Kim, Chae-Kyun;Shim, Mi-Ja;Choi, Eung-Chil;Kim, Byong-Kak
The Korean Journal of Mycology
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v.24
no.2
s.77
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pp.135-141
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1996
Auxotrophs and drug resistant mutants from the mycelia of Lentinus edodes were obtained by UV irradiation at survival rates of $0.024{\sim}2.45%$ and ethidium bromide (EtBr) enrichment after UV irradiation. The mutation rate was 0.40%, and back mutation rate was $4.81{\times}10^{-4}{\sim}8.46{\times}10^{-4}$. Various amino acid-, nucleic acid-, and vitamin-requiring auxotrophs were isolated. The concentrations of several fungicides, antibiotics and amino acid analogues inhibiting the growth of L. edodes were determined. The MIC values for cycloheximide, benomyl, and p-fluorophenylalanine were 2, 2000, and 1000 ug/ml respectively. Five p-fluorophenylalanine-resistant mutants and eight benomyl-resistant mutants were selected by UV irradiation.
Some crude drugs in ancient literatures have been used as traditional therapeutic agent of leucorrhea mainly caused by Trichomonas vaginalis and Candida albicans. Sixty six kinds of crude drugs in ancient literatures and ten constituents were selected as sample drugs. Trichomycin standard was tested to compare with the above drugs. To determine the anti-fungal effect of these drugs on Candida albicans Yu 1200, a test organism, screening test was conducted. Antifungal activities of crude drug water extracts were observed by means of two test methods : firstly through the agar slant method and secondly the counting chamber method which was used for acknowledged drug agents upon the result of the agar slant method. And in order to improve the fungicidal effect, the organisms were stained with 0.02% methylene blue solution. The results of the above test indicated that Fritillariae Rhizoma has antifungal action in the concentration of 310mcg/ml, Coptidis Rhizoma in 620mcg/ml, Meliae Cortex, Scutellariae Radix both in 5,000mcg/ml. Baicalin, catechol among the pure isolated constituents inhibited in the range of 50mcg/ml. This score was based on 50% inhibition in comparison with amounts of control organisms. Rhei Rhizoma, Mori Radicis Cortex, Linderae Radix, and Amomi globosi Fructus showed the antifungal effect moderately in 5,000mcg/ml, and baicalein and pectolinarin in 50mcg/ml in the limit of between 35% and 50% antifungal activity. Staining with 0.02% methylene blue showed that any of the crude drug extracts was unable to stain the cells, but trichomycin in 0.86unit/ml able to stain 12% of the cells. This result means that crude drugs probably do not have fungicidal but fungistatic action.
Biological antagonists of Phytophthora capsici were isolated from soil in Gyeongbuk, Korea. Among the isolated bacteria, a Bacillus sp. was identified from l6S rDNA sequence analysis and named Bacillus sp. AM-651. Bacillus sp. AM-65l strain which can strongly a antifungal activity against Phytophthora capsici. Culture conditions for the maximum production of the antagonistic substance were optimized. The production of antibiotic were high on modified Davis mineral medium pH 7 at $30^{\circ}C$. The medium for highest production of the agonistic substance optimized. It is composed the best activity on glucose, $(NH_4)_2SO_4$ and $K_2HPO_4$ at 0.5%, 0.1%, and 0.7%, respectively. By time course of culture solution selected Bacillus sp. AM-65l, the culture solution after 48hrs had strongly growth inhibition rate against P. capsici. And culture solution of Bacillus sp. AM-651 was stable within a pH range $5{\sim}11$ and temperature range $4{\sim}70^{\circ}C$. Bacillus sp. AM-651 cultured broth shown fungal growth inhibitory activity against B. sorokiniana, B. cinerea, R. solani avove and beyond P. capsici and comparatively showed a high activity against C. gloeosporioides, B. dothidea, B. cinerea and F. graminearum by agar diffusion method.
