scaber worked selectively on it among intestinal bacteria. The water extract showed growth-promoting effect toward bifidobacteria such as B. adolescentis, B. animalis, B. bifidum, B. infantis and B. thermophilum in the broth culture. When the faecal inoculum was incubated in the culture with the extract, the population of C. perfringens decreased, whereas that of bifidobacteria increased by $10^3$ scale.$\beta$-glucuronidase activity in the culture with the water extract of Aster scaber digested with pepsin and pancreatin was lower than that in the control culture.
The present study was undertaken to obtain the basic knowledge on the distribution of intestinal microflora and characterization of Bifidobacterium isolated from the intestine of cattle, pigs, chicken and dogs. Bacteroidaceae and Streptococcus were isolated from the feces of cattle as predominant organisms, and Bifidobacterium was in counts of $8.65{\pm}0.21$ log 10 organisms. Bacteroidaceae, Eubacterium and Peptococcaceae counts on the feces of pigs were particularly high, but Bifidobacterium did not isolated. In hens and dogs, the counts of Bifidobacterium were $7.60{\pm}0.71$ and $8.15{\pm}2.04$ log 10 organism, respectively. Isolated 7 Bifidobacterial strains were identified respectively to B. thermophilum from cattle, B. pullorum and B. animalis from pigs, and B. longum, B. adolescentis and B. pseudolongum from dogs by their carbohydrate fermentation ability.
The effects of food grade fructooligosaccharide (FOS), isomaltooligosaccharide (MOS), galactooligosaccharide (GOS), and inulin on the growth of five strains of bifidobacteria in fermented milk were investigated. Their effect on culture viability during refrigerated storage was also determined. FOS showed the highest growth-promoting activity for all bifidobacteria except for Bifidobacterium bifidum. Growth rates of B. adolescentis, B. breve, and B. infantis were stimulated by oligosaccharides and inulin, whereas B. longum growth was stimulated by the oligosaccharides but not inulin. In contrast, growth of B. bifidum was enhanced only by inulin. Both acetic and lactic acid production by Bifidobacterium spp. was also enhanced in the presence of 5.0% oligosaccharides. The viability of bifidobacteria cultured with oligosaccharides and inulin, particularly with FOS, was significantly higher than control cultures after 4 weeks of refrigerated storage. The utilization of oligosaccharides is likely to enhance the growth rate, activity, and viability of bifidobacteria.
Bifidobacterium의 효과적인 산업적 이용을 위해서는 산소에 내성이 강한 균주를 선발하는 연구뿐만 아니라, 산소 존재하에서 비피도박테리아의 내성기작을 규명하는 기초적인 연구도 필요하다. 산소에 민감한 B. adolescentis 균주와 산소내성 B. longum JI-1균주의 용존산소 제거능을 비교한 결과산소 민감성 균주는 총존산소를 전혀 제거하지 못하였으나 산소내성 균주는 10분 이내에 3%이상의 용존산소를 제거하여 총존산소 제거능과 Bifidobacterium의 산소내성과는 밀접한 관계가 있음을 알 수 있었다. 이 B. longum JI-1 균주를 미호기성 조건에서 배양하여 내산소성 돌연변이 균주인 B. longum ADJ-1 균주를 분리하였다. B. longum ADJ-1과 모균주의 특성을 당자화능, NADH 산화효소 및 세포지방산등으로 비교하였을 때 차이점을 발견하지 못했으며, 균생육은 B. longum ADJ-1이 모균주의 80% 정도를 보여 주었다. 그러나 B. longum ADJ-1는 매우 두꺼운 slime layer를 형성하였는데 confocal scanning laser microscopy에 의한 분석 결과 돌연변이 균주는직경이 약 6 $\mu\textrm{m}$에 이르는 층을 형성한 반면 모균주는 약 3 $\mu\textrm{m}$인 층을 형성하였다. 그리고 돌연변이 균주는 산소에 24시간 이상 노출되었을 경우 모균주에 비하여 더 큰 산소내성을 보여주었다. 그러므로 돌연변이 균주의 산소내성의 증가는 slime layer 차이에서 유래된 것으로 생각되며 이는 Bifidobacterium의 내산소성 기작중의 하나인 것으로 보인다.