In order to study the influence of a 6'-methyl group in ring C of griseofulvin ${\underline{(1)}}$ on the fungicidal activity, 6'-methyl group was replaced with a larger phenyl group as $({\pm})-6'-phenylgriseofulvin$${\underline{(3)}}$, $({\pm})-6'-epiphenylgriseofulvin$${\underline{(4)}}$, synthesized by a Diels-Alder cycloaddition. Their biological activities were examined against Botrytis allii (IFO 9430) and B. cinerea (AHU 9573). $({\pm})-6'-Phenylgriseofulvin $${\underline{(3)}}$ showed high activity in $25\;{\mu}g/disc$.
We found out the new method of the consortium for the environmental friendly agriculture by 8 kinds of the selected antagonistic rhizobacteria. This research involved composition of mutual complementary consortium by each antagonistic function such as production of antibiotic, siderophore, antifungal cellulase and insoluble phosphate solubilization. The consortium No.11 among composed consortium candidates showed the most pepper growth promoting activity and Phytophthora blight suppression on the in vivo pot test of red-pepper plant. The consortium No. 11 is combination of PGPR Bacillus subtilis AH18 and Bacillus licheniformis K11. B. subtilis AH18 and B. licheniformis K11 both could produce the auxin, antifungal ${\beta}$-glucannase and siderophore. Also, they had mechanism for solubilization of insoluble phosphate. But, B. licheniformis K11 could produce the antibiotic of iturin which was able to inhibit Phytophthora capsici. We confirmed complementary noncompetitive mutualism between B. subtilis AH18 and B. licheniformis K11 of the consortium No.11. The results came out through treatment of two strains co-culture, treatment of individual culture and co-treatment of two individual cultures for the growth and Phytophthora blight suppression of red-pepper. The treatment of two strains co-culture didn't show a synergic effect in comparing sole treatment on the pepper growth promotion and Phytophthora blight suppression. But, when the pots were treated simultaneously with co-treatment of two individual cultures, an synergic effect was seen in the growth promotion of roots, stem, leaves and suppressed Phytophthora blight on red-pepper in vivo pot test.
Kim, Kangmin;Lee, Hwa-Yong;Bae, Wonsil;Cho, Min;Ryu, Hojin
The Korean Journal of Mycology
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v.47
no.4
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pp.417-425
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2019
Biocontrol agents (BCAs) are widely used to protect plants from diverse biotic and abiotic stresses in agricultural and ecological fields. Among the various microbes, many subspecies of the gram-positive genus, Bacillus, have been successfully industrialized as eco-friendly biological pesticides and fertilizers. In the current study, we demonstrated that Bacillus thuringiensis C25 exhibited antagonistic effects on the mycelial growth of Rosellinia necatrix, a fungal phytopathogen. Scanning electron microscopy analysis revealed that B. thuringiensis C25 degraded the cell wall structures of R. necatrix mycelia. In the functional genomic analysis of B. thuringiensis C25, we annotated 5,683 genes and selected the gene sets that potentially encoded fungal cell wall degrading enzymes (CWDEs). The growth inhibition effects on R. necatrix were highly correlated with the transcriptional activity of the mycelial cell wall degrading genes of B. thuringiensis C25. The transcript levels of CWDEs, including CshiA, B, and Glycos_transf_2 genes in B. thuringiensis C25, were enhanced following co-cultivation with R. necatrix. In conclusion, our study suggested that B. thuringiensis C25 could serve as a suitable candidate for controlling R. necatrix and could facilitate elucidating the mechanisms underlying the antifungal activities of BCAs against phytopathogens.
In order to isolate novel oligotrophic bacteria exhibiting antifungal activities, soils were collected from pepper-cultivated fields of Yeongyang, Jecheon, Nonsan, Eumsong and Goesan area in Korea. From soils in pepper cultivated area, a total of 9,354 strains were isolated as oligotrophic bacteria by the R2A dilution method. Among 9,354 oligotrohic bacteria candidates, 1A strain was selected by screening against Phytophthora capsici causing phytophthora blight of hot pepper in the greenhouse and field. The strain was identified as Bacillus vallismortis based on its 16S rDNA sequence and key characteristics as compared with those of authentic cultures of B. vallismortis(KACC 12149) and B. mojavensis(KACC 12096). The strain showed broad spectrum of antibiotic activity in vitro test, as revealed in its strong inhibitory activity to the genera Phytophthora, Collectotrichum, Botrytis and Fusarium, but not to Rhizoctonia and Magnaporthe. In pot experiments, infection rate of hot pepper in the non-treated pots was about 89%, while it was only 29% in the pots treated with 1A strain. The result indicated B. vallismortis 1A is a potential biocontrol agent for phytophthora blight of hot pepper
Marine organisms were investigated to identify the marine actinomycetes that produced noble bioactive compounds. Microorganism counts range from $2.1{\times}10^3\;to\;1.2{\times}10\;CFU/g$ of marine organisms. Actinomycetes constituted 0.01 to $0.5\%$ of culturable microbial community. We identified the marine actinomycetes that produced novel bioactive compounds. During the course of screening for bioactives from the marine microorganisms, we found that the strain in sponge had antimicrobial activities. From the morphological, cultural and various physiological characteristics, this strain was identified for Actinomycetes No. 101. The optimal compositions of culture medium for Actinomycetes No. 101 were starch 30g/l as carbon source, casamino acid 10g/l as nitrogen source. The optimal pH of medium and fermentation temperature were $6.5{\sim}7.0$ and $30^{\circ}C$, respectively. Fermentation has been conducted in the marine broth at $30^{\circ}C$ for 72 hour. The yield of fermentation got about 3g as dry weight(per liter of broth). The distribution of antimicrobial activity of Actinomycetes No. 101 was screened by paper disc. The extract of cultured cell and broth inhibited the growth of Staphylococcus aureus and Bacillus subtilis, but the inhibition action was week against yeast and mold.
An indigenous antagonistic bacterium Bacillus sp. 7079 was isolated from a local soil sampled at Kyongju area in Korea . The strain has strong antagonistic ability which was originated from multifunctional mechanisms of chitinase and antibiotic and is a powerful antagonistic biocontrol agent against red-pepper rotting fungus Phytophthora capsici and Wilt fungus Fusarium oxysporum. The chitinase might degrade the cell wasll for Fusarium species. The selected Bacilus sp. 7079 was identified as a Bacillus amyloliquefaciens 7079. The maximal production of the chitinase from B, amyloliquefaciens 7079 were obtained in chitin-yeast extract medium containing 0.7%, $K_2$$HPO_4$, $0.2KH_2$$PO_4$, 0.1% ($NH_4$)$_2$$SO_4$, 0.05% sodium cirate, 0.01% $MgSO_4$$7H_2$O, 0.1% yeast extract and 0.1% colloidal chitin after cultivation of 3 days at pH 7.0 and $30^{\circ}C$. The best carbon and nitrogen sources for the production of the chitinase from B amyloliquefaciens 7079 were determined to be 0.1% colloi- dal chitin and 0.15% proteose peptone NO 3 respectively, The antagonistic activity of B amyloliquefaciens 7079 was confirmed using P. capsici by in vivo pot test with red-pepper plant.
In oder to select an antifungal substance-producing antagonistic bacterium against Fusarium oxysporum casuing fusarium wilt on tomato, strain BK4 was isolated from local soil of Gyeoungbuk and was identified as Bacillus thuringiensis by 16s rDNA analysis, biochemical test, and Mcirolog TM 3.0 System. The antibiotic of B. thuringiensis BK 4 was highly produced at $30^{\circ}C$ in nutrient broth (pH 9.0). The crude antibiotic was even stable at $121^{\circ}C$ and more stable at slight alkalic condition than acid condition. It was also remained $50{\%}$ activity at pH 3.0. B. thuringiensis BK4 showed the inhibition of spore germination and the biocontrol ability against F. oxysporum causing fusarium wilt of tomato in vivo test. According to these results, B. thuringiensis BK4 was enough to use with a microbial agent for biocontrol against fusarium wilt.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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