DEAE-sephadex ion exchange column chromatography에 의해 Bacillus sp. 유래 h-mannanase의 정제를 수행하여 비활성은 21.57 units/mg, 정제배율은 93.78배를 나타내었다. 최적 온도는 5$0^{\circ}C$, 최적 pH는 6.0이며, 온도 안정성에서는 30∼5$0^{\circ}C$에서는 90%이상의 잔존활성을 나타내었고,70∼8$0^{\circ}C$에서는 30%이하의 잔존활성을 나타내었다. pH 안정성에서는 pH 5.5∼7.0에서 100%의 잔존활성을 나타낸 반면 pH 2.0∼4.0에서는 40%이하로 감소되 었다. 정제효소에 의해 konjac glucomannan을 가수분해하여 1차 activated carbon column chromatography와 2차 sephadex G-25 gel filtration 에 의해 당가수분해물을 분리 회수하여 TLC및 FACE에 의해 주요 당가수분해물은 중합도 5와 7로 확인되었다. B. iongum, B. btfidum, B. infantis, E. adolescentis, B. animalis, B. breve의 생육활성에 대한 중합도5와7의 영향을 검토하기 위하여 modified-MRS배지상에 탄소원으로 중합도 5와 7을 대체하여 생육활성을 비교한 결과 B. longum의 경우 특징적으로 각각 4.67, 5.33배의 상대활성을 나타내어 우수한 생육활성을 나타내었다. 또한 B. breve에 대해서는 중합도 5 glucomannooligosaccharide를 처리시 2.42배의 생육활성을 나타내었으나 B. infantis와 B. adolescentis에 대해서는 중합도 5와 7의 올리고당을 탄소원으로 대체시 오히려 생육활성이 현저히 감소되었다.
정제효소에 의해 locust bean gum galactomann을 가수분해하여 activated carbon column chromatography에 의해 당가수분해물을 분리 회수하여 TLC에 의해 주요 당가수분해물은 중합도 4와 6의 hetero type으로 확인되었으며 D.P. 4의 구조식은 비환원말단 mannose로 부터 2번째에 1분자의 galactose가 결합하고 있는 hetero type의 구조인 ${Gal^2}{Man_3}(6^2-mono-O-{\alpha}-D-galactopyranosyl-4-O-{\beta}-D-mannotriose)$로, D.P. 6의 구조식은 비환원말단 mannose로부터 4번째에 1분자의 galactose가 결합하고 있는 hetero type의 구조인 ${Gal^2}{Man_5}(6^2-mono-O-{\alpha}-D-galacto-pyranosyl-4-O-{\beta}-D-mannopentaose)$로 유추하고 있다. B. longum, B. bifidum, B. adolescentis, B. animalis, B. auglutum, B. breve의 생육활성에 대한 중합도 4와 6의 영향을 검토하기 위하여 modified-MRS배지 상에 탄소원으로 중합도 4와 6를 대체하여 생육활성을 비교한 결과 B. longum에서는 D.P 6 galactomannooligosaccharide를 탄소원으로 대체한 경우 표준 MRS배지와 비교하여 10배의, D.P. 4을 처리한 경우에도 7.6배의 상대 활성을 나타내어 가장 우수한 생육활성을 나타냈었으며, B. bifidum의 경우에서도 D.P 6에서 6.6배, D.P 4에서 4.8배의 활성을 나타내었으며 B. animalis에 있어서는 D.P. 6의 경우 3.8배의 상대활성을 나타내었다. Bifidobacterium 7균주 모두에 대해서 중합도 6의 올리고당이 중합도 4의 올리고당보다 생육활성에 크게 기여하는 것으로 나타났다. 신규 MRS 배지의 제품화와 관련하여 가장 유리한 탄소원 대체소재는 Bacillus sp. 유래 galactosyl mannooligosaccharide 인 ${Gal^3}{M_4}$가 가장 유리한 소재로 결정되어 신규 배지의 scale-up 공정을 구축중에 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